HER—2、β—catenin及Ki—67在胃癌中的表达及其临床意义

摘要：目的 探讨胃癌组织中人表皮生长因子受体-2（HER-2），β-catenin和Ki-67的表达及与临床病理特征的关系。方法 应用免疫组化SP法检测90例胃癌组织中HER-2、β-catenin及Ki-67表达情况，并结合临床病理特征进行分析。结果 HER-2在胃癌组织中的阳性表达率为37.8%，β-catenin为65.6%，Ki-67为55.6%。HER-2、β-catenin及Ki-67在胃癌中的阳性表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关（P0.05）。HER-2、β-catenin及Ki-67三者之间在胃癌中的表达均呈正相关（P

关键词：胃癌；HER-2；β-catenin；Ki-67；免疫组织化学

Expressions and clinical significance of HER-2，β-catenin and Ki-67 in gastric cancer

QUAN Xi-yun1， LI Ming2

（1. Zhuzhou Central Hospital of Hunan， Hunan， Zhuzhou 412000， China； 2. The Affiliated Xiang-dong Hospital of Hunan Normal University， Hunan， Liling 412200， China）

Abstract： Objective To investigate the expressions of HER-2，β-catenin and Ki-67 in human gastric carcinoma and to study the relationship among them and the clinicopathological factors of gastric carcinoma. Methods The SP immunohistochemical stain method was used to detect HER-2，β-catenin and Ki-67 protein expressions in 90 samples of gastric carcinoma tissues. And clinical data were analyzed retrospectively. Results Positive rate of HER2 was 37.8%，β-catenin was 65.6 % and Ki-67 was 55.6% in gastric carcinoma. The positive expression rates of HER-2，β-catenin and Ki-67 protein in gastric carcinoma tissues were closely related to the differentiation of the carcinoma，invasion depth，lymphatic metastasis and TNM（ P 0.05） .There was a stable positive correlation among HER-2，β-catenin and Ki-67 expressions in gastric carcinoma tissues（ P

Key words： gastric carcinoma； HER-2；β-catenin ； Ki-67； immunohistochemistry

胃癌是严重危害人类健康的最常见恶性肿瘤之一，居消化系统肿瘤之首，预后差，生存较低[1]。临床收治的胃癌患者以中晚期为主，诊断时75%病人已有播散，患者虽经根治性切除治疗也有2/3最终复发和转移，其5年生存率仅为20%左右[2]。因此，如何更好地评估患者的预后，进行更有针对性的临床治疗，是医务工作者面临的重大挑战。本研究采用免疫组化SP法检测HER-2、β-catenin及Ki-67在胃癌组织中的表达，旨在进一步探讨它们与临床病理特征的关系及其三者之间的相互关系，为临床治疗及预后评估提供参考。

1.材料与方法：

1.1 临床资料 收集湖南省株洲市中心医院 2010年1月～2012年12月胃癌根治术标本，均经病理诊断为胃癌。对其中90例临床资料完整，蜡块保存良好的病例进行研究。患者术前均未接受过化疗、放疗等治疗，本组男54例，女36例，年龄22～85 岁，平均年龄53岁，肿瘤最大径0.8～11.0cm，平均4.02cm。按WHO国际组织分类标准：管状腺癌（高、中分化型）32例，低分化型腺癌51例，未分化型腺癌7例。按国际抗癌联盟（UICC）临床TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期59例；侵透浆膜层51例，未侵及浆膜层39例；伴有淋巴结转移63例。患者术前均未接受过放化疗及其它针对肿瘤的治疗。

1.2 方法 肿瘤组织标本均经甲醛固定、石蜡包埋，经HE染色组织学确诊。免疫组织化学采用SP法，并按照SP试剂盒（鼠抗人HER-2、β-catenin、Ki-67 单克隆抗体及免疫组化SP试剂盒购于北京中杉金桥公司）说明书操作，以磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定 ①HER-2结果判定参照修订后的Hercep Test P评分标准[3]，0为没有染色或≦10% 的瘤细胞有膜染色；（+）为﹥10%的瘤细胞有微弱的膜染色，或瘤细胞只有部分膜染色；（+ +）为﹥10%的瘤细胞有弱到中等的完全或基底外侧膜染色；（+ + +）为﹥10%的瘤细胞有中等到强的完全或基底外侧膜染色。②β-catenin以细胞膜或胞浆、胞核着黄色或棕黄色为阳性细胞。③Ki-67细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。β-catenin和Ki-67按照阳性细胞占细胞总数的百分分为四个等级：无着色或阳性细胞数75%的为强阳性（+++）。三者均用PBS代替一抗作阴性对照。

1.4统计学分析 采用 SPSS 17.0统计软件进行数据分析，组间比较采用χ2检验，其相关性采用Pearson 相关性分析，P

2. 结果

2.1 胃癌组织中HER-2、β-catenin及Ki-67 表达

90例患者HER-2、β-catenin及Ki-67 表达的阳性率分别为 37.8%、65.6%及55.6%，以β-catenin的表达率最高，CerbB-2 的表达率最低（见表1）。

表1 胃癌组织中HER-2、β-catenin及Ki-67的分级表达情况（例）

2.2 三种基因在胃癌中的表达与临床病理参数的关系

HER-2、β-catenin及Ki-67在胃癌组织中的表达与肿瘤分化程度、侵袭深度、有无淋巴结转移及 TNM 分期有关（P0.05） 。高-中分化的胃癌病例阳性表达明显高于低-未分化癌（ 见表 2） 。

2.3 三种基因表达的相关性

HER-2和β-catenin的相关系数（ rs = 0.505，P

表2 HER-2、β-catenin、Ki-67在胃癌中的表达与临床病理因素的关系（n，%）

3. 讨论

HER-2（又称c-erbB-2/Neu）是一种细胞来源的原癌基因，位于17号染色体长臂（17q21），编码p185跨膜糖蛋白。它参与抑制细胞凋亡，维持或促进肿瘤细胞生长，增强肿瘤细胞的侵袭力[4]。其阳性表达不仅存在于乳腺癌中，也广泛存在于胃癌、结肠癌、膀胱癌、卵巢癌、肺癌等多种肿瘤中，并且发现其异常扩增或者过度表达对肿瘤的治疗和预后有着明显的相关性。本研究结果显示：HER-2在胃癌组织中的阳性表达率为37.8%，过表达率（+++）为13.3%，与ToGA[3]试验的HER-2的过表达率（+++）5.9%-32.8%相符合。本研究结果还显示HER-2阳性表达与胃癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关。说明HER2参与了胃癌的增殖、侵袭、转移等行为，和文献研究基本一致[5]。曲妥珠单抗（ Herceptin） 是一种针对 HER-2原癌基因产物的人源化单克隆抗体，作为乳腺癌治疗的第一个分子靶向药物，无论是单用还是联合化学疗法都已在HER-2 过表达的乳腺癌临床治疗中取得了明显疗效。ToGA试验显示胃癌Herceptin与化疗联合的疗效优于单纯化疗，并成为HER-2 阳性胃癌患者的重要靶向治疗药物。因此，检测HER-2表达情况有助于胃癌患者靶向药物治疗的初筛。

β-catenin是一种多功能蛋白，与跨膜蛋白E-cadherin形成复合物，参与细胞间的黏附且为Wnt信号通路的构成蛋白之一，它的异常表达参与胃癌的增殖和侵袭转移过程[6]。当β-catenin蛋白本身异常或降解途径异常时，造成Wnt信号传导通路的异常激活，β-catenin进入核内与转录调控因子TCF/LEF家族成员结合，继而激活下游靶基因导致肿瘤的发生发展。胞浆内由于降解系统的作用游离的β-catenin分子几乎不存在。β-catenin在胃癌组织中表达定位明显发生变化，由细胞膜转变为细胞核及核周区。此现象更易解释β-catenin影响基因转录和激活。本研究结果显示：β-catenin在中、高分化的胃癌病例阳性表达明显高于低、未分化癌，其表达随浸润深度增加、淋巴结转移等明显增高，提示β-catenin在胃癌的发生发展中起重要作用。

Ki-67 是一种存在于增殖细胞核基质内的抗原，可直接敏感地反映肿瘤细胞的增殖活性，并能较全面地反映增殖细胞的数量，是目前应用最广泛的反映肿瘤细胞增殖速度和预测肿瘤预后的指标之一[7]。肿瘤细胞增殖程度越高，则肿瘤组织生长越快，越容易发生转移，恶性程度越高。本实验结果显示Ki-67 的阳性表达率为55.6%，与肿瘤分化、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关。与文献报道基本一致[8]。本研究结果还显示Ki-67、HER-2、β-catenin三者之间的表达均呈正相关，其具体的相互作用机制有待进一步研究。

胃癌的发生、发展是一个长期、多因素、多基因作用的复杂过程，因此寻找对预防疾病及预测治疗有效的分子标志物显得尤为重要。HER-2、β-catenin及Ki-67参与胃癌的生长、侵袭和转移过程，联合检测有助于胃癌患者靶向药物治疗的初筛及对患者的预后评价。

参考文献：

1.Jemal A， Siegel R， Ward E， et al. Cancer statistics，2009[J]. CA Cancer J Clin， 2009， 59（4） ：225 -49.

2.Wang DR， Chen GY， Liu XL， et al. CD44v6 in peripheral blood and bone marrow of patients with gastric cancer as micro-metastasis. World J Gastroenterol， 2006；12 （1）：36-42.

3.Bang YJ， Van Cutsem E， Feyereislova A， et al. Trastuzumab in com-bination with chemotherapy versus chemotherapy alone for treat-ment of HER2 positive advanced gastric or gastro-oesophageal junction cancer（ ToGA）： a phase3， open – label， randomised con-trolled trial[J]. Lancet， 2010， 376（ 9742）： 687-697.

4.Blind C， Koepenik A， Pacyna-Gengelbach M， et al. Antigenicity testing by immunohistochemistry after tissue oxidation. J Clin Pathol， 2008， 61（1）： 79-83.

5.陈斌， 罗荣城， 崔斐， 等. 胃癌 HER-2/Neu 基因表达与预后的相关性[J].南方医科大学学报， 2006，26（3）：344-347.

6.王 莉， 张 帆， 吴平平， 等.β-catenin在胃癌增殖和浸润中的作用[J].临床与实验病理学杂志， 2006，22（1）：49-53.

7.Potemski P， Pluciennik E， Bednarek AK， et al. Ki-67 expression in operable breast cancer a comparative study of immunostaining and a real time PT-PCR assay[J]. Pathol Res Pract，2006，202（7）：491-5.

8.刘伟， 余英豪， 欧阳学农， 等. P53和Ki67在胃癌中的表达及其临床意义[J]. 世界华人消化杂志， 2011，19（4）： 367-373.