时间：2022-08-02 05:04:25
[摘要] 目的 检测p130、cullin-1和p53在子宫浆液性腺癌（USAC）中的表达，探讨其临床病理意义。 方法 全面手术病理分期的USACⅠ期病例10例，正常增生期子宫内膜组10例作为对照。检测p130、cullin-1和p53蛋白表达及mRNA水平。 结果 USAC病例组与正常增生期子宫内膜组相比，p130蛋白和p130 mRNA在USAC中的表达减少，而cullin-1蛋白和cullin-1 mRNA表达升高。 结论 USAC有独特的临床和病理特征，USAC中cullin-1蛋白和cullin-1 mRNA表达增加，以cullin-1为中心的SCF复合体介导的泛素-蛋白酶水解过程失活，可能与上述改变有关。USAC中p53蛋白表达增多，而p130蛋白和p130 mRNA表达减少，可能与USAC患者预后较差有关。
[关键词] 子宫浆液性腺癌；p130；cullin-1；p53；免疫组织化学
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）03-0040-02
The expressions of cullin-1, p130 and p53 in uterine serous adenocarcinoma
DING Lijuan1 XUE Debin2 TENG Xiaodong3 XU Shaoting4 ZHANG Suojiang5
1.Department of Gynaecology and Obstetrics, Ningbo Wemen and Children's Hospital, Ningbo 315012, China; 2.Department of Pathology, Ningbo Wemen and Children's Hospital, Ningbo 315012, China; 3.Department of pathology, the First Affiliated Hospital of Zhejiang University, Hangzhou 310000, China; 4.Department of Gynaecology and Obstetrics, the First Affiliated Hospital of Zhejiang University, Hangzhou 310000 China; 5.Department of Pathology, the Affiliated Women's Hospital of Zhejiang University, Hangzhou 310000, China
[Abstract] Objective To examine the expression of cullin-1, p130 and p53 in uterine serous adenocarcinoma （USAC） and discuss their clinicopathologic features. Methods Ten cases of USAC as FIGO stage I with full surgical and pathologic stage were scolled up, controlled with 10 cases of normal endometium. The expression of p130, cullin-1 and p53 protein were determined immunochemically, and the level of p130 and cullin-1 mRNA was examined by real-time RT-PCR. Results Compared with the expression of protein and mRNA in USAC cases and normal controls, the expression of p130 protein and mRNA in USAC was decreased, meanwhile the expression of cullin-1 protein and mRNA in USAC increased. Conclusion USAC has a distinctive clinical and pathologic feature. There was an increased expression of cullin-1 protein and mRNA in USAC, and the SCF complex, which was centered by Cullin-1, might take part in the above changes. Meanwhile, There was an increased expression of p53 and decreased expression of p130 protein and p130 mRNA in USAC, which might reflect the fact that the USAC patients suffered a bad clinic outcome.
[Key words] Uterine serous adenocarcinoma; p130; Cullin-1; p53; Immunochemistry
子宫浆液性腺癌（uterine serous adenocarcinoma，USAC）是一种少见的特殊类型子宫内膜癌，具有高度恶性生物学行为。我们检测了USACⅠ期病例10例，用免疫组织化学方法检测USAC标本中p130、cullin-1和p53蛋白表达，并用RT PCR方法检测p130和cullin-1 mRNA表达，结合临床随访资料分析探讨这些分子标记物的临床病理意义。
1 材料与方法
1.1 材料
回顾宁波市妇儿医院病理科2000年1月～2005年12月有电脑档案记录的所有子宫内膜癌病例（共332例），复习原切片及免疫组织化学等病理资料，根据2003年版WHO女性生殖器官肿瘤学分类标准[1]，从中筛选出具有完整临床资料、经过全面手术病理分期的USAC 31例典型病例（占同期子宫内膜癌的9.3%）。所有病例均由2位富有诊断经验的妇科病理学医师确诊或会诊，均有典型免疫组织化学表达。合作医院提供30例相同条件病例。随访4～9年。根据FIGO标准（2001版）[2]，选择10例全面手术病理分期为FIGOⅠ期病例，用于检测分子标记物；选择10例正常增生期子宫内膜作为对照。
1.2 方法
获取存档蜡块，重新制作HE切片，并进行免疫组织化学染色（EnVision法），将具有典型组织学表现和免疫组织化学表达特征者纳入临床病理研究对象。复习原病理档案大体检查、病理分期等资料。复习病历档案，获得临床信息（包括年龄、民族、体质量、手术分期、其他患癌史、家族史、糖尿病史、孕产史等）以及术后治疗。通过术后复查记录和电话联系获得随访资料。免疫组织化学试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司，并在该公司完成免疫组化实验。RT PCR实验由上海康成生物技术有限公司完成。
1.3 免疫组化结果处理
p130阳性定位于细胞核，可表达于正常增生期子宫内膜。用图像处理软件，计算每例免疫组化阳性细胞百分数，每张切片上典型表达区域计数10个高倍视野，取其平均值作为综合计分（半定量资料），用于统计学处理[3]。
cullin-1阳性定位于细胞核。用图像处理软件，将免疫组化阳性细胞百分数乘以阳性强度（1+，2+，3+），作为综合计分（0~300）。cullin-1可表达于正常组织，作为内对照，其强度2+，计分80~120。将肿瘤细胞计分>120者视为cullin-1过表达[4]。
1.4 p130和cullin-1 mRNA结果处理
用看家基因GAPDH（不同样品间基本恒定）作为内参，以样品待测基因的值除以此样品内参的值，最终得到的比值为样品的待测基因的相对含量，为定量资料。
1.5 统计学处理
采用SPSS11.5统计软件，采用卡方检验法比较不同分期患者术后3年和5年生存数、复发数。用t检验法比较p130和cullin-1免疫组化数据和基因检测数据，比较USAC组与正常增生期子宫内膜组之间的统计学差异。
2 结果
所有病例均为典型USAC Ⅰ期病例，免疫组织化学检测其p53蛋白（突变型）表达率都超过95%，而对照组不表达p53蛋白；p130蛋白在USAC组和正常增生期子宫内膜组表达的综合计分分别为（0.46±0.01）和（0.91±0.04）。与正常增生期子宫内膜组比较，USAC组表达p130蛋白显著增加（P ＜ 0.01）；p130 mRNA在USAC组和正常增生期子宫内膜组表达水平分别为（0.56±0.06）和（2.81±0.40），与p130蛋白表达减少相似，USAC组表达p130 mRNA水平比正常增生期子宫内膜组减少（P ＜ 0.01）；cullin-1蛋白在USAC组和正常增生期子宫内膜组表达的综合计分分别为（213.85±20.28）和（14.56±1.97），与正常增生期子宫内膜组比较，USAC组表达cullin-1蛋白显著增加（P ＜ 0.01）；cullin-1 mRNA在USAC组和正常增生期子宫内膜组表达水平分别为（7.86±1.04）和（5.38±0.53），与cullin-1蛋白过表达相似，USAC组表达cullin-1 mRNA水平均比正常增生期子宫内膜组升高（P ＜ 0.01），见表1。
3 讨论
在USAC发生机制的分子遗传学研究中，p53基因突变被认为是肿瘤发生过程中的早期事件[3]。cullin-1可能是肿瘤抑制物的成分，它参与构成SCF复合体，对p53水平有调节作用[4]，而p130可通过调节E2F-1基因表达产物，维持正常的细胞周期调控；p53突变时p130表达减少，从而失去对细胞周期的调节作用。可见，cullin-1、p53蛋白、p130三者形成一条潜在的调控通路，可能在USAC的发生、发展中发挥重要作用。
p53基因定位于染色体17p13.1，属于核结合蛋白。正常的p53蛋白在DNA损伤或缺氧时被激活，导致依赖于活化CDK的抑制物p21和DNA修复基因转录增强，细胞周期停滞于G1期并进行DNA修复。而在p53基因缺失或在发生突变时，DNA损伤后不能通过p53蛋白的介导而进入G1停滞和DNA修复，因此遗传信息受损的细胞可以增殖，最终可能发展成恶性肿瘤[5]。然而，临床病理工作发现，p53检测在USAC中的应用仅限于诊断和鉴别诊断，不能用于USAC的筛查或早期发现，也不能作为单独的预后指标。并且，p53在USAC发生中的机制仍未完全明了。
对乳腺癌细胞系MCF-7的研究表明，cullin-1参与构成SCF（FBXO31）复合体，后者具有肿瘤抑制物的特点。在对两个乳腺癌细胞系的研究中，cullin-1能抑制肿瘤细胞的克隆性生长，并抑制细胞增殖[6]。在乳腺癌细胞系中，SCF（FBXO31）调节细胞周期，在G2晚期向G1期过渡期间其表达量达到最高水平。对基因敲除小鼠胚胎纤维母细胞和人骨肉瘤细胞系U2OS的研究表明，在细胞周期调控中，cullin-1通过调控细胞周期基因的转录，对G（1）/S转换和有丝分裂过程有重要调节作用[7]。因此，cullin-1除了具有直接参与构成肿瘤抑制物、调节细胞周期的功能外，还对p53蛋白、Rb蛋白具有调控作用。以往的研究多认为p53突变是USAC发生的早期事件，cullin-1改变是否可能是更早期的事件值得今后进一步研究。
p130蛋白为Rb基因表达产物之一，当细胞受到增生刺激时，Rb蛋白被磷酸化失活，使细胞进入S期；当细胞分裂成两个子细胞时，失活的（磷酸化的）Rb蛋白通过脱磷酸化再生使得子细胞处于G1期或G0期的静止状态。如由于点突变或13q14的缺失使Rb基因失活，则Rb蛋白表达出现异常，受累细胞就无障碍地进入S期，而可能由此恶变[5]。p130作为潜在的肿瘤抑制因子，具有抑制细胞从G1期进入S期的、促进细胞分化成熟、抑制肿瘤发生等作用外，还受到p53基因的调控，并且其作用途径可能与p53不同。在p53突变的情况下，是否可能通过调控p130基因的表达，或调控p130蛋白的功能，阻断p53突变所产生的致癌作用，这一疑问可能为本课题今后的进一步研究留下了较大的空间。
综上所述，USAC有独特的临床病理特征，其发病率相对较低，预后较差，临床表现和预后因素与内膜样癌有明显不同，因此其手术方法和术后辅助治疗方案也不能等同于典型的内膜样癌。有必要收集大宗病例进行多中心临床试验以寻求合适的治疗方案。通过研究USAC发病机制以寻找靶向治疗目标和药物，可能具有广阔前景。本研究表明，p53、p130和cullin-1蛋白以及p130和cullin-1 mRNA在USAC中的表达均发生变化，并且与USAC预后有关。深入研究这些分子标记物在USAC中的作用机制以寻找潜在的靶向治疗目标和药物，具有广阔前景。
[参考文献]
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（收稿日期：2011-10-13）