RP-HPLC法测定益母草不同药用部位中盐酸水苏碱的含量

【摘要】 目的 测定益母草不同药用部位中盐酸水苏碱的含量,以控制药材质量。方法 采用hplc法,色谱柱为磺酸基键合硅胶,流动相为20 mmol/l磷酸二氢钠溶液(含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸),柱温25 ℃；检测波长192 nm,比较益母草花、茎、叶中盐酸水苏碱的含量。结果 益母草中盐酸水苏碱的含量叶中最高,茎中最少。结论 购买益母草药材以叶(包括碎叶片)多者为佳。

【关键词】 益母草；盐酸水苏碱；高效液相色谱法

key words：herba leonuri；stachydrine hydrochloride；hplc

益母草为唇形科植物益母草leonurus japonicus houtt.的新鲜或干燥地上部分。鲜品春季幼苗期至初夏花前期采割；干品夏季茎叶茂盛、花未开或初开时采割,晒干,或切段晒干[1]。经深入安徽亳州产地考察得知,在益母草的产地加工过程中,为使商业外观好看,均进行“风选”,即将破碎叶片及果穗筛去,以外观齐整、方茎为主出售,导致以盐酸水苏碱为代表的有效物质生物碱含量下降。由于药用部位是影响药材质量的主要因素之一,因此,我们考察了益母草不同药用部位中盐酸水苏碱的含量,以控制药材的质量。

1 仪器与试药

angilent hp1100高效液相色谱仪；g1314a紫外检测器；kq-500de型超声仪。

益母草药材购于广州广弘药材有限公司,经南方医科大学中医药学院药用植物与鉴定教研室陈兴兴鉴定为益母草 leonurus japonicus houtt.的干燥地上部分。盐酸水苏碱对照品(批号0722-200108,中国药品生物制品检定所)。水为高纯水；磷酸二氢钠、磷酸(色谱级,北京仁凡红建商贸有限公司)；其余试剂均为分析纯。

2 方法及结果

2.1 色谱条件

色谱柱：spherisorb scx(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：20 mmol/l磷酸二氢钠溶液(含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸)；柱温：25 ℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：192 nm；进样量：10 μl。理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于5 000。

2.2 对照品储备液的制备

取105 ℃干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量,精密称定,加流动相制成约每1 ml含1 mg的溶液,作为对照品储备液。

2.3 线性关系考察

分别精密吸取对照品储备液0.2、0.6、1.0、1.4、1.8 ml至10 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,备用。各精密吸取10 μl注入液相色谱仪中,测定,测得峰面积。以对照品进样量为横坐标、吸光度为纵坐标做标准曲线,线性范围为0.2～1.8 μg,回归方程y＝237.49x－4.406 9,r＝0.999 9。

2.4 供试品溶液的制备

取益母草药材粉末约1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加乙醇50 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10 ml,通过氧化铝-活性炭柱(中性氧化铝3 g,湿法装柱,上覆层析用活性炭1 g,乙醇预洗),收集乙醇洗脱液100 ml,蒸干,残渣用流动相定容于10 ml量瓶中,摇匀,滤过,即得。色谱图见图1。

2.5 精密度试验

精密吸取水苏碱对照品溶液(0.101 5 mg/ml)10 μl连续进样5次,测得5次峰面积分别为234.270 32、234.843 43、235.147 35、233.115 34、235.979 72,平均值为234.671 232, rsd＝0.45%,表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液,每隔2 h测定1次,共测定5次,测得峰面积分别为279.403 14、282.599 58、275.727 75、279.743 87、280.633 12,平均值为279.621 49,rsd＝0.90%,表明供试样品在8 h内稳定。

2.7 重复性试验

取药材粉末5份,各1 g,精密称定,按正文中供试品溶液的制备方法制备样品,测定,含量分别为(%)：0.555 5、0.557 8、0.548 9、0.548 8、0.571 4,平均值为0.556 5%,rsd＝1.66%。结果表明,该方法稳定、可行。

2.8 加样回收试验

分别取药材粉末6份(含量为0.556 5%),精密称定,分别精密加入盐酸水苏碱对照品溶液(2.60 mg/ml)1 ml,水浴上挥干溶剂,再精密加乙醇50 ml,按正文中供试品溶液的制备方法制备样品,测定,测得回收率见表1。表1 加样回收率试验结果（略）

2.9 样品测定

分别取益母草的花、茎、叶,按供试品溶液的制备方法制备供试品,分别进样,测定,即得。结果见表2。表2 益母草不同部位中盐酸水苏碱的含量测定结果(略)

3 讨论

2005年版《中华人民共和国药典》(一部)对益母草中盐酸水苏碱含量的测定采用薄层扫描法,我们将其改进为高效液相色谱法[2],提高了方法的灵敏度和准确度,得到了满意的结果。

盐酸水苏碱水溶性很好,极性较大,在c18柱上无法保留,因此实验选用了磺酸基团键合硅胶(scx)的阳离子交换剂为填充剂,达到了很好的分离效果。

由试验结果可以看出,盐酸水苏碱的含量以叶中最多,茎和花中都较少,为保证药材质量,购买益母草药材应以叶多者(包括碎叶片)为佳。

【参考文献】

1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.203.

[2] 邹 华,吴云波,王金萍.hplc法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量[j].辽宁中医药大学学报,2006,8(6)：147.