HPLC测定盐酸奥洛他定滴眼液中苯扎氯铵的含量

摘　要：目的建立hplc测定盐酸奥洛他定滴眼液中苯扎氯铵含量的方法。方法以氰基键合硅胶为填充剂；乙腈，水，三乙胺为440:560:1，用磷酸调pH 3.4为流动相，流速1.0mL／mim检测波长210mm。结果苯扎氯铵在0.05～0.15mg／mE范围内呈良好的线性关系(r=0.9998)；平均回收率99.7％(m=9.RSD-0.69％)。结论此方法简便灵敏准确，重复性好，可用于测定盐酸奥洛他定滴眼液中苯扎氯铵的含量。

关键词：盐酸奥洛他定滴眼液；苯扎氯铵：高效液相色谱法；含量测定

中图分类号：P088.1　文献标识码：A　文章编号：1672-979xf2010)11-0425-03

盐酸奥洛他定滴眼液治疗过敏性结膜炎临床效果好，安全性高。该滴眼液用苯扎氯铵(benzalkonium chloride)做防腐剂。苯扎氯铵是由3种正烷烃基(n-Ci2H25、B-C14H29和n-C16H33)取代二甲基苄基氯化铵组成的同系物混合物，3种同系物的杀菌特性不同。美国药典规定了配方中3种同系物的含量，中国药典未规定烷基组成，仅规定用滴定法测定烷基总含量。本研究用HPLC法，以氰基键合硅胶为填充剂，可检测盐酸奥洛他定滴眼液中苯扎氯铵3种同系物的单组分含量及总量。此方法快速、准确，重现性好，灵敏度高。

1　仪器与试剂

1.1　仪器

Waters 2695系列高效液相色谱仪，包括2996PAD检测器与Empower色谱工作站(Waters)；CP225D电子分析天平(Sartorius)。

1.2　试剂

苯扎氯铵对照品(百利威公司，100.0％)；盐酸奥洛他定滴眼液及苯扎氯铵空白基质(本公司自制，样品批号20081023，20081024，20081025；空白基质批号20081026)；苯扎氯铵(上海经纬公司)；乙腈(色谱纯，DikmaTechnologyInc，)；超纯水：其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1　色谱条件

色谱柱：WamsSph CNRP(4.6mm×150mm，5岫)；流动相：乙腈，水，三乙胺440:560:1，用磷酸调pH 3.4，检测波长210nm，进样体积10μL。

2.2　溶液配制

2.2.1　对照品溶液制备称取苯扎氯铵对照品约25mg，置入25mL量瓶，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。再吸取1mL置入10mL量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，图谱见图1。

2.2.2　供试品溶液制各样品直接进样，图谱见图2。

2.2.3　以同系物C12C14和C16峰面积的总和按外标法计算，即得。

2.3　绘制标准曲线

称取苯扎氯铵对照品约25mg，置入25mL量瓶，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取0.5，0.8，1，1.2，1.5mL，置入10mL量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。分别取不同浓度的对照品溶液自动进样，记录色谱峰面积。以峰面积A为纵坐标，浓度c(mg／mL)为横坐标，绘制标准曲线。苯扎氯铵在0.05～0.15mg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程：A=9910149C-24 887，r=0.9998。

2.4　系统精密度

取0.1mg／mL苯扎氯铵对照品溶液，连续进样6次，苯扎氯铵峰面积的相对标准偏差(RSL)为0.43％，表明方法有较好的系统精密度。

2.5　重复性

按2.2项配制对照品溶液，由同一批样品配制6份供试品溶液。取以上溶液进样，记录色谱峰面积，按2.2项方法计算含量，平均标示含量99.1％，RSD=0.73％。

2.6　回收率

称取苯扎氯铵对照品约12.5，25.37，5mg各3，份，分别置入25mL量瓶，加适量空白基质，振摇溶解，再用空白基质稀释至刻度，摇匀。再取1mL置入10mL量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，配制成3个水平9份供试品溶液。按2，2项配制对照品溶液。取以上溶液自动进样，记录色谱峰面积，按2，2项方法计算平均回收率为99.7％，RSD=0.69％，结果见表1。

2.7　溶液稳定性

按2.2项配制对照品溶液和供试品溶液，取20μL自动进样，记录色谱峰面积。将供试品溶液置于室温下，取8.24h新配制的对照品溶液和供试品溶液自动进样，计算24h内苯扎氯铵含量的相对变化为0.29％，表明供试品溶液在24h内稳定，结果见表2。

2.8　样品含量测定

分别取3批盐酸奥洛他定滴眼液，按2，2项配制对照品溶液和供试品溶液，测定苯扎氯铵含量分别为100.0％，102.2％，101.3％。

3　讨论

本方法简便易行，重复性及灵敏度均较高，可用以测定盐酸奥洛他定滴眼液中苯扎氯铵的含量。本法测定中对照品显示3个峰即同系物峰，而样品只出现1个峰即同系物C这与国产原料有关且与文献报道一致。

参考文献

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