HSP27和BIRC6的表达与大肠癌预后的关系

【摘要】 目的 探讨HSP27和BIRC6在大肠癌中的表达及其与预后的关系。方法 收集182例临床预后资料完整的大肠癌标本，用免疫组化染色HSP27和BIRC6抗体，观察HSP27和BIRC6表达情况。采用χ2和Spearman等级相关检验，研究大肠癌HSP27和BIRC6的表达率与临床病理特征的关系。生存曲线采用Kaplan-Meier生存分析方法。通过多因素Cox比例风险模型分析各变量对生存期的影响。结果 研究发现，大肠癌组织中HSP27表达率为79.7%(145/182)；而BIRC6表达率较低，为47.3%(86/182)。单因素分析显示HSP27的表达率与肿瘤的TNM分期相关(P

【关键词】 结直肠肿瘤； 免疫组织化学； 热休克蛋白27； 杆状病毒凋亡抑制重复含体6

大肠癌在西方发达国家恶性肿瘤中发病率居第3位，而在我国其发病率有不断上升的趋势［1，2］。本研究拟研究大肠癌组织中热休克蛋白27(HSP27)和杆状病毒凋亡抑制重复含体6(BIRC6)的表达，以探讨将HSP27和BIRC6用于大肠癌的临床预后判断的应用前景。

1 资料及方法

1.1 一般资料 经本地区伦理委员会同意，收集惠州市中心医院2004年1月~2005年12月有预后结果的182例诊断为大肠癌的患者常规石蜡包埋的病理组织标本。组织切片经1名病理学专家核实并记录相关数据。预后随访采用电话或书信方式随访途径，所有病例均有5年以上随访资料。

1.2 试剂及免疫组化染色方法 染色采用免疫组化SP法，一抗为兔抗人HSP27和BIRC6多克隆抗体，均购自abcam公司；HRP标记羊抗兔多聚体(产品编号:PV6001)、DAB显色液试剂盒、一抗稀释液、枸橼酸盐缓冲液(pH 6.0)均购自北京中衫金桥公司。

1.3 结果判断 判断标准：根据阳性细胞在全部癌细胞中所占比例以及阳性细胞染色强度判定实验结果。A：按显色细胞数记分，阳性细胞数2/3为3分。B：按细胞显色深浅记分，无阳性反应细胞为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。积分数=A×B。A×B=0判断为(-)，A×B=1~2判断为(+)，A×B=3~4判断为(++)，A×B=6~9判断为(+++)。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计学软件包完成统计学分析。BIRC6表达水平与临床病理特征之间的关系采用χ2检验；各参数之间的相关性采用Spearman等级相关检验。多因素COX比例风险模型分析各因素对生存期的影响。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 临床病理学特征 182例大肠癌患者中男105例，女77例，男∶女=1.36∶1；年龄20～87岁，中位年龄61岁。TNM分期中0、I期占15.9%(29/182)，组织分化程度以低分化癌为主，占81.0%。见表1。

2.2 HSP27和BIRC6在大肠癌组织中的表达情况 运用免疫组织化学方法检测HSP27和BIRC6在大肠癌中表达。在182例大肠癌标本中，37例(20.3%) HSP27表达阴性，145例(79.7%)阳性(包括弱阳性、阳性、强阳性)。96例(52.7%) BIRC6表达阴性，86例(47.3%)阳性(包括弱阳性、阳性、强阳性)。将表达阴性或弱阳性者归类为低表达，表达阳性或强阳性者归类为高表达。

经统计分析，HSP27表达水平与性别(P=0.677)、年龄(P=0.194)、分化程度(P=0.220)、肿瘤大小(P=0.170)无相关性，而与TNM分期(P=0.003)相关；BIRC6表达水平与性别(P=0.298)、年龄(P=0.181)、发病部位(P=0.227)及肿瘤大小(P=0.114)无相关性，而与分化程度(P=0.042)、TNM分期(P=0.043)相关，见表2。通过Spearman相关分析提示，HSP27表达率与TNM分期有Spearman相关，而BIRC6表达率与TNM分期、分化程度有Spearman相关，见表3。

2.3 生存分析 HSP27低表达组大肠癌患者生存期明显长于高表达组患者。Log生存分析证实，大肠癌组织中HSP27低表达与高表达患者生存期差异有统计学意义 (P=0.000)。HSP27低表达与高表达患者中位生存时间分别为43.22个月(95%可信区间38.47~47.97)和26.97个月(95%可信区间21.69~32.23)。COX单因素分析显示，TNM分期(P=0.000)和HSP27(P=0.000)；多因回归分析显示HSP27表达率、TNM 分期可作为判断大肠癌预后一个的预测指标(P0.05)，提示BIRC6作为判断大肠癌预后的预测价值有限。

3 讨论

大肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，随着人民生活水平的提高，饮食中脂肪成分增多，纤维成分减少，大肠癌的发病率有逐年上升的趋势。尽管大肠癌的治疗手段有了很大的进步，但5年生存率依然很低。癌的侵袭转移是患者预后差和死亡的主要原因。在大肠癌细胞的形成、生长、浸润和转移过程中，细胞因子的作用是多方面的。它们常与肿瘤细胞的分裂、增殖有关，还有的与肿瘤细胞的凋亡、细胞周期的调控有关。抑制肿瘤细胞的凋亡，将导致肿瘤恶性增殖，并可引起肿瘤对化疗药物的耐受性增加，对预后将产生不良影响。

热休克蛋白作为“分子伴侣”在细胞凋亡过程中起调节和稳定细胞的作用，并通过调控细胞周期中所必需的蛋白构象参与细胞的增殖、死亡过程。HSP27为HSP家族中重要的一员，近年研究发现［3］，HSP27在人正常组织和肿瘤组织中均有表达，并在大肠肿瘤中存在着持续高水平表达，被认为与大肠癌的发生、发展、肿瘤免疫以及对大肠癌化疗耐药的发生和肿瘤的预后都有密切的关系。

杆状病毒凋亡抑制重复含体6(Baculoviral inhibitors of apoptosis repeat-containing 6, BIRC6)又称为Bruce蛋白，是近年发现的一种新的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins, IAPs）。BIRC6蛋白的过度表达，可以抑制多种因素，如TNFR、Fas受体介导的、柔红霉素诱导的以及去除生长因子后引起的细胞凋亡［4］。BIRC6在正常细胞中，除了在分裂的细胞之外，它在成熟的终末分化组织中基本无表达，而在胚胎发育过程中和人的大部分肿瘤组织中表达，很可能是一个新的肿瘤标记物［4］。

本研究结果显示，大肠癌组织中HSP27表达率为79.7%(145/182)；单因素分析显示HSP27的表达率与肿瘤的TNM分期相关(P

综上所述，本研究表明，HSP27表达率与大肠癌患者预后不良相关，可能是大肠癌患者的预后因素。而BIRC6表达率与大肠癌患者预后不良可能相关，但其表达率较低，因此BIRC6表达水平作为判断大肠癌预后的预测价值有限。

参 考 文 献

［1］ 余志金，许岸高，张晓慧，等.惠州市2004年恶性肿瘤死因分析.实用医学杂志，2006，22(1)：101-102.

［2］ 许岸高，余志金，钟旭辉，等.大肠癌高危人群筛查研究.中华医学杂志，2010,90(2):116-118.

［3］ Zhijin Yu, Junli Zhi, Xiaofeng Peng, et al. Clinical signifcance of HSP27 expression in colorectal cancer. Molecular Medicine reports，2010，3(6):953-958.

［4］ Salilew-Wondim D, Holker M, Rings F, et al. Depletion of BIRC6 leads to retarded bovine early embryonic development and blastocyst formation in vitro.Reprod Fertil Dev,2010，22(3): 564-579.

（收稿日期：2011-08-01）