骨桥蛋白和CD44v6在非小细胞肺癌中的表达及意义

摘要　目的：探讨骨桥蛋白(OPN)和CD44v6在非小细胞肺癌中的表达与肺癌临床病理的关系。方法：应用免疫组织化学方法，分别检测OPN和CD44v6在56例非小细胞肺癌(30例鳞癌和26例腺癌)组织中的表达。结果：(1)56例非小细胞肺癌组织中OPN和CD44v6阳性表达率分别为71.4％、67.8％。肺鳞癌组和肺腺癌组中OPN和CD44v6的表达无差异性(P>0.05)。(2)肺癌中OPN和CD44v6的表达与肿瘤的淋巴结转移相关(P0.05)。结论：OPN和CD44v6可能在肺癌的发生、进展中起重要作用．联合检测OPN、CD44v6可作为判断肺癌患者预后的重要指标。

关键词　骨桥蛋白；肺肿瘤；CD44v6；转移

肺癌是我国发病率较高的恶性肿瘤之一，其中70％～80％为非小细胞肺癌，早期易发生转移，死亡率高。近年研究表明，骨桥蛋白(ostepondn，OPN)和CD44v6在肿瘤的浸润和转移过程中起着十分重要的作用。本文应用免疫组化方法检测肺癌组织中OPN和CD44v6表达，旨在探讨其表达与肺癌侵袭转移的关系，并分析两者在肺癌组织中表达的相关性。

1　对象与方法

1．1　对象：56例非小细胞肺癌组织标本取自我院病理科1999年10月～2006年3月手术切除的标本。其中男40例，女16例，年龄23～56岁，平均57.8岁。其中鳞癌30例，腺癌26例。所有标本均经4％中性甲醛溶液固定，脱水，常规石蜡包埋，作厚度4 μm的连续切片、烤片，并经病理组织学证实。

1．2　实验方法：主要试剂：OPN抗体(鼠抗人单克隆抗体，美国Antibody Diagnosis公司)，工作液浓度为1:100；鼠抗人单克隆抗体CD44v6(即用型)购自福建迈新试剂公司；免疫组化试剂盒为上海长岛试剂公司产品。

1．3　研究方法

1．3．1　免疫组织化学：常规石蜡切片脱蜡和水化后，用pH 7.4的0.01 mol／L的磷酸盐缓冲液(phosphate－buffered saline，PBS)洗涤3次，每次5分钟。电炉煮沸20分钟，以修复组织抗原，自然冷却至室温，PBS洗涤3次，每次5分钟。每片滴加3％的过氧化氢溶液1滴，室温下孵育15分钟，PBS洗涤3次，每次5分钟。每片滴加OPN(1:100稀释)及CD44v6抗体(即用型)，37℃恒温箱孵育1小时，PBS洗涤3次，每次5分钟。每片滴加生物素标记的二抗．室温30分钟，PBS洗涤3次，每次5分钟。每片滴加新鲜配制的3.3－二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)溶液，显微镜下观察3～10分钟。自来水冲洗，苏木素复染，0.1％盐酸分化。经梯度酒精脱水干燥，中性树脂封固，光学显微镜下观察、计数。本实验以PBS液代替一抗作为阴性对照。

1．3．2　阳性结果判断：细胞浆或细胞膜见棕黄色颗粒沉着者为OPN和CD44v6表达阳性细胞。每例标本选5个高倍视野．根据胞浆染色程度和染色细胞所占百分比进行评分。染色程度：基本不着色为O级；着色呈淡黄色为1级；着色呈黄色为2级：着色呈棕褐色为3级。染色阳性细胞百分比：着色阳性细胞占计数细胞

1．4　统计学方法：采用X检验和Spearman等级相关分析，P

2　结果

2．1 OPN和CD44v6在非小细胞肺癌组织中的表达：OPN主要在肿瘤细胞胞浆、胞膜中表达，显色为棕黄色颗粒或团块状沉积，阳性表达率为71.4％。CD44v6阳性表达率为67.8％，主要在肿瘤细胞胞膜阳性表达，少量肿瘤细胞胞浆阳性表达。

2．2　非小细胞肺癌组织中OPN和CD44v6表达与肿瘤临床病理特性的关系：OPN和CD44v6的表达均与肿瘤的淋巴结转移相关(P0.05)。

2．3　OPN和CD44v6在非小细胞肺癌组织中的表达的相关性分析：采用Spearman等级相关分析OPN和CD44v6在56例非小细胞肺癌组织中表达的染色阳性细胞百分比分级。结果显示两者之间有显著性相关(r＝0.75，P

3　讨论

肿瘤的侵袭转移是一个多因素、多阶段的复杂过程。它是癌症患者致死的主要原因，但肿瘤侵袭转移的分子机制较为复杂，由于对其机制缺乏深入的了解，难以采取有效措施以防止癌症浸润和转移。OPN是一种具有多种生物学活性的分泌型磷酸化糖蛋白，它含有Arg－Glr－Asp(RGD)序列。可与其整合素、CD44等受体相互作用，促进恶性细胞的趋化、粘附和迁移在许多肿瘤细胞中表达上调并与肿瘤的侵袭转移等方面关系密切。CD44v6是一种存在于细胞表面整合的跨膜糖蛋白，是粘附分子家族成员之一，它能介导淋巴细胞归巢并参与细胞间的粘附过程，在恶性肿瘤侵袭转移等方面发挥着重要作用。研究表明CD44v6也是OPN受体，OPN主要通过Arg－Gly－Asp(RGD)序列依赖性与CD44v6相互作用，但也可通过非RGD序列依赖性途径与其受体CD44v6结合，在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。

56例非小细胞肺癌组织中OPN和CD44v6表达，结果发现OPN表达主要位于癌细胞质。而其受体CD44v6表达主要位于癌细胞膜表面。细胞外基质也有部分阳性表达，表明OPN及CD44v6主要是由癌细胞分泌，两者可能在非小细胞肺癌发生发展中起重要作用。同时发现非小细胞肺癌组织中OPN和其受体CD44v6表达呈正相关(r=0.75，P