通脉活血灵胶囊中大黄酚在大鼠血浆中的浓度及药代动力学研究

作者：李兰芳， 张勤增， 解丽君， 杨凤旭

【关键词】 通脉活血灵胶囊;,,大黄酚;,,血药浓度;,,HPLC

摘要：目的：观察大鼠口服通脉活血灵胶囊后，其效能成分大黄酚在大鼠体内的药动学过程。方法：大鼠单次灌服通脉活血灵胶囊，用反相高效液相法测定不同时间的血药浓度，采用DAS2.0药动学软件拟合处理该药的药动学参数。结果：通脉活血灵胶囊中大黄酚在大鼠体内的药动学参数：T1/2α，T1/2β，AUC(o-∞)，K10，K12，K21，Tmax，Cmax分别为：1.054h，4.197h，2479.555 mg/L，0.077 1/h，0.222 1/h，0.407 1/h，0.5h，230.58 mg/L。结论：单次灌服通脉活血灵胶囊后，大黄酚在大鼠体内的药动学过程符合开放型二室模型，吸收快，消除慢，同服用单味大黄后大黄酚在家兔体内的药动学过程有一定的差异。

关键词： 通脉活血灵胶囊; 大黄酚; 血药浓度; HPLC

Determination of chrysophanol from Tongmaihuoxueling Capsules in rat’s plasma and study on its pharmacokinetics

Abstract: Objective: To study the pharmacokinetics of chrysophanol in rats after ig administration of Tongmaihuoxueling capsules(TC). Methods: The concentrations of chrysophanol in plasma were determined by RP-HPLC method after single ig administration of TC. The parameters of pharmacokinetics were computed by DAS 2.0 program. Results: The pharmacokinetic parameters of chrysophanol from TC in rats were as follows: T1/2α，T1/2β，AUC(o-∞)，K10，K12，K21，Tmax，Cmax; Their value were respectively 1.054h，4.197h，2479.555 mg/L，0.077 1/h，0.222 1/h，0.407 1/h，0.5 h，230.58 mg/L.Conclusion: After single ig administration of TC in rats, the concentration-time curves of chrysophanol in plasma fitted a two-compartment open model. The pharmacokinetic of chrysophanol from TC shows a rapid absorption and slow elimination process in rats, which is different from the pharmacokinetic of chrysophanol after ig administration of rhubarb in rabbits.

Key words: Tongmaihuoxueling capsules; Chrysophanol; Plasma concentration; HPLC

通脉活血灵胶囊由丹参、大黄、槐米、制首乌、川芎、鸡内金等组成，具有活血通脉、益气健脾之功效，现代研究表明具有降低血液粘度、预防心脑血管血栓形成、改善供血的作用。主要用于高粘血症、动脉粥样硬化、脑梗塞等病的治疗。大黄为主药之一，具有泻下、降脂、抑制血小板聚集等多种功能［1］。阐明其主要成分大黄酚在机体内药代动力学行为，有助于指导该复方的临床应用以及探讨大黄酚在全面发挥药理作用的地位和机制。本研究应用反相高效液相色谱法测定了大鼠单次口服通脉活血灵胶囊后动物血浆中大黄酚的浓度，并应用药动学统计软件拟合了大黄酚在大鼠体内的药动学过程。为进一步开展该复方的药动学-药效学研究奠定了基础。

1 材料

1.1 仪器：Aglient1100高效液相色谱仪，安捷伦公司； METTLER AE240型电子天平，梅特勒仪器上海有限公司；TGL-16C离心机，上海安亭科学仪器厂。

1.2 药品与试剂：大黄酚标准品（中国药品生物制品检定所提供，批号：756-9204），通脉活血灵胶囊（为本院制剂中心自制，规格：0.5g/粒）；无水甲醇（天津市四通化工厂）；磷酸（石家庄市黄磷厂）；乙醚（天津市标准科技有限公司）均为分析纯；硫酸为优级纯；甲醇（天津市康科德科技有限公司）为色谱纯；水为重蒸馏水。

1.3 试验动物：SD大鼠，体重200~250g，雌雄各半。动物许可证号：SCXK（冀）2003-1-003，合格证号：601022，河北省实验动物中心提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

固定相： ZORBAX SB-C18 (250mm×4.6mm,5μm)色谱柱；流动相：甲醇：0.1%磷酸（6：1）;检测波长为254nm流速：1.0ml/min；柱温：38℃；进样量：20μl，采用外标法定量测定血浆大黄酚浓度。

2.2 血浆样品预处理方法［2］

取待测大鼠全血，及时离心制备分离血浆，用微量取样器精密吸取500μl，置离心管中，加30% H2SO4 250μl，漩涡混合30s，水浴加热（70℃±2℃）水解30min ，冷却，加入乙醚4.0μl，漩涡混合提取5min，3000r/min离心5min，吸取乙醚层。通入压缩氮气挥干，残渣用甲醇100μl溶解，3000 r/min离心5min ,吸取上清液20μl注入高效液相色谱仪。

2.3 线性范围和检测限

大黄酚标准品以甲醇配制200mg/L的储备液，再用甲醇稀释到需要的浓度作为大黄酚对照品溶液。精密吸取大黄酚对照品溶液适量，加至5份大鼠血浆中，配制成含大黄酚分别为0.5μg/ml、1.0μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml、15.0μg/ml和20.0μg /ml的对照品样品溶液，按2.2方法处理，然后在选定色谱条件下进行分析，记录大黄酚的峰面积，以大黄酚的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线的回归方程。试验数据经线性回归得回归方程为：Y=3960.9X+21.081，相关系数R2=0.9995。经化学工作站软件计算得大黄酚最小检测限0.4μg/ml。

2.4 回收率测定法

制备大黄酚浓度为5.00μg/ml、10.00μg/ml、15.00μg/ml的含药血浆，按2.2法处理，每个浓度3份，分别取20μL注入高效液相色谱仪，记录色谱峰。三种浓度的回收率分别为98.37%、99.00%、101.23%，平均回收率为99.53%，相对标准偏差RSD分别为0.42、0.20、0.21%。

2.5 稳定性试验

将大黄酚对照品溶液加入大鼠空白血浆中，使大黄酚的含量为5.0μg/mL，照2.2下方法处理样品，分别于0、2、4、6、10、12h，按已确定的色谱条件进行测定。样品峰面积的相对标准偏差（RSD）为3.34%，表明含药血浆在常温下12h内，稳定性良好。

2.6 精密度试验

大鼠空白血浆加入不同浓度的大黄酚对照品溶液，制备5.00μg/ml、10.00μg/ml、15.00μg/ml的对照品血浆样品，在同一天重复测定含量5次，在一周内不同日期分别测定5次，日内RSD分别为2.41%、1.75%、2.16%。日间RSD分别为3.48%、3.23%、4.16%。

2.7 色谱系统适用性试验 在选定的条件下，大鼠血浆中大黄酚与相邻组分之间能达到基线分离，理论塔板数为3000，内源性物质无干扰，见图1-A、B。

表1 主要药代动力学参数（略）

2.8 药动学研究与统计方法

取通脉活血灵胶囊，倾出内容物，粉碎过100目筛，精密称定取适量，加入蒸馏水制成适合灌胃浓度的混悬液。取禁食12h，自由饮水的SD大鼠36只，随机分为2组，每组18只，大鼠灌胃给以通脉活血灵胶囊内容物，给药剂量为8g/kg体重，灌胃后不同时间，在清醒状态下眼窝静脉窦取血1ml，采血时间点分别为：0.083及0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、24h，每个时间的峰面积为6只大鼠同一时间点的平均值。按2.4项下的方法处理、测定，记录峰面积，以此计算血药浓度，绘制药时曲线。取每个时间点的血药浓度均值，采用DAS2.0药动学软件进行自动拟合处理，以理论血药浓度值与实测血药浓度值的相关系数最大和AIC最小作为判断标准，选择最佳房室模型，求得药动学参数。通脉活血灵胶囊中大黄酚在大鼠体内的药动学行为符合开放性二室模型，主要药动学参数见表1。药-时曲线见图2。

3 讨论

3.1 大鼠灌胃通脉活血灵胶囊后,大黄酚的血药浓度迅速升高，很快达到峰值，这同其他口服药物不同，反而同静脉给药类似。这可能与大黄酚的结构有关，在蒽环母核结构α位有酚羟基，这样的结构特征使其在胃肠道内极易被吸收。

3.2 大鼠灌胃通脉活血灵胶囊后药代动力学结果表明：药代动力学过程为开放性的二室模型，达峰时间30min，T1/2α为1.054h，分布速率常数α为0.657/h，也说明了大黄酚在体内分布较快；T1/2β为14.197/h。血浆中大黄酚消除速率常数为0.049/h，T1/2β远远大于T1/2α，说明大黄酚在大鼠体内主要以消除过程为主。据文献［3］报道，家兔口服大黄煎剂后，大黄酚1.42h达血药峰浓度，药动学过程符合二室模型，K12=0.65/h,K21=0.19/h, T1/2α为0.701.054h，T1/2β为21.26/h。本文采用大鼠作为实验动物，口服含有大黄的中药复方，得到大黄酚在大鼠体内的药动学过程规律同上述文献报道有一定的差异，本研究得到的数据表明，大鼠口服通脉活血灵胶囊后，大黄酚吸收更快，生物利用度更高。

3.3 鉴于中药复方的复杂性，全面阐明其全部化学成分的吸收、分布、代谢和排泄规律难度很大，首先阐明可检测的功效成分及其体内的动态变化，对于阐明中药复方的药效物质基础，配伍规律，剂型改革以及指导临床用药都是有益的。本研究只是对大鼠口服通脉活血灵胶囊后，其功效成份之一大黄酚的体内过程进行了初步探讨，为进一步开展该复方的药动学-药效学研究奠定基础。

参考文献：

［1］ 郭望祥.大黄药理作用概述［J］.江汉大学学报（医学版），2002,30（2）：60.

［2］ 姚树坤，蒋晔，郝晓花，等.虎杖及其复方中大黄素在大鼠体内的药代学研究［J］.中国中药杂志，2005，30（6）463-465.

［3］ 庞志功，汪宝琪，李生忧，等.大黄素大黄酚在家兔体内药代动力学的研究［J］.西安医科大学学报，1993，14（4）：346-349.