凋亡抑制因子XIAP在喉癌中的表达和意义

【摘要】 目的 探讨凋亡抑制蛋白xiap在喉癌组织中的表达及其临床意义。方法 从107例喉癌患者中,随机抽取42例喉癌及癌旁组织切片作对照,应用免疫组织化学二步法测定其XIAP蛋白的表达情况。结果 在42例喉癌及癌旁组织中,XIAP表达两组间比较差异有统计学意义(P

【关键词】 喉癌;凋亡;凋亡抑制蛋白家族;免疫组化

多年来,在喉全切除后行放射治疗是喉癌的标准治疗。凋亡抑制蛋白家族IAPs(inhibitor of apoptosis proteins)可能作为诱导肿瘤凋亡治疗的新靶点,其中XIAP(X染色体连锁凋亡抑制蛋白,X chromosome associated IAP)是作用最强的一个[1],其在喉癌的研究甚少,本研究采用免疫组化法检测XIAP在喉癌的表达及其与临床特征的相关性。

1 材料与方法

1.1 研究对象 所有标本来自南昌大学医学院第一附属医院2007年1月至2009年12月,共查找到喉癌患者107例,均为首次入院,未进行放、化疗及免疫药物等抗肿瘤治疗措施,肿瘤标本(术前均经新生物活检并HE染色病理证实)。其中男性99例,女性8例,男女比为12.38:1;年龄最大86岁,最小37岁,平均60.7岁;≥50岁有89例,

1.2 免疫组化S P染色

1.2.1 标本处理及试剂 全部标本按标准取材后,经4%多聚甲醛固定,石蜡包埋、切片(厚度为5μm)。XIAP(H 202)兔抗人多克隆抗体,工作液浓度为1:300;购自美国Santa Cruze 公司;SP免疫组化染色即用试剂盒,通用型(SP 9000,Histostain TM Plus Kits,北京中杉金桥);浓缩型DAB试剂盒(DAB Kit,ZLI 9032,北京中杉金桥);苏木素 伊红染色试剂盒(C 0021,HE Staining Kit,北京博奥森生物技术有限公司);

1.2.2 S P免疫组化法 常规烤片68℃,2 h后脱蜡至水;3%过氧化氢孵育37℃,20 min,去除内源性过氧化物酶活性;使用柠檬酸抗原修复液,行微波热抗原修复,置室温冷却;滴加试剂A山羊血清,37℃孵育1 h,封闭非特异性抗原;滴加一抗XIAP,浓度为1:300,4℃过夜,滴加生物素标记通用二抗,37℃孵育30 min;显微镜下DAB显色,以特异显色最强,而背景基本不着色为准; 苏木素染色7 min;1%的盐酸酒精中分化;1‰的氨水中返蓝;逆梯度酒精脱水,二甲苯Ⅱ、Ⅰ各2 min,置风箱风干后中性树脂封片。

1.2.3 结果判定 XIAP表达阳性的肿瘤细胞胞浆及胞核中出现棕黄至棕黑色颗粒。免疫组化结果采用Frank半定量计分法判定[2]:按阳性着色程度评分:胞浆和(或)胞膜基本不着色记0分,染色棕黄记1分,染色棕色记2分,染色棕褐色记3分;按阳性细胞占比例评分,每张切片400倍镜下数100个细胞,共数4个视野,计算阳性细胞平均数:阳性细胞数≤25%记1分,26%～50%记2分,51%～75%记3分,≥76%记4分;每张切片以阳性细胞百分率和染色程度两项得分乘积作为最后得分:0～1分判为阴性( );2～3分判为弱阳性(+);4～6分判为中等阳性(++);6分以上判为强阳性(+++)。

1.3 统计学处理 所有数据Excel软件整理,SPSS 16.0软件分析,使用单因素χ2检验对XIAP在癌及癌旁组织中的表达及临床病理相关性进行分析。

2 结果

2.1 XIAP在喉癌组织及癌旁对照组织中的表达 XIAP的免疫阳性产物均为棕黄色,定位主要在细胞浆,也可见于细胞核。XIAP在喉癌及癌旁组织中的表达分别为100%(42/42)、61.9%(26/42)。喉癌及癌旁组织比较,χ2=19.76,P

2.2 XIAP在不同临床特征下的表达 在42例喉癌中,XIAP的阳性表达率在临床病理分级两组间比较差异有统计学意义(P0.05)。

3 讨论

从本质上来讲癌症是一种基因病,如凋亡不足,将导致肿瘤的发生。人体内凋亡的主要执行者是一组半胱氨酸蛋白酶(Caspase)[3],而凋亡抑制蛋白家族(IAPs)是唯一的内生性Caspase抑制物。目前在人类已发现8种IAPs[4]:cIAP 1、cIAP 2、NAIP、XIAP、ILP 2、Survivin、Bruce及新成员Livin。

国内有实验表明[6],正常喉黏膜细胞中XIAP蛋白的表达显著低于喉癌组织中的表达,说明XIAP的表达与喉癌的发生、发展有关。此研究还证实,随着肿瘤的发展,喉癌组织中XIAP的表达是逐渐增高的;随着病理分级的增加XIAP的表达显著增高,XIAP的表达与喉癌的分化及恶性程度有关。另有实验表明[7],与正常喉黏膜组比较,喉鳞状细胞癌XIAP蛋白阳性表达显著增高(P

本研究通过两步法免疫组化,得出以下结论:XIAP的免疫阳性产物均为棕黄色,定位主要在细胞浆,也可见于细胞核;凋亡抑制蛋白XIAP在喉癌的发生发展中起重要作用,但和性别、年龄和有无颈部淋巴结转移差异无统计学意义。总而言之,XIAP在喉癌的发生发展中有重要意义,对其参与肿瘤发病机制的进行探讨,为喉癌的诊断和治疗提供了理论依据,对肿瘤基因治疗具有重要的指导意义。

参考文献

[1] Dean EJ,Ranson M,Blackhall F,et al.X linked inhibitor ofapoptosis protein as a therapeutic target.Expert Opin Ther.Targets,2007,11(11):1459 1471.

[2] Frank B,Michael V,Sylvia C,et al.Ras p21expression in progres sion of breast cancer.Hum Path,1987,18(12)1268 1275.

[3] Ozaki K,Hanazawa S.Porphyromonas gingivalis fimbriae inhibit Caspase 3 mediated apoptosis of monocytic THY 1 cells under growth factor deprivation via extra cellular signal regulated kinasedependent expression of p21 Cip/WAF1.Infect Immun,2001,69(8):4944 4950.

[4] Nachmias B,Ashhab Y,Ben Yehuda D.The inhibitor of apoptosis protein family (IAPs):an emerging therapeutic target in cancer.Semin Cancer Biol,2004,14(4):231 243.

[5] Rajcan Separovic E,Liston P,Lefebvre C,et al.Assignment ofhuman inhibitor of apoptosis protein(IAP) genes xiap,hiap 1,and hiap 2 to chromosomes Xq25 and 11q22 q23 by fluores cence in situ hybridization.Genomics,1996,37(3):404 406.

[6] 李晓明,马秀茹,路秀英,等.凋亡抑制蛋白 XIAP 在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床病理学意义.临床耳鼻咽喉头颈外科杂志,2007,21(21):973 975.

[7] 郝倩,张岩,李晓明.凋亡抑制蛋白XIAP在喉癌中的表达.中国老年学杂志,2007,27(8):742 743.