胃癌组织中microRNA―224阳性表达与患者预后相关性分析

【前言】胃癌组织中microRNA―224阳性表达与患者预后相关性分析由文秘帮小编整理而成，但愿对你的学习工作带来帮助。【Key words】 MicroRNA-224； In situ hybridization proliferation； Gastric cancer； Prognosis First-author’s address：The Second Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310000，China doi：10.14033/ki.cfmr.2016.27.00...

【摘要】 目的：探讨microRNA-224于胃癌组织中的阳性表达与患者临床病理特征及预后的相关性。方法：应用原位杂交技术检测microrna-224在50例石蜡固定癌旁非肿瘤胃黏膜组织及112例石蜡胃肿瘤组织切片中的表达情况，分析其与肿瘤患者各病理参数及预后的相关性。原位杂交按照原位杂交试剂盒的说明书进行。结果：microRNA-224在胃癌组织中阳性表达率49.1%（55/112），癌旁非肿瘤胃黏膜组织中阴性表达。其阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度存在相关性（P0.05）。microRNA-224阴性表达比阳性表达者5年生存率高，差异有统计学意义（P

【关键词】 microRNA-224； 原位杂交； 胃癌； 预后

中图分类号 R735.37 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2016）27-0001-03

Correlation Analysis of MicroRNA-224 Expression in Gastric Carcinoma Tissues and Patients’ Prognosis/SHAO Chang-ming，SHAO Qin-shu.//Chinese and Foreign Medical Research，2016，14（27）：1-3

【Abstract】 Objective：To explore the correlation of the expression of microRNA-224 in human gastric cancer tissues and clinical pathological characteristics and prognosis of patients.Method：In situ hybridization was used to detect the expression of microRNA-224 in 112 paraffin-embbeded human gastric cancer tissue sections and 50 cases of adjacent non-tumor gastric mucosa，and its relationship between various pathological parameters and prognosis of the patients was then analyzed.The procedures performed according to manufacturer’s instructions of sensitivity-enhanced in situ hybridization kits.Result：MicroRNA-224 was negative in human non-tumor gastric mucosa samples，but was positive in 55 of 112 cases（49.1%） of gastric cancer.Positive expression of microRNA-224 correlated with the depth of invasion，lymph node metastasis，distantmetastasis and TNM stage（P0.05）.The 5-year survival rate of patients with a positive expression of microRNA-224 was significantly lower than that in patients with negative expression，the difference was statistically significant（P

【Key words】 MicroRNA-224； In situ hybridization proliferation； Gastric cancer； Prognosis

First-author’s address：The Second Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310000，China

doi：10.14033/ki.cfmr.2016.27.001

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，胃癌患者的死亡率在世界恶性肿瘤患者中居第二位，在我国占第三位[1-2]。临床诊疗中，胃癌早期没有特异性症状，早期诊断困难。在我国胃癌患者5年生存率仍低于40%，主要原因是多数患者确诊时已是进展期胃癌，其中50%～75%存在淋巴结转移[3]，此类患者主要治疗手段为D2-D3的胃癌切除术，往往预示着预后不良[4]。因而，对胃癌患者及怀疑胃癌的患者给予早期诊断和治疗是提高患者长期生存率最有效的方法。近年针对微小RNA（microRNAs）做了大量研究[5]，研究显示，microRNAs参与了机体调节的生理及病理过程，具有较高的组织特异性，有潜在的识别肿瘤种类及起源的临床应用价值。近来研究显示microRNA-224在多种肿瘤（如胰腺癌、甲状腺癌、结直肠癌、肝癌等）中表达增高，通过多种途径起着致癌或是抑癌的作用，参与了肿瘤的发生、发展过程[6]。本研究通过原位杂交法从分子生物学方面定位、定量对照检测microRNA-224在癌旁非肿瘤组织及胃癌组织中的表达情况，探讨其阳性表达与胃癌患者临床病理参数、胃癌发生及预后的相关性，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

取2004-2006年行胃癌手术并有5年以上完整随访资料的患者病理石蜡切片112例。所做研究均经患者及家属知情同意。其中女32例，男80例，女∶男为1∶2.5；年龄30～82岁，平均59岁。生存期计算：（1）自手术日期至随访截止日期；（2）自手术日期至因肿瘤死亡的日期。胃癌TNM病理分期：参照2010年第七版美国癌症联合委员会（American Joint Committee on Cancer，AJCC）标准[7]。对照组：同期距胃癌肿瘤边缘5 cm以上非肿瘤胃黏膜50例。

1.2 试剂

Hsa-microRNA-224（38501-05，Exiqon，美国）；MK1030敏感性加强型原位杂交检测试剂盒（武汉博士德）；即用型DAB显色液：（SP-9000，北京中杉生物制品有限公司）。

1.3 方法

术后胃癌组织标本予10%中尔马林固定后，梯度酒精脱水，常规予石蜡包埋，并连续4 μm切片再次确认。采用MK1030敏感性加强型原位杂交检测试剂盒检测，80 ℃恒温烤片过夜，其后予常规脱蜡至水，1∶300稀释hsa-microRNA-224探针后予原位杂交。严格按原位杂交试剂盒说明书进行实验。其后予组织切片脱水、透明、封片。并予PBS代替一抗做空白对照。

1.4 判定标准

原位杂交结果判定microRNA-224阳性信号：胞浆出现棕黄色。双盲法评定实验结果：两名资深的病理专家根据染色程度及染色细胞所占百分比分别评定和分析。评分标准如下，（1）切片着色程度判定：不着色0分，着色淡1分，着色适中2分，着色深3分；（2）面积判定：着色细胞的百分比≤5% 0分，6%～25% 1分，26%～50% 2分；≥51% 3分；（3）乘积判定：染色程度和染色细胞百分比得分相乘0～1分为（-），2～3分为（+），4～6分为（++），>6分为（+++）；（4）结果判定：（-）及（+）为阴性表达，（++）及（+++）为阳性表达[8]。

1.5 统计学处理

采用SPSS 18.0对所得数据进行统计学分析，计数资料以率（%）表示，比较采用字2或Fisher确切概率检验，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，Kaplan-Meier行生存分析，独立预后因素分析采用COX风险模型进行，P

2 结果

2.1 microRNA-224在非肿瘤胃黏膜组织及胃癌组织切片中表达情况

microRNA-224的表达部位主要是在胃癌组织的胞浆（图1）。50例非肿瘤胃黏膜组织microRNA-224阴性表达。112例胃癌组织中55例（49.1%）阳性表达，57例（50.9%）阴性表达。

（SP法×200倍）

注：图A：microRNA-224在非肿瘤胃黏膜组织中的表达（-）；图B：microRNA-224在中分化腺癌中的表达（+++）

2.2 胃癌患者肿瘤组织中microRNA-224的表达与临床病理特征的关系

microRNA-224的阳性表达与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度存在相关性（P0.05）。胃癌组织中microRNA-224的阳性表达在TNM分期Ⅲ、Ⅳ期、有淋巴结转移、T3～4期和有远处转移的表达明显高于TNM分期Ⅰ、Ⅱ期、无淋巴结转移、T1～2期和无远处转移的患者，差异均有统计学意义（P

2.3 胃癌患者肿瘤组织microRNA-224的表达与预后的相关性

Kaplan-Meier生存分析示：胃癌患者microRNA-224在肿瘤组织中阳性表达与其5年生存率存在相关性。其阴性表达与阳性表达相比5年生存率分别为60.0%、21.1%，差异有统计学意义（字2=20.673，P

3 讨论

微小RNA（microRNAs）长度约为22个核苷酸，是一类非内源性的非编码小分子RNA。其中约60%位于基因的内含子区域，仅有少数microRNAs位于蛋白的编码区。成熟的microRNAs能够形成RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silenced complex，RISC），当靶mRNA的3′末端与其完全互补或接近完全的互补时，它能够通过RISC进而触发mRNA的降解；当它们之间不能够互补配对时，则能够通过调控核糖体阻断mRNA的翻译过程，从而能够控制一系列的生物过程，其中包括细胞的增殖，细胞凋亡和细胞分化[9]。也是由于这个原因，microRNAs能够通过调节下游编码蛋白的靶mRNA表达起到致癌或抗癌的作用。

在microRNAs与胃癌的相关性方面近年也做了大量研究，研究发现microRNAs具有较高的组织特异性。在胃癌患者肿瘤发生发展中，既有致癌性的microRNAs（如microRNA-106b-93-25、microRNAs-21、microRNAs-10b、microRNAs-17等）[6]，也有抑癌性的microRNAs（如microRNA-101c、microRNA-101、microRNAs-451、microRNA-149等）[9]。这提示在胃癌早期诊断和判断预后方面microRNAs可能是一种非常有效的肿瘤相关标志物，并有可能成为肿瘤发展过程中的筛查手段、治疗靶点及判断预后的依据。

microRNA-224作为其中一员也成为研究热点，文献[10-12]称其在人类多种肿瘤组织中阳性表达，并参与肿瘤形成和发展的调节过程。Ueda等[7]曾报道称microRNA-224在胃癌组织中阳性表达。但是未有其在胃肿瘤组织中的表达与临床病理特征之间关系及对患者预后影响的报道。

本研究显示，microRNA-224在非肿瘤胃黏膜组织中的表达均为阴性。而胃癌患者肿瘤组织之中主要表达于肿瘤组织的胞浆内，其阳性率为49.1%（55/112），且阳性表达情况与浸润深度、TNM分期、淋巴结转移和远处转移存在相关性，差异均有统计学意义（P0.05）。Kaplan-Meier生存分析亦显示，胃癌患者肿瘤组织中阳性表达者相对于阴性表达者总体5年生存率明显降低，差异有统计学意义（P

总之，microRNA-224在胃癌患者肿瘤组织中的表达与肿瘤TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移存在相关性，其阳性表达患者的5年生存率低，提示其阳性表达与胃癌患者预后相关，并是影响胃癌患者的预后独立因素之一。但胃癌的发生、发展、浸润、转移是多种基因及机制共同作用的结果[14-16]，仍需要进一步的探索。

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（收稿日期：2016-05-12）