RP-HPLC法测定紫丁香叶中咖啡酸的含量

【摘要】 目的 建立紫丁香叶中咖啡酸的含量测定方法。方法 采用RP-HPLC法测定紫丁香叶中咖啡酸的含量，色谱条件为：DiamonsilTM C18 (150 mm×4．6 mm，5 μm)分析柱，流动相：甲醇-0．1%磷酸水溶液(15∶85)，检测波长：323 nm，体积流量：1．0 ml/min，柱温：25℃。结果 咖啡酸的进样量在0．037 8～0．226 8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0．999 6)。平均回收率为98．4%，RSD为2．2%(n=5)；3批样品中咖啡酸的含量分别为 0．010 47、0．011 03、0．010 88 mg/g，RSD分别为2．0%、2．2%、1．6%。结论 本方法精密度高，分离度好，可用于紫丁香叶中咖啡酸的质量控制。

【关键词】紫丁香叶；咖啡酸；RP-HPLC

Determination of caffeic acid in Folium syringae

MI Bao-li,ZHANG Zhen-qiu.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Dalian 116600,China

【Abstract】 Objective To establish the method for determining the content of caffeic acid in Folium syringae.Methods Determination of caffeic acid in Folium syringae by RP-HPLC,the chromatographic conditions were DiamonsilTM C18(150 mm×4．6 mm,5 μm)analytical column,mobile phase:methanol-0．1%phosphoric acid solution (15∶85),detection wavelength:323 nm,volume flow:1．0 ml/min,column temperature:25℃.Results A good liner range of caffeic acid was 0．037 8-0．226 8 μg(r=0．999 6),the average recovery was 98．4% and RSD was 2．2%(n=5);the caffeic acid contents of 3 batch samples were 0．010 47,0．011 03,0．010 88 mg/g,RSD were 2．0%,2．2%,1．6%.Conclusion This method with high precision and good resolution can be used for the quality control of Folium syringae.

【Key words】Folium syringae;Caffeic acid;RP-HPLC

丁香叶为木犀科植物洋丁香(Syringa vulgaris L.)、朝鲜丁香(Syringa diatata Nakai.)或紫丁香(Syringa oblate Lindl.)的干燥叶[1]。现代研究表明，丁香叶是一种理想的广谱抗菌药，具有明显的抗菌消炎、抗病毒等作用[2]。紫丁香叶中的酚酸类化合物为主要的有效物质，其中咖啡酸的含量测定未见报道。本实验采用高效液相色谱法首次建立了紫丁香叶中咖啡酸的含量测定方法,从而为紫丁香叶及其制剂提供了质量控制依据。

1 仪器与试药

日本岛津LC-10AT vp高效液相色谱仪，SPD-10A vp检测器，N-2000双通道色谱工作站,U-3010型紫外-可见分光光度计，AS3120A超声波清洗器。

咖啡酸对照品(批号 110885-200102)由中国药品生物制品检定所提供；紫丁香叶购于河北安国，并经辽宁中医药大学李峰教授鉴定为Syringa oblate Lindl.的干燥叶。高效液相用甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 咖啡酸波长的确定 取咖啡酸对照品溶液适量，用甲醇溶解，以甲醇为空白对照，照分光光度法测定，于200~400 nm波长处进行扫描，结果在(217±1)nm和(323±1)nm处有最大吸收，以(323±1)nm处吸收强度最大，故选择323 nm为测定波长。见图1。

2．2 色谱条件 色谱柱：DiamonsilTM C18 (150 mm×4．6 mm，5 μm)分析柱；流动相：甲醇- 0．1%磷酸水溶液(15∶85)；检测波长：323 nm；体积流量：1．0 ml/min；柱温：25℃。理论板数以咖啡酸计算不低于2 000，分离度>1．5。色谱图见图2。

2．3 溶液的制备

2．3．1 对照品溶液的制备 精密称取110℃干燥至恒重的咖啡酸对照品11．81 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得含咖啡酸0．018 9 mg/ml的对照品溶液。

2．3．2 供试品溶液的制备 取紫丁香叶细粉约6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醚50 ml与盐酸5 ml，密塞，摇匀，超声处理30 min，取出，放冷，滤过，转入分液漏斗中，药渣用乙醚洗涤3～4次，10 ml/次，滤过，洗液并入分液漏斗中，用0．1 mol/L氢氧化钠溶液提取3次，30 ml/次，碱液依次用同一乙醚10 ml振摇洗涤，加1 mol/L盐酸3 ml，合并碱液，再用乙醚提取3次，30 ml/次，乙醚液依次用同一水10 ml振摇洗涤，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转入5 ml量瓶中，用甲醇分次洗涤容器，洗涤液并入量瓶中，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0．45 μm)滤过，取续滤液，即得。

2．4 线性关系考察分别精密吸取咖啡酸对照品溶液2、4、6、8、10、12 μl,按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)，绘制标准曲线。得回归方程为：Y=2 525 518．812 2X-3 624．483 1，r=0．999 6。结果表明咖啡酸在0．037 8～0．226 8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2．5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10 μl，按上述色谱条件连续重复进样5次，计算得咖啡酸峰面积的RSD为1．4%，表明仪器精密度良好。

2．6 稳定性试验 取同一供试品溶液10 μL,分别于0、2、4、8、10、12 h进样，测定，计算咖啡酸峰面积的RSD为2．2%，结果表明供试品溶液在12 h内稳定。

2．7 重复性试验 取同一批样品5份,制备供试品溶液，按上述色谱条件进样10 μl，测定咖啡酸的含量为0．010 47 mg/g,RSD为2．2%。

2．8 回收率试验 取已知咖啡酸含量(0．010 47 mg/g)的同一批紫丁香叶样品5份，各约3 g，精密称定，精密加入咖啡酸对照品溶液(0．018 9 mg/ml)1．6 ml，制备供试品溶液，测定，计算回收率。结果平均回收率为98．4%，RSD为2．2%，见表1。

2．9 样品含量测定 精密称取3批(060508、060513、060516)(n=3)紫丁香叶样品,依上述方法测定咖啡酸的含量，结果分别为 0．010 47、0．011 03、0．010 88 mg/g，RSD分别为2．0%、2．2%、1．6%。

3 讨论

3．1 实验采取乙醚加酸超声提取，加碱成盐，用酸酸化使咖啡酸游离，再用乙醚萃取咖啡酸的方法，能较好地除去紫丁香叶中的叶绿素，杂质峰较少，分离度好。

3．2 考察了乙腈-0．1%磷酸水溶液，甲醇-0．1%磷酸水溶液等不同配比的流动相， 最后选择甲醇-0．1%磷

酸水溶液(15∶85)。实验证明，该法分析时间短，色谱峰达到基线分离，峰形好，提高了灵敏度。

3．3 3批样品测定结果表明，咖啡酸含量在0．010 47~0．011 03 mg/g范围内，RSD均

参考文献

1 中国药典.2005，1.

2 Wang DD,Liu SQ,Lu JY,et al.Studies on the active constitutions of Ｓyringa oblatelindl.Acta Pharm Sin(药学学报),1982,17(12): 951-954.