三重四级杆液质联用法测定漱口水中西吡氯铵的含量

摘 要 目的 建立漱口水中西吡氯铵含量测定的方法。方法 采用三重四级杆液质联用法（TSQ-HPLC-MS/MS），色谱柱Kinetex C18 （100×2.1 mm， 2.6 ?m）， 流动相（A）为乙腈，（B）为乙酸铵/乙酸缓冲溶液（5 mmoL， pH=3.5） （A：B=80：20），流速 0.3 mL/min。质谱采用电喷雾离子源，正离子模式，选择离子监控模式（SRM）。结果 西吡氯铵在0.268-4.28 ?g/mL范围内线性关系良好，r为0.9987，平均加样回收率为102.2%，RSD为2.44%。结论 该方法快速简便，灵敏度高，重复性好，可用于西吡氯铵的质量控制。

关键词 西吡氯铵 漱口水 三重四级杆液质联用

前 言

西吡氯铵（Cetylpridinium Chloride，1-十六烷基吡啶氯化物，分子式为C21H38Cl2N），是含氮阳离子表面活性剂，一般用作杀菌消毒剂，是防牙菌膜漱口水的有效成分。医学研究发现，0.1%西吡氯铵含漱液对单纯性牙龈炎患者牙菌斑形成具有抑制作用[1，2]；对牙龈炎、牙周炎具有明显疗效[3]；对口腔白色念珠菌感染的患者具有辅助治疗作用[4]；西吡氯铵片剂治疗复发性阿弗他溃疡，能够明显促进溃疡面愈合 [5，6]。文献[7]用毛细管区带电泳法测西吡氯铵片剂中的含量，但毛细管电泳法准确度较低，重现性较差，不宜推广使用。三重四级杆液质联用法是近年来快速发展的定量方法，具有灵敏度高、检测限低、选择性好的优点，在体外药物测定、杂质检测以及体内代谢测定等方面应用广泛[8～16]。本实验采用三重四级杆液质联用法（TSQ-HPLC-MS/MS）测定漱口水中的西吡氯铵含量。

1 试验部分

1.1 仪器与装置

TSQ Quantum Ultra三重四级杆液质联用仪：美国Finnigan公司产品，配有电喷雾离子源（ESI）及LCquan 2.6数据处理系统；pH计： Mettlter Toledo Delta 320；移液枪：2-20μL，20-200μL，大龙兴创实验仪器（北京）有限公司；纯水仪：Millipore公司，18.2Ω；天平：Sartorius BT-125D（ d=0.01mg）。

1.2 材料与试剂

西吡氯铵对照品（上海德默医药科技有限公司，纯度为98%），西吡氯铵含漱液（130302， 杭州民生药业有限公司），冷酸灵迅康抗敏感漱口水（121114110230，重庆登康口腔护理用品股份有限公司），高露洁-贝齿全面护理-10功能合一（1264TH1133，高露洁棕榄中国有限公司），高露洁-贝齿清新茶健（3047TH1133，高露洁棕榄中国有限公司），高露洁-贝齿鲜果薄荷味（2198TH1123，高露洁棕榄中国有限公司），乙腈（色谱纯，Fisher公司），乙酸铵（色谱纯，Dima 公司），甲醇（色谱纯，Fisher公司），乙酸（色谱纯，Fisher公司）。

1.3 试验条件

1.3.1 色谱条件 液相条件：Kinetex C18 （100 mm×2.1 mm， 2.6 ?m）， 流动相（A）为乙腈，（B）为乙酸铵/乙酸缓冲溶液（5 mmoL， pH=3.5） （A：B=80：20），流速 0.3 mL/min，柱温 30℃，进样量1 ?L。

1.3.2 质谱条件 电喷雾离子源（ESI）， 喷雾电压 3000 kV， 鞘气压力35 arb，辅助气压力为10 arb，毛细管温度 350℃，蒸发气温度为300℃，Tube lens补偿电压为100 V，正离子模式，选择离子监控模式（SRM），西吡氯铵的裂解电压为28 V，用于定量的母离子为m/z 304.297[M-Cl]+，定量子离子为m/z 80.090，进样量为1?L。

1.4 溶液配制

1.4.1 对照品溶液 准确称取西吡氯铵对照品溶液 1.07 mg， 置于200 mL的容量瓶中，加50%甲醇-水溶解并定容至刻度，摇匀，即得对照品储备液。分别取该储备液0.5 mL， 1.0 mL， 2.0 mL，4.0 mL， 8.0 mL分置5个10 mL的容量瓶中，加50%甲醇-水溶解并定容至刻度，摇匀，配置成浓度分别为0.268?g/mL， 0.535?g/mL， 1.07?g/mL， 2.14?g/mL， 4.28 ?g/mL 的系列对照品。

1.4.2 供试品溶液 取100 ?L 漱口水，置于100 mL 容量瓶中，以50%甲醇-水溶解并定容至刻度，即得供试样品。

2 结果

2.1 线性关系考察

取1.4.1项下溶液各1?L 注入色谱仪，按照1.3项下色谱质谱条件进样，测定峰面积，以西吡氯铵的浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y= 18471.3X-732985， r=0.9987。结果表明，西吡氯铵在0.268-4.28 ?g/mL范围内线性关系良好。

2.2 精密度实验

准确吸取对照品溶液，按照1.3项下色谱质谱条件，连续进样5次。结果显示RSD =1.90%，提示该方法精密度良好。

2.3 重复性试验

平行制备5份对照品溶液，按照1.3项下色谱质谱条件进行测定，结果为RSD =0.27%，说明该方法的重复性符合要求。

2.4 稳定性试验

取新配置的标准品溶液，按照1.3项下色谱质谱条件，分别在0， 2， 4， 8， 12， 24 h进行测定，结果，RSD =2.61%，说明该溶液的稳定性符合要求。

2.5 回收率实验

取已知含量的漱口水5份，精密加入西吡氯铵对照品储备液0.5 mL， 按照1.4项下制备溶液，按照1.3项下色谱质谱条件测定，计算回收率，结果西吡氯铵平均加样回收率为102.2 %，RSD =2.49%。

2.6 检测限测定

取最低浓度（0.268 ?g/mL）的西吡氯铵对照品溶液，分别稀释至不同浓度，按1.3项下色谱质谱条件，在正离子模式下使用单反应监测西吡氯铵，测定其最小检测限（S/N =3）。结果最小检测值为0.150 pg/mL。

2.7 样品测定

分别吸取2个不同浓度的对照品和不同厂商的漱口水各3份，按照1.4.2项下配制供试品溶液，按1.3项下色谱质谱条件测定，计算样品中的西吡氯铵的含量见表1。

3 讨论

在液相色谱条件优化时，通过调整流动相组成、比例以及缓冲液的类型以及pH值，得到正态、对称的谱图，确定了液相色谱最佳测定条件。在质谱条件优化的过程中，通过正负离子检测模式、不同离子源、裂解电压等质谱参数进行比较，发现在电喷雾电离正离子模式下灵敏度高，噪音小，从而确定质谱条件。

对5个不同来源的漱口水中的西吡氯铵的含量进行比较，发现民生药业的含漱液含量最高，高露洁的3款产品含量相近，冷酸灵品牌的含量最低。

采用三重四级杆液质联用法测定漱口水中西吡氯铵的含量，检测限可达0.150 pg/mL， 远远低于采用毛细管电泳法时的10.27 ?g/mL[7]。该方法灵敏度高，选择性好，检测限低，操作方便，可以推广作为西吡氯铵含量的评价方法。

致谢：本论文得到新药研究国家重点实验室（中国科学院上海药物研究所）开放基金资助（SIMM1106KF-12）和设备支持。

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