霍氏肠杆菌生物学特性研究

摘要：从陕西汉中某猪场腹泻仔猪粪便中，分离到一株革兰（G－）阴性小杆菌。经生物学特性鉴定，细菌的生理生化试验，动物致病性等试验，鉴定为霍氏肠杆菌（Enterbacterhormaechei），对其的生物学特性，生理生化等方面进行了研究。

关键词：霍氏肠杆菌；细菌分离；生物学特性

霍氏肠杆菌（Enterobacterhormaechei），属于肠杆菌科（Enterobacteriaceae），归属肠道菌群75（未知肠杆菌杂交群，本群包括23株菌，75为菌群代码），存在于人和动物肠道，为正常菌群之一，在特定条件下会引起动物和人感染，是条件致病菌。可从感染动物或者动物伤口中分离到。目前，国内对该菌的研究报道甚少，霍氏肠杆菌A20菌株具有提高降解类胡萝卜素的功能，可提高产品的商业价值。霍氏肠杆菌WM1菌株具有发酵碳水化合物产生青霉素酶的功能，在2．0％葡萄糖为碳源、0．3％酵母粉为氮源、0．010％Mg2＋时产酶活力最高为1．15×104U／（mL•h－1），该酶在牛奶中青霉素残留检测中发挥着一定作用。本试验着重研究了细菌的生物学特性及其抗生素敏感试验、动物致病性试验，为该菌的研究利用提供依据。

1材料与方法

1．1材料

1．1．1病料陕西某养猪场腹泻死亡仔猪的肝脏、脾脏、粪便等。1．1．2培养基普通琼脂平板培养基、麦康凯琼脂平板培养基、5％绵羊血琼脂平板培养基、营养肉汤、邓亨氏蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、三糖铁TSI斜面培养基（均按参考资料中介绍方法制备）1．1．3抗生素试纸片购自杭州某微生物试剂有限公司，批号：201602901．1．4试验动物小白鼠（由西北农林科技大学实验动物中心提供）

1．2方法

1．2．1细菌分离无菌采集仔猪肝脏、脾脏、粪便等病料分别接种在普通琼脂平板培养基、麦康凯琼脂平板培养基、5％绵羊血琼脂平板培养基，37℃、24h～36h培养，分离到一株可疑细菌4℃保存。待用。1．2．2生物学特性试验（1）形态结构与染色特性：革兰染色：细菌染色后显微镜下观察其形态结构和染色特性。（2）生物学特性：分离菌的纯培养物分别接种于普通琼脂平板培养基、麦康凯琼脂平板培养基、5％绵羊血琼脂平板培养基、营养肉汤等培养基中，37℃、24h～36h培养，观察其生长表现。1．2．3生化试验用分离菌的纯培养物按生化特征鉴定中介绍的方法进行下列试验：糖发酵试验、靛基质试验、M．R试验、枸橼酸盐利用试验以及氨基酸利用试验等。1．2．4抗生素敏感试验按参考资料抗生素纸片扩散法进行操作及判定。1．2．5动物致病性试验取小白鼠6只，分为2组，实验组和对照组，每组3只。将纯肉汤培养物37℃、24h～36h培养，经麦氏比浊管比浊后，将细菌浓度调整为2×108个／mL，取0．2mL、0．4mL、0．6mL肉汤培养物分别给实验组小白鼠腹腔注射；对照组小白鼠注射等量灭菌肉汤，观察其发病及死亡情况，并解剖小白鼠，采集肝脏、脾脏，涂片、染色、镜检，及对感染菌做分离鉴定。

2结果

2．1形态及染色特性

霍氏肠杆菌为革兰阴性（G－）小球杆菌，散在排列，周生鞭毛运动，无荚膜。

2．2生物学特性观察

霍氏肠杆菌为兼性厌氧菌，最适生长温度为37℃，pH7．4最佳，酸性条件下不生长，本菌对营养要求不高，普通琼脂平板培养基37℃、24h～36h即可生长，菌落灰白色，1～2mm大小，圆形，四周光滑，微凸起，表面光滑、湿润。麦康凯琼脂平板培养基上37℃、24h～36h培养后可观察到透明小菌落，1～2mm大小，圆形，四周光滑，微凸起，表面光滑、湿润，随即4℃存放24h后，菌落为红色，培养基不变色。5％绵羊血琼脂平板37℃、24h～36h培养，菌落灰白色，针尖大小，无溶血现象。普通肉汤37℃、24h～36h培养，肉汤变浑浊。霍氏肠杆菌不发酵乳糖，可利用葡萄糖，甲基红试验阳性，脲酶阳性，接触酶阳性，三糖铁培养基为斜面黄色，底部红色，不产生H2S。

2．3生化试验结果

（见表1）

2．4抗生素敏感试验

（见表2）

2．5动物试验

实验组和对照组小白鼠在注射可疑菌后6h、12h、24h、均正常活动，饮食正常、精神状态良好，48h未见死亡，解剖小白鼠无异常病理变化，从解剖小白鼠肝脏、脾脏中未离到与感染菌相同的细菌。

3小结

从送检的仔猪病料肝脏、脾脏、粪便中，分离得到一株革兰阴性小杆菌，通过生长特性、菌体形态、菌落特征、染色特性、生化试验等一系列的系统鉴定，证实所分离的细菌为霍氏肠杆菌。动物致病菌性试验表明该株菌没有致病性，为肠道的正常菌之一。药敏试验证明该菌对米诺环素、四环素、环丙沙星、克拉霉素、氧氟沙星、阿米卡星、左氟沙星、红霉素、诺氟沙星、头孢唑啉、氯霉素、庆大霉素、链霉素、克林霉素、卡那霉素、麦迪霉素、妥布霉素、头孢哌酮、哌拉西林、大观霉素等高度敏感，对头孢曲松、苯唑西林、氨曲南、复方新诺明、头孢他啶具有耐药性。从动物致病性试验结果分析，本株霍氏肠杆菌为动物肠道的正常菌之一，对多种抗生素高度敏感，可能是一株条件致病菌。从肝脏、脾脏中也没有分离到其他细菌及酵母菌，是否有其他微生物存在有待进一步研究。霍氏肠杆菌在初分离过程中，容易和肠道沙门氏菌混淆，在今后研究过程中应注意区别，营养较高的培养基反而菌落较小，生长较差。由于实验室条件因素，没有在霍氏肠杆菌的其他方面进行深入的试验，还需进一步研究。

作者：李璐瑶 刘梦佳 滕明明 王乐 张耀相 刘炳琪 单位：西北农林科技大学