乙肝HBsAg弱反应性血清标本中HBV DNA定量分析

（河南省黄泛区中心医院 河南 466632）

【摘要】目的：对临床检测中乙肝HBsAg弱反应性血清标本进行HBV DNA定量分析，探讨其相关性及临床意义。方法：收集进行HBsAg定性检测（ELISA方法）的弱反应性临床血清标本，使用罗氏电化学发光免疫分析系统进行HBsAg定量分析，对确认的弱反应性标本使用实时荧光定量PCR分析系统进行HBV DNA分析，对实验结果及其产生机制进行初步探讨。结果：使用国产ELISA试剂检测临床血清标本2351份，使用罗氏检测系统对其中的弱反应性标本133份进行HBsAg定量检测，确认其中103份属于弱反应性标本，再使用实时荧光定量PCR方法进行HBV DNA检测，其中阳性者17例。结论：在我国HBV感染人群中，部分人群的HBsAg表达水平较低，但其体内仍存在HBV病毒复制，因此，必须重视HBV检测中出现的弱反应性结果。

【关键词】乙型肝炎表面抗原 弱反应性 HBV-DNA

【中图分类号】R446.6【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2011）06-0151-01

HBsAg弱反应性是临床常见乙肝免疫标志物检测结果，但目前对该结果的诠释，包括其与乙肝病毒感染过程和状态的相关性，与乙肝病毒复制状况的相关性等问题并未引起临床的足够重视。本研究拟使用ELISA、电化学发光方法以及荧光定量PCR方法对HBsAg弱反应性标本进行相关研究，初步探讨HBsAg弱反应性与人体对病毒的免疫反应状态和病毒复制状况的关系。

1 材料和方法

1.1样本来源和保存：2009年12月至2010年6月本院住院、门诊及体检患者血清标本2351例。标本在三日内能完成所有实验的，标本在4度冰箱保存，如不能在三日内完成实验的，则将标本放入零下20度冰箱冷冻保存。

1.2 仪器：安图2010酶标仪，罗氏E601模块，罗氏lightcycle 480实时荧光定量PCR仪。

1.3 试剂：科华HBsAg ELISA定性检测试剂，罗氏配套HBsAg定量检测试剂，达安HBV DNA定量检测试剂，质控品与校准品均来自各自厂家配套产品。

1.4 检测方法：所有标本使用科华ELISA试剂检测HBsAg，对其中“灰区”标本和弱反应性标本使用罗氏电化学发光方法对其进行HBsAg定量检测，确定弱反应性标本后，对其进行HBV DNA检测。所有检测均在确认该方法当日当批室内质控在控后，使用随机数表法随机掺入正常检测标本进行检测。

1.5判断标准

1.5.1HBsAg定性可疑标准将ELISA定性检测A值为S／CO 0.8―1.2范围定义为灰区，对该范围的标本进行2份复检，2份中至少有1份位于灰区者为结果可疑，否则为阴性。

1.5.2HBsAg定性弱反应性标准将ELISA定性检测A值为S／CO 1.2―1.5范围的标本进行2份复检，2份检测A值均在该范围为弱反应性（以“±”表示）。其中1份在该范围为可疑，2份均无反应则须重新采血复查，仍无反应者报告阴性。

1.5.3HBsAg定量有反应性标准 ≥0.05 IU／ml有反应性。

1.5.4HBV DNA定量阳性标准≥5.0×102 copies／ml为阳性。

1.6统计学方法，对均数的比较使用t检验，率的比较采用卡方检验，统计学软件采用SPSS 10.0。

2 实验结果

2.1科华ELISA检测结果 2351份样本中，HBsAg处于灰区者81份（0.124%），弱反应性者52份（0.089%）。

2.2弱反应性样本经罗氏电化学发光试剂定量检测结果对81份定性灰区样本和52份弱反应性样本进行了定量检测，结果有反应性者分别为61份和42份，符合率分别为75.3%和80.7%。

2.3HBV DNA检测情况 见表1。对上述103份确认的弱反应性样本，以及30份假阳性样本进行HBV DNA检测，弱阳性标本中阳性17份，阳性率16.5%，结果分布区间：2.7×103copies／ml～4.2×105copies／ml，均值5.7×104copies／ml ，在30份复查阴性标本中，阳性者2份，结果为3.3×103copies／ml，4.1×104copies／ml，阳性率6.7%。弱反应性标本中HBV DNA阳性率与假阳性标本中HBV DNA阳性率有显著性差异。

表1 乙肝HBsAg弱反应性血清标本中HBV DNA定量分析

& P>0.05,无显著性差异；# P>0.05,无显著性差异；** P>0.01，有显著性差异；*** P>0.001，有显著性差异；

3 讨论

用ELISA方法检测HBsAg是临床大规模使用的乙型肝炎感染检测和筛查指标，该方法快速、简便、特异性也较高，因此应用广泛，但HBsAg仅能反映乙型肝炎病毒感染的免疫水平变化，而其检测方法的基本原理涉及的抗原抗体反应及判断标准本身也存在一定的局限性，在检测中会出现一定的“灰区”和弱反应性结果，从原理上讲，“灰区”和弱反应性结果的产生一方面来自不同试剂厂商使用材料纯度、组合、来源、方法学的不同所造成的影响；另一方面，HBV自身突变也能导致常规试剂检测值降低，另外还有一部分乙肝病毒感染人群的血清HBsAg呈低水平状态存在，因此，因此忽视弱反应结果尤其是阳性判断值以下的结果将造成该人群的漏检［1,2］。

使用电化学发光等较先进方法也能从一定程度上提高检测的准确性，但不能根本解决问题。HBV―DNA荧光定量检测能动态的观察肝炎病毒在体内的复制、疾病的感染程度、治疗方案的确定，药物疗效，对临床具有一定的指导意义。

本研究发现，在133份HBsAg定性检测（ELISA方法）为弱反应性的血清标本中，103份标本通过了罗氏检测系统的确认，30份确认为阴性，这从一定程度上反映了不同等级的免疫方法之间的差异。而通过对这些标本进行的HBV DNA分析表明，在ELISA检测中区分的“灰区”和“弱反应性”之间，其HBV DNA阳性率有显著性差异，显示了这种区分与乙肝病毒的感染率有一定的相关性。而其HBV DNA的量并没有显著性差异，提示“灰区”和“弱反应性”之间HBV 复制的水平无相关性。

而从确认后的103份HBsAg弱反应性标本中与30份确认为阴性的标本之间，其HBV DNA阳性率有显著性差异，提示HBsAg弱反应性人群的乙型肝炎感染率明显高于阴性标本。

因此，在HBsAg弱反应性标本中，仍有相当程度的乙肝病毒感染率，这与其他研究小组的研究结论类似［3,4］。

综上所述，本研究认为，要重视临床弱反应性标本，不仅要通过对试剂采购，质量控制、人员操作等进行标准化和规范，以减少操作误差并提高重复性，另外，还要对弱反应样本进行严格复检，有条件者可采用定量检测，并对结果做必要的说明，如“结果已经复查，建议定期复查或定量检测”，如果情况适用，还应建议患者做HBV DNA检测，以避免漏诊和误诊［5］。

参考文献

［1］ Coleman P F.Surveillance for hepatitis B surface antigen mutants.Med Viml，2006，78（Suppl 1）：56-58.

［2］ 田拥军，覃莉，刘慎沛等.8种国产HBsAg试剂盒检测变异HBsAg的效果评价.临床检验杂志，2007，25（4）：250-252.

［3］ 黄秀云.HBV DNA荧光定量PCR与乙型肝炎病毒血清标志物检测的相关性探讨［J］.辽宁医学杂志，2005，19（1）：29-30.

［4］ 窦蓉, 左雪梅, 钱方兴等. 定量检测乙肝病毒免疫标志物与HBV DNA之间的关系及临床意义. 中国医学检验杂志，2010，11（2）: 63-64

［5］ 李金明. 乙型肝炎病毒血清标志物测定及结果解释的若干问题. 中华检验医学杂志，2006，29（5）: 385-389.