快繁技术在铁皮石斛中的应用研究进展

摘要 铁皮石斛是兰科附生植物，是中药石斛中的名贵品种，具有极高的药用价值和经济价值。本文从铁皮石斛离体培养外植体选择、基本培养基选择、激素对植物不同时期生长的影响及添加剂对离体快繁的影响等几个方面研究情况进行了总结。在此基础上，也对其前景进行了新的展望。

关键词 铁皮石斛；组织培养；快速繁殖；研究进展

中图分类号 R282.7 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）13-0082-02

铁皮石斛（Dendrobium officinale kimura et Migo），亦称黑节草、铁皮枫斗等，为兰科石斛属多年生附生植物。铁皮石斛作为一种名贵中药，多年来一直位于“九大仙草”之首，根据《中国药学大辞典》[1]的记载，其具有滋阴养胃、清热生津、益智定志、清肺明目等功效。但由于长期地进行无保护性的采挖，加之铁皮石斛的自然繁殖率低、生长缓慢，自然资源面临枯竭的危险，被列为国家重点保护药用植物、中国珍稀濒危二级保护植物和世界二类保护植物[2]。为了适应越来越大的市场需求，近年来研究者们在铁皮石斛组织培养快速繁殖获得大量成株、人工栽培等方面进行了大量研究，取得了较大进展。

1 外植体选择

外植体的选择对于组织培养是否成功有着极其重要的影响。目前，作为铁皮石斛组织培养外植体的主要材料有种子、原球茎、茎段、茎尖等，其中以带节茎段和种子作为外植体培养的居多。但在戴小英[3]等人的研究中表明，铁皮石斛种子和茎段在诱导的初始条件、增殖方式、增殖系数、继代周期、根的诱导分化及苗木移栽等方面存在一定的差异。通过比较试验认为，铁皮石斛快繁体系建立以茎段外植体为更佳。

2 基本培养基

铁皮石斛所采用的基本培养基大多为MS、1/2MS。郑志仁等[4]在对比试验后得出，MS和1/2MS效果相差无几，综合考虑材料来源及价格等因素，确定后续试验选用MS作为基本培养基。但在周俊辉等[5]的研究中认为铁皮石斛外植体在B5基本培养基的条件下生长是最好的。而斯金平等[6]认为，以MS 为基本培养基，种子萌发率和丛生芽增殖率较高，而1/2MS在诱导丛生芽时效果较好。

3 激素的影响

激素在铁皮石斛外植体再生过程中起着不可替代的作用。不同的激素种类对于外植体的生长发育的作用不同。在铁皮石斛外植体的生长发育过程中大多选用NAA和6-BA等2种激素配合使用，针对不同需求，将2种激素以不同配比进行添加。此外，KT、IBA等激素在铁皮石斛外植体生长中也较常用。

3.1 原球茎诱导

在宋 顺等[7]的研究结果中显示：最适合铁皮石斛原球茎诱导的培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L，原球茎诱导率为95%。但在王丽萍等[8]的研究中，铁皮石斛原球茎诱导的最佳培养基中不仅加入0.6 mg/L 6-BA、0.5 mg/L NAA，还加入1.0 mg/L 2，4-D，在此激素组合下不仅原球茎诱导率较高，且诱导时间较短。

3.2 原球茎增殖

在原球茎增殖的过程中，不同的激素浓度会产生不同的结果。经过蒋 林等[9]的研究认为NAA 1.0 mg/L+KT 0.2 mg/L对原球茎的增殖起着促进作用。而斯金平等[10]人发现6-BA 0.5～1.0 mg/L+NAA l.0 mg/L+KT 1.0 mg/L的激素配比原球茎增殖最佳。

3.3 芽诱导

常用的细胞分裂素有KT、ZT、6-BA等，在朱 艳等[11]人进行的铁皮石斛茎段培养研究中，将这3种激素进行比较，结果表明6-BA的作用效果最好，形成的丛芽多，6-BA在2 mg/L浓度时能打破顶端优势，形成丛生芽。张红梅等[12]认为芽诱导增殖以MS+6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L为最好，茎段外植体生长健壮。芽分化和诱导率较高，诱导率可达86.7%，为茎段最适初代培养基。邹 娜等[13]研究发现，茎段外植体接种于MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基上，腋芽诱导率可达95%以上。

3.4 芽增殖

黄昌艳等[14]在铁皮石斛芽分化增值试验后发现，最适宜的芽增殖培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L，增殖率可达到286.7%。但章晓玲等[15]研究认为芽增殖的最适培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 1.5 mg/L。

3.5 生根

何 晔等[16]在对铁皮石斛组织培养研究后表明，最佳生根培养基为MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L。而在梁淑颖等[17]的研究中认为，2.0 mg/L的NAA可以促进铁皮石斛的生根。张书萍等[18]从不同激素浓度的6-BA对铁皮石斛壮苗生根的影响进行比较得出，不加6-BA的培养基小苗生根率低、发根迟、根数少，而加入6-BA后可以大幅度地提高生根率，尤以在6-BA 0.4 mg/L的培养基中小苗生根快，根数量多。

4 添加剂影响

唐桂香等[19]研究表明，在培养基中添加2%活性碳铁皮石斛原球茎增殖倍数高。椰子汁、香蕉泥、苹果汁、马铃薯汁等添加物对铁皮石斛组织培养过程中也有重要影响。孙 丹等[20]认为椰子汁对铁皮石斛原球茎增殖有较好的效果良好。刘炜等[21]研究证实，添加香蕉泥可使增殖的原球茎大而健壮，颜色浓绿，分化程度较低，且紧密程度较好。此外，香蕉泥、苹果汁、马铃薯汁、椰子汁也都能促进铁皮石斛的壮苗生根，蒋 波等[22]在用不同添加物进行试验后认为香蕉泥对生根效果最好。张启香等[23]研究发现，LH（水解乳蛋白）作为多种氨基酸的混合物，在原球茎诱导过程中具有良好的促进作用，用量以1 000 mg/L为宜。

5 前景

目前对于铁皮石斛组织培养的研究大多还围绕在培养基种类、激素种类与配比，以及一些外源添加物对外植体培养的影响等方面，但是在培养温度、湿度、光照强度等外在培养条件等方面的研究报道却相对较少，因此今后可在此方向上开展更多的研究试验，不仅对铁皮石斛的生长需求有更多的了解，而且可以有针对性地设置培养环境，以期使铁皮石斛以组织培养的方式进行更快更好的生长，最终达到大量生产种苗的目的，满足日益增长的市场需求。

6 参考文献

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