苦黄口服液质量标准研究

摘 要：目的：建立苦黄口服液的质量标准。方法：采用薄层色谱法鉴别苦黄口服液中大黄、茵陈、大青叶等药材；采用高效液相色谱法测定制剂中大黄酚的含量。结果：薄层斑点清晰，重现性好；含量测定大黄酚平均回收率为98.3％，RSD=1.6％。结论：方法简便、准确，可供苦黄口服液的质量控制。

关键词：苦黄口服液；薄层色谱；高效液相色谱；大黄酚

中图分类号：R285

文献标识码：A文章编号：

1673-7717（2008）05-1102-02

Study on Quality Standard of Kuhuang Oral Liquid

YUAN Hongyu, LI Xiang, ZHANG Xianming, OU Ning

（The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing, 210029，Jiangsu，China

）

Abstract：Objective： To establish the quality control standard of KuHuang Oral Liquid. Methods:Radix et Rhizoma Rhei, Herba Artemisiae Scopariae and Fructus Jujubae were indentified by TLC, and the content of Chrysophanol was determined by HPLC. Results: The TLC sports developed were fairly clear, and the blank test showed no interference.The average recovery was 98.3%, RSD was 1.6%. Conclusion: The method is simple and reliable. It can be used in quality control of KuHuang Oral Liquid.

Keywords：KuHuang Oral Liquid；TLC；HPLC；chrysophanol

苦黄口服液是本院自行研制的医院制剂，处方源于《伤寒论》，由茵陈蒿汤去栀子，加苦参、柴胡、大青叶而成，具有清热利湿、利胆退黄、舒肝解郁之功效，能明显增加肝脏分泌胆汁和胆红素[1]，适用于因湿热内蕴引起的黄疸型肝炎。为了控制该制剂的质量，确保临床疗效，笔者采用薄层色谱法对处方中大黄、茵陈、大青叶等药材的主要成分大黄酚、绿原酸、靛玉红进行了定性鉴别；并用高效液相色谱法对制剂中大黄酚含量进行了测定。

1仪器与试药

岛津LC-10AT高效液相色谱仪；SPD-IOA紫外检测器；LC-10AT泵；N2000色谱工作站；色谱柱：Lichrospher RP 18 （汉邦科技）；Sartorius-BP211型电子天平（德国）；KQ-250B型超声波清洗器（昆山）；939薄层自动铺板器(重庆南岸贝尔德技术厂)；ZF-1三用紫外分析仪（上海康华仪器制造有限公司）。

靛玉红对照品（批号：756-9203），大黄酚对照品（批号：110796-200514），绿原酸对照品（批号：0753-9708），中国药品生物制品检定所提供；苦黄口服液及阴性对照口服液自制；甲醇：色谱纯；氯仿、甲醇、苯、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲酸、丙酮等试剂均为分析纯。

2薄层色谱鉴别

2.1大黄的鉴别量取苦黄口服液5mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，加8% HCl 10mL，超声2min，加氯仿10mL，水浴回流1h，放冷，置分液漏斗中，分取氯仿层，酸液再用氯仿提取1次，合并氯仿液，挥去氯仿，残渣用甲醇溶解并定容至10mL，作为供试品溶液。取缺大黄药材的口服液5mL，同法制成阴性对照液。取大黄药材0.1g，加20mL甲醇浸泡1h，滤过，取滤液5mL同法制成药材对照液。另取大黄酚对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液、药材对照液各5μL，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)为展开剂[2]，展开。晾干后置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；阴性对照液在其相应的位置上，无此相应斑点。结果见图1。

2.2 茵陈的鉴别 量取苦黄口服液5mL，水浴蒸干，残渣加1mL甲醇溶解，作为供试品溶液。取等量缺茵陈药材的阴性口服液，同法制成阴性对照溶液。取茵陈药材2g，加无水乙醇20mL回流提取30min，冷却滤过，滤液蒸干，残渣加1mL甲醇溶解，作为药材对照液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。分别吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液和对照溶液，点于同一含4%的醋酸钠的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丙酮∶甲酸∶水（11∶8∶2∶2）为展开剂[3]，展开。取出晾干，喷以 1% FeCl3乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的绿色斑点，阴性对照溶液色谱中无此相应斑点。结果见图2。

2.3 大青叶的鉴别 量取苦黄口服液10mL，加氯仿30mL萃取，氯仿液浓缩至1mL，作为供试品溶液。取缺大青叶药材的阴性口服液，同法制成阴性对照溶液。取大青叶药材0.5g，加氯仿20mL，加热回流1h，过滤，滤液浓缩至1mL，作为药材对照溶液。另取靛玉红对照品，加氯仿制成每毫升含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。分别吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液和对照溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮(5∶5∶1)为展开剂[4]展开。取出晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同紫红色斑点，阴性对照溶液色谱中无此相应斑点。结果见图3。

3 含量测定

3.1 色谱条件[2]固定相：汉邦科技Lichrospher C18 4.6mm×25cm；流动相：甲醇-0.1%磷酸（85∶15）；检测波长：254nm；流速：1mL/min；柱温：室温；进样量：20μL。理论塔板数按大黄酚峰计算不低于8000。

3.2 线性关系的考察精密称取大黄酚对照品2.32mg，流动相定容于25mL量瓶中，得浓度为92.8μg/mL的大黄酚标准液。分别精密吸取0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mL大黄酚标准液置25mL量瓶中，流动相定容至刻度，得浓度为0.928、1.856、3.712、7.424、14.848、29.696μg/mL的对照溶液。对照溶液及标准液依次进样，每次20μL，以峰面积为纵坐标，对照溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y＝74263X-33686，r＝0.9999。可见大黄酚在0.019～1.856μg含量范围内，峰面积线性关系良好。

3.3 样品供试液的制备精密量取苦黄口服液5mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，加8%HCl 10mL，超声2min，加氯仿10mL，水浴回流1h，放冷，置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液再用氯仿提取3次，每次10mL，合并氯仿液，挥去氯仿，残渣加流动相使溶解并定容至10mL，供高效液相测定用。阴性样品供试液的制备，取缺大黄药材的阴性样品口服液同上处理即得。

3.4 系统干扰性实验按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、样品供试液、阴性样品供试液各20μL，分别注入色谱仪，进行测定。结果样品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照液在此保留时间无干扰。对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液色谱图分别见图4。

3.5 精密度试验精密吸取同一样品供试品溶液20μL，重复进样6次，记录峰面积。结果峰面积均值为1768609.5，RSD=1.1%（n=6），表明仪器精密度良好。

3.6 稳定性试验 精密吸取同一样品供试品溶液，在0、1、2、3、4、5h分别进样20μL，记录峰面积。结果6次进样峰面积平均值为1784773.5，RSD=1.0％（n=6），可见供试品溶液在5h内测定结果稳定。

3.7 加样回收率试验精密吸取6份已知含量的口服液样品，每份0.5mL，水浴挥干，分别加入一定量的大黄酚标准溶液，按样品供试液制备项下处理，测定其中大黄酚含量，并计算回收率。结果见表1。大黄酚平均回收率为98.3%，RSD=1.6%。

3.8 样品含量测定 精密吸取3批不同批号的苦黄口服液各3份，每份1.0mL，水浴挥干，按样品供试液的制备方法处理样品，测定其中大黄酚含量。结果见表2。

4 讨 论

苦黄口服液是本院使用多年的医院制剂，但长期以来仅用常规化学方法对其质量进行控制，缺少科学性。故笔者采用薄层色谱法对处方中大黄、茵陈、大青叶等药材进行了定性鉴别，并用高效液相色谱法对制剂中大黄酚进行含量测定以保证制剂的内在质量。

大黄为方中君药,主要含蒽醌类活性成分，有游离型和结合型两种形式存在。游离蒽醌难溶于水，可溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，结合蒽醌在酸性环境中可以水解为游离蒽醌。为了准确测定苦黄口服液中大黄酚的总含量，先用8%盐酸将结合蒽醌水解，再用醇提取测定。本实验方法简便、准确、重现性好，可用来控制苦黄口服液的质量。

参考文献

[1] 高博，潘建新，顾振纶.苦黄口服制剂对大鼠胆汁分泌的影响[J].中草药，2000，31（3）：200.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典•2005年版一部[S]. 北京：化学工业出版社，2005：17.

[3] 高玉敏，王名洲. 茵陈兰冲剂质量标准的研究[J]. 山东医药工业，1995，14（1）：7 .

[4] 张汉忠，常美华，杨文静. 润益口服液的薄层研究[J]. 时珍国医国药，2005，16（6）：519.