川楝胶囊对经前期综合征肝气逆证猕猴模型表情行为及微观指标的影响

[摘要] 目的 探讨川楝胶囊对经前期综合征肝气逆证猕猴模型表情行为及微观指标的影响。 方法 采用择时挤压造模法，并以放射免疫法和毛细管电泳法分别测定其血清及尿中激素、递质水平。结果 川楝胶囊可显著改善模型猕猴表情行为异常，并对造模刺激所致模型猕猴雌二醇水平的下降和对泌乳素、5-羟色胺、去甲肾上腺素水平的上升起到一定的纠正与调节作用，使其恢复至接近正常水平。 结论 川楝胶囊对经前期综合征肝气逆证所引起的单胺类神经递质和性激素及其调节激素分泌紊乱有一定的治疗作用，这一发现为病证的临床药物干预提供了药效学实验依据。

[关键词]肝气逆证；猕猴模型；激素；神经递质；川楝胶囊

[中图分类号] R259 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）23-32-04

经前期综合征（premenstrual syndrome，PMS）肝气逆证以经前期情绪激动、烦躁易怒、失眠、及小腹胀痛等为主要症状，系由肝疏泄太过而导致肝气上逆所致[1]。川楝胶囊根据以上病机和主症，立疏肝理气、除胀止痛为法，临床调查结果证实可有效缓解PMS肝气逆证患者症状表现。为了解川楝胶囊干预PMS肝气逆证作用机制，本研究采用择时挤压造模法、放射免疫法和毛细管电泳法，探讨了川楝胶囊对经前期综合征肝气逆证猕猴模型表情行为及微观指标的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

雌性青年实验猕猴24只，体质量4～5kg，4～5岁，月经正常，由苏州西山中科实验动物有限公司提供[SYXK（苏）2002-0032]。

1.2 药品及试剂

放射免疫药盒：天津九鼎，批号112308。标准品：由美国SIGMA公司提供。经前平颗粒：江苏扬子江药业集团公司，批号：040216。川楝胶囊（自制），批号：20010604-5。

1.3 仪器

实验猕猴自动挤压造模保定装置（山东中医药大学和武汉大学计算机学院联合开发）；盒式录像机HR-S9500EK（北京中西远大科技有限公司）；监视器SP-309（松下电器实业有限公司）；照相机（松下电器实业有限公司）；毛细管电泳仪HP3D（美国Agilent公司）；LD5-10自动平衡微量离心机（北京京立离心机有限公司）。

1.4 实验方法

1.4.1 雌性实验猕猴性周期（即月经周期）的划分方法 正常雌性实验猕猴性周期平均约为28d。根据实验猕猴月经周期性皮肤（指面部、腿根、尾根、生殖器、等部位皮肤）的变红、舒张、肿胀、消退、恢复的周期性变化结合阴道涂片镜检法[2]将其月经周期分为卵泡期、黄体期、经前期和月经期四个时期，具体见表1。

1.4.2 雌性实验猕猴表情行为的观测方法 按表1的划分判定雌性实验猕猴的期属，安装录相机、监视仪，每日上午

1.4.3 猕猴造模给药实验方法 将24只雌性青年猕猴依随机数字表分为 6组，分别为正常对照组、模型组、经前平颗粒阳性对照药组及川楝胶囊大、中、小剂量组，每组4只。模型及给药组猕猴于月经周期的黄体期（约月经周期第17天）开始造模，此时将雌猴赶入自动挤压保定造模装置，挤压，以猕猴稍能活动为限，每天挤压5h（从上午9：00～下午2：00），连续挤压造模7d（约月经周期第17～23天）（不挤压时猕猴仍处于造模装置内），同时开启装置自带监控摄像头监视其表情行为变化，并手动录像拍照，连续造模2个月经周期[2]。给药组猕猴造模同时给药，经前平颗粒阳性对照组剂量为0.4g成药/kg体质量，灌胃给药。川楝胶囊大、中、小剂量组用量分别为 2.25g生药/kg、1.35g生药/kg、0.45g生药/kg，灌胃给药。给药时间为每天上午9：00，每日1次，连续7d。造模结束后将猕猴放归原笼，结束造模后的第1个月经期、经前期，同样监视其表情行为变化，并录像拍照。

2个月经周期造模结束后即分别对各组猕猴取血，收集尿样。取血尿时期为模型猕猴症状呈现期即经前期（约为月经周期第24～28d任意一天）。后肢大隐静脉取血4mL，放入离心机以3000r/min离心15min，取血清；尿样以集尿器采集，去除毛发和粪便等杂物，离心备用。血清和尿中催乳素（PRL）、雌二醇（E2）、孕酮（P）含量以放射免疫法测定；血清及尿中5-羟色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、肾上腺素（E）、去甲肾上腺素（NE）的含量则以毛细管电泳法测定。

1.5 统计学方法

应用SPSS13.0统计软件，数据用（）表示，多组样本均数比较采用单因素方差分析及LSD-t法检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 造模及给药后猕猴宏观表现观察

挤压造模期间（黄体中晚期），猕猴性皮肤及表情行为与正常对照组猕猴相较稍见差异，放回原笼后至下一次月经来潮以前的一段时间（经前期）其表情行为却有明显差异。具体表现为：造模组猕猴较正常对照组明显活动量大，并跳跃蹬腿，扬眉煽耳，口作吼吼声，摇笼泄愤，作势扑人或攻击他猴，给药后其活动量明显减少，攻击性明显下降，表情亦渐趋正常平稳，表现较为安静，与未进行造模刺激前表现类似。上述情况改善以川楝胶囊大、中剂量组为优，川楝胶囊小剂量组及经前平颗粒阳性对照药组次之。

3 讨论

PMS是指育龄妇女反复于黄体中晚期周期性出现的躯体、精神以及行为等方面改变，月经来潮后，症状明显减轻或消失，因其极大影响患者生活质量而受到国际医学界广泛关注[3-5]。其病因迄今不明，可能是由于激素水平和（或）脑内神经递质水平变化引起。目前除精神疗法与饮食疗法外，药物疗法没有取得明显进展，仅是激素疗法、维生素疗法等[6-7]。本研究用纯中药制剂川楝胶囊治疗经前期综合征肝气逆证，从宏观及微观两方面探讨其对经前期综合征肝气逆证的治疗，具有一定的理论价值及应用前景。

3.1 川楝胶囊对PMS肝气逆证猕猴模型血清及尿中神经递质水平的影响

从表2～3中可以发现PMS肝气逆证猕猴模型组血清及尿中5-HT明显上升，血清DA和E水平均无显著性差异。血清NE水平均较正常组上升，有非常显著性差异。情绪的生理机制和单胺类神经递质含量变化关系密切，目前公认血浆NE、E水平可作为反映交感-肾上腺髓质功能状态的可靠指标[8]，而5-HT则与觉醒和睡眠、丘脑下部分泌调节及情绪生理反应等机能有关[9]，外周血小板中5-HT的含量变化则可间接反映中枢脑区活动状态[10-11]。模型组猕猴类似PMS肝气逆证患者的急躁易怒表情和行为变化可能即因上述指标波动而致交感神经兴奋，机能亢进有关[12]，而以川楝胶囊干预后，其大中剂量组可显著纠正和调节造模刺激所致模型猕猴血清、尿中5-HT水平上升及NE水平上升，使其恢复至接近正常水平，且整体疗效较阳性对照药经前平颗粒为优，因而可显著改善模型猕猴出现的上述“症状”。但川楝胶囊是否对中枢不同脑区内神经递质异常也有类似的调节作用，则尚待进一步证实。

3.2 川楝胶囊对PMS肝气逆证猕猴模型血清及尿中激素水平的影响

从表4～5中可以发现接受造模刺激后猕猴血清及尿中E2、P显著下降，PRL水平则明显上升，反映了PMS病理、生理改变。泌乳素分泌增加影响雌激素和孕激素的合成和分泌，导致下丘脑-垂体-性腺轴的功能紊乱，并引起情绪激动、烦躁易怒等临床表现[13]，而PRL水平上升则可能是因5-HT水平上升直接刺激垂体分泌而引发的连锁反应[14]。5-HT水平上升进而刺激PRL水平上升，影响雌激素和孕激素生成代谢从而引发烦躁易怒样“症状”可能是猕猴模型发病深层机制[15]，而川楝胶囊中、小剂量组可对抗模型猕猴血清中PRL水平上升，能够使其恢复或接近正常生理水平；川楝胶囊大、中剂量组则可显著纠正和调节造模刺激所致模型猕猴血清、尿中E2水平的下降，且大、中剂量组对模型猕猴外周血中E2异常波动纠正作用较阳性对照药经前平颗粒为优，因而可发挥改善以上“症状”的作用。但川楝胶囊对模型猕猴血清及尿中P干预作用则不明显，未见显著性差异，可能与实验中各组猕猴样本量过小，造成统计偏倚有关。

综上，上述结果证实川楝胶囊对经前期综合征肝气逆证所引起的单胺类神经递质和性激素及其调节激素分泌紊乱有一定的对抗和治疗作用，这可能是川楝胶囊能改善病证患者临床症状的可能作用机制之一，以上结论为病证的临床药物干预提供了药效学实验依据。

[参考文献]

[1] 高冬梅，乔明琦，张惠云，等.建立反映经前期综合征肝气逆证疗效评价的实验室参考指标[J].药学与临床研究，2008，16（6）：423-427.

[2] 张惠云，魏盛，乔明琦.愤怒郁怒诱发经前期综合征病证结合猕猴模型的建立及行为学评价[J].实验动物与比较医学，2010，30（6）：406-409.

[3] Qiao M，Zhang H，Liu H，et al.Prevalence of premenstrual syndrome and premenstrual dysphoric disorder in a population-based sample in China[J].European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology，2012，162（1）：83-86.

[4] Ibrahim RM，Soliman SM，Mahmoud HM.Effect of vitex agnus custus （VAC） on premenstrual syndromes among nursing students[J].Journal of American Science，2012，8（4）：144-153.

[5] Dante G，Facchinetti F.Herbal treatments for alleviating premenstrual symptoms： a systematic review[J].Journal of Psychosomatic Obstetrics & Gynecology，2011，32（1）：42-51.

[6] 乐杰.妇产科学[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2000：381.

[7] Dickerson LM，Mazyck PJ，Hunter MH.Premenstrual syndrome[J].American Family Physician，2003，67（8）：1743-1752.

[8] Goldstein DS，McCarty R，Polinsky RJ，et al.Relationship between plasma norepinephrine and sympathetic neural activity[J].Hypertension，1983，5（4）：552-559.

[9] Graeff FG，Guimar?es FS，De Andrade TGCS，et al.Role of 5-HT in stress， anxiety， and depression[J].Pharmacology Biochemistry and Behavior，1996，54（1）：129-141.

[10] Oreland L，Hallman J.Blood platelets as a peripheral marker for the central serotonin system[J].Nordic Journal of Psychiatry，1989，43（S20）：43-51.

[11] Yubero-Lahoz S，Robledo P，Farre M，et al.Platelet SERT as a peripheral biomarker of serotonergic neurotransmission in the central nervous system[J].Current medicinal chemistry，2013，20（11）：1382-1396.

[12] 王海苹，魏盛，宗建成，等.白香丹胶囊对经前期综合征肝气逆证模型猕猴表情行为及性激素的影响[J].中成药，2010，32（5）：732-735.

[13] Yonkers KA，O'Brien PM，Eriksson E.Premenstrual syndrome[J].The Lancet，2008，371（9619）：1200-1210.

[14] Anderson IM，Ware CJ，da Roza Davis JM，et al.Decreased 5-HT-mediated prolactin release in major depression[J].The British Journal of Psychiatry，1992，160（3）：372-378.

[15] 乔明琦，张惠云，于艳红，等.经前期综合征肝气逆证患者月经周期血清雌二醇、孕酮含量的动态变化[J].中医杂志，2006，47（4）：295-297.

（收稿日期：2013-12-04）