HPLC法测定心可宁滴丸中丹酚酸B的含量

摘 要：目的：对中药复方制剂心可宁滴丸中的丹酚酸B进行含量测定。方法：采用高效液相色谱法，以乙腈-0.1％磷酸水液（21.5∶78.5）为流动相；检测波长为286nm。结果：丹酚酸B在0.196～1.960 μg范围内均与色谱峰面积呈良好的线性关系，r为0.99996，平均加样回收率为97.83%（N＝5），RSD=3.33%。 结论：本方法快速简便，灵敏度和稳定性高，为心可宁滴丸的质量标准奠定了良好的基础。

关键词：高效液相色谱；心可宁滴丸；丹酚酸B

心可宁滴丸为卫生部药品标准中药成方制剂第九册（WS3B171494）收载的中成药经过改剂而成，由丹参、三七、冰片、蟾酥等八味中药组成，主要用于治疗冠心病、心绞痛、胸闷、心悸、眩晕等症［1］。中国药典2005年版一部中，丹参药材增加了水溶性有效成分丹酚酸B的含量测定［2］。由于心可宁滴丸制备工艺中丹参采用水提，故为了更好地控制产品质量，保证用药安全、有效，采用了高效液相色谱法对丹酚酸B含量进行测定，为心可宁滴丸的质量提高奠定了良好的基础，报道如下。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

仪器：Agilent1100高压液相色谱仪系列（美国），Sartorius BP211D电子分析天平（德国），电热恒温水浴锅（北京市医疗设备厂），超声清洗器（北京医疗设备二厂），丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所111562200403），心可宁滴丸（自制，批号分别为20070401、20070301、20070312）；试剂：乙睛为色谱纯，甲醇、磷酸等其它试剂均为分析纯，水为三蒸水。

12 方法与结果

1.2.1 色谱条件

Agilent Hypersil ODS（4.6mm*150mm，5μm）；乙腈－0.1％磷酸水液（21.5∶78.5）为流动相；检测波长为286nm。流速1.0ml/min，柱温25℃。理论塔板数按丹酚酸B峰计应不低于5000。

1.2.2 对照品溶液的制备

称取丹酚酸B对照品，置量瓶中，加水溶解，制成0.098mg/mL的溶液，摇匀，即得。

1.2.3 供试品溶液的制备

取心可宁滴丸适量，碾碎，取约0.4g，精密称量，置于100ml具塞锥形瓶中，加入水50ml称重，超声处理90min（250W，30kHz），取出，放冷，再称重，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液10ml，取续滤液过0.22um微孔滤膜，即得供试品溶液。

1.2.4 阴性对照溶液的制备

取缺丹参药材的配方混合物，按照供试品溶液的制备方法同法制备成溶液，作为阴性对照品。

1.3 方法学考察

1.3.1 标准曲线的绘制

分别吸取对照溶液2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、15μl、20μl注入色谱仪，以峰面积积分值（mAU*s）对进样量（μg）进行回归，得回归方程：Y=496.321X-3.078，r=0.99996，结果表明，丹酚酸B在0.196～1.96 μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。

1.3.2 稳定性试验

取同一批号供试品溶液，分别在0、2、4、8、16、24h的不同时间点进行测定，考察保留时间和峰面积的一致性，丹酚酸B的平均保留时间为11.69min，RSD为0.047%，平均峰面积为487.2 mAU*s，RSD为0.12%。

1.3.3 精密度试验

取上述对照品溶液，连续进样5次，考察色谱峰保留时间和峰面积的一致性。丹酚酸B的平均保留时间为11.64min，RSD为0.11%，平均峰面积为486.4mAU*s，RSD为0.25%。

1.3.4重现性试验

取同一批号供试品，称取5份，同法提取，检测，考察色谱峰保留时间和峰面积的一致性。丹酚酸B的平均保留时间为11.62min，RSD为0.34%，平均峰面积为486.5 mAU*s，RSD为131%。

1.3.5 回收率试验

取同一批号已测知含量的样品0.2g 5份，精密称定，分别准确加入1.20mg/mL对照品溶液各1mL，按供试品溶液制备方法进行提取，分别取10μL进样，测定，计算回收率，结果得到丹酚酸B平均加样回收率为97.83%，RSD=3.33%。见表1。

1.3.6 供试品的测定

分别取20070401、20070301、20070312批样品0.4g，精密称定，按供试品制备方法制备成供试品溶液，精密吸取供试品溶液10L，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，结果得到丹酚酸B含量分别为6.27mg/g、6.26mg/g、6.24mg/g。

2 讨论

在含有丹参的中药制剂中，特别是水提取工艺中，对丹参中的丹酚酸B进行含量测定对保证药品的安全、有效是必要的。曾以中国药典2005版一部丹参项下的流动相进行分析，结果分析时间较长，峰塔板数相对较低一些，而采用本文所述条件得到很好的分析效果，分析速度快，阴性无干扰。

采用甲醇、乙醇回流提取、甲醇超声和水超声提取等方法，以水溶液进行直接超声提取，避免了脂溶性成分对分离的干扰，丹酚酸B峰分离度好，峰塔板数高，且回收率良好；甲醇提取后蒸干再用水溶解进样分离，效果和水液基本一致，但操作繁琐一些，且回收率低于水提，故而确定丹酚酸B的含量测定采用水溶液直接超声提取。提取时间的选择采用水超声30、60、90、120min后进行考察测定，结果显示，在90min后提取基本完全，回收率考察达到了97.83％。

本文方法简便准确，稳定性、重现性好，为心可宁滴丸的质量控制和标准建立奠定了良好基础。

参考文献：

［1］ 刘东辉，李军，黄意甜.高效液相色谱法测定心可宁胶囊中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量［J］中国实验方剂学，2005，11（6）：26.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］北京：化学工业出版社，2005.

Determination of Salvianolic Acid B in XinKening Drop Pills by hplc

Abstract：Objective：To establish a method to determine salvianolic acid B in xinkening drop pills. Methods： The RpHPLC method was applied with Acetonitrile and 0.1％ H3PO4 water as mobile phase（21.5：78.5）， with detection wavelength at 286nm. Results： In the range from 0.196 to 1.960 μg， salvianolic acid B was in a good line with chromatograph peaks area，r=0.9996， the average recovery ratio is 97.83%（N=5），RSD=3.33%. Conclusions： The method is quickly simple with a high intelligent degree and stabilities. The method could be used to control quality effectively as a good base.

Key words：HPLC； XinKening Drop Pills； Salvianolic acid B