围产期孕妇B组链球菌检测的临床意义

【中图分类号】R71 【文献标识码】A 【文章编号】1004―7484（2013）09―0711―02

B族链球菌（group B streptococci，CBS）是一种革兰阳性球菌，常定植于人下生殖道及胃肠道，也可定植于婴幼儿上呼吸道[1-2]。20世纪60年代首次发现其可导致严重的新生儿感染，随后进行了大量的研究，发现B族链球菌在围产期感染中是第一位的致病菌，可导致围产儿死亡。同时也是孕产妇生殖道感染的重要致病菌，可以导致泌尿系统感染、羊膜绒毛膜炎、产褥感染、孕产妇败血症和早产[3-6]。1996年美国疾病控制和预防中心（Centers for Disease Control and Prevention，CDC）联合其他专业机构，制定了“围产期B族链球菌疾病预防指南”，于2002年进行了一次较大的修改，并在2010年11月更新了指南。经过10年多的实践，新生儿GBS感染率下降了约80%[7]。长期以来我国对B族链球菌感染现状不够重视，直至近期，国内报道了一些B族链球菌感染导致新生儿死亡的病例，且研究提示，新生儿肺炎死亡病例中，B族链球菌是第一位的致病菌[8-9]。因此，本研究旨在比较不同方法检测B族链球菌阳性的准确性，了解妊娠晚期B族链球菌带菌状况及其对妊娠结局的影响。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2011年5月～2012年12月在我院妇产科住院和门诊进行B组链球菌检测的孕妇1100例，孕期为35～37周，平均年龄26.5±14.2岁，其中高龄孕妇（≥35岁）109例。经产妇81例，初产妇910例。所有孕妇的孕周均经末次月经、早中孕期B超检查进行确认和核对。近期药物应用史，经孕妇知情同意，取材由临床医师规范采集阴道和直肠拭子2份，立即送检。

1.2 实验材料 Todd Hewrtt培养肉汤、哥伦比亚血琼脂、胎牛血清购于美国Gibco公司，rapid ID 32 STAEP鉴定板条购于法国梅里埃公司，B组链球菌核酸检测试剂盒由中国泰普生物科技有限公司提供，实时荧光PCR仪购自是美国Stratagene公司。

1.3 方法

1.3.1 标本采集：具体方法参照2002年CDC推荐的取材方法[10]，取材时不需要使用阴道窥器，每例孕妇用两根拭子（阴道下1/3内分泌物，括约肌上2～3 cm处直肠分泌物）同时取材，一份用于细菌培养，一份用于实时PCR技术检测。

1.3.2 GBS的分离细菌与培养鉴定：将采集的拭子及时送检实验室，首先在安全柜内将沾有分泌物拭子头剪下置于增菌Todd Hewrtt肉汤中，37℃18～24h后，分别接种于10%胎牛血清和哥伦比亚血琼脂平皿，5%CO2环境、37℃18～36h，挑取有β溶血环的细小菌落，经革兰染色镜检为阳性球菌，触酶试验阴性，进行rapid ID 32 STAEP板条鉴定，若为B组链球菌，再进行细菌药敏MIC实验。

1.3.3 GBS核酸的提取和实时荧光PCR检测：将取样后的拭子内加入1ml 清洗液（试剂盒内提供），室温震荡5min，收集清洗拭子后的液体至1.5ml离心管，12000rpm/min 离心3min，弃上清，加入清洗液1ml，离心后弃上清，再取80μl清洗液重悬沉淀，加入固型DNA提取物0.1g，震荡5min后，95℃ 2min，冰上5min，12000rpm/min 离心5min，然后取上清进行PCR扩增。实时荧光PCR扩增程序参照说明书进行操作。

1.3.4 测序鉴定：扩增后PCR产物送上海生物工程股份有限公司进行测序分析。

1.4 统计学分析 应用统计学软件SPSS13.0对所有检测数据进行分析，计量资料以x±SD表示，计数资料进行X2检验，以P

2 结果

2.1 两种方法检测GBS感染的比较 培养法检测的阳性率为6.1%（67/1100），实时荧光PCR检测法的阳性率为11.3%（124/1100），两种方法的相比差异有统计学意义（X2=8.7，P

2.2 GBS感染对围产期孕妇妊娠结局的影响 对1100例围产期孕妇GBS感染阳性和感染阴性的孕妇妊娠结局进行比较，GBS感染阳性的围产期孕妇胎膜早破和宫内感染的机会增加，新生儿感染的发生率升高，差异有统计学意义（P

3 讨论

B族链球菌是一种寄生于人类下消化道及泌尿生殖道的条件致病菌。流行病学研究表明，不同地区、不同种族的妊娠晚期妇女B族链球菌带菌率为6.5%～36.0%，国内报道的妊娠妇女B族链球菌带菌率为10.1%～32.4%[11]。国内研究标本多取于阴道后穹隆分泌物，并且检测孕周也不完全相同，方法与国际通用的方法有一定的差异，因此，需要进行相关的研究。

在本研究中，GBS培养阳性率为6.1%，与国内报道相近。而实时荧光PCR检测GBS的阳性率明显高于传统培养法，不仅具有操作简单、检测时间短、3h内即可得到检测结果等优点，而且敏感性和特异性均很高。GBS培感染阳性的孕妇胎膜早破和宫内感染的几率明显高于非GBS感染孕妇，差异有统计学意义（P6h、初产妇产程延长、阴道检查次数>6次、伴发子宫内膜炎及施行剖宫产时更易发生感染。在产科发热患者血培养所分离到的细菌中，GBS高达11%～21%。GBS感染后的临床特点是发热出现早，平均产后11h即发热，伴有畏寒、心率快、腹胀、子宫复旧不良，宫旁或附件触痛。有报道在GBS（+）而行剖宫产的妇女中，产后子宫内膜炎发生率为61.1%，显著高于GBS（-）组，GBS（+）也与产后盆腔炎、蜂窝组织炎等相关，35%由GBS单独引起，65%与其他细菌混合感染[13]。在本研究中，GBS感染与否对孕妇早产的影响没有统计学差异，但在导致新生儿获得性感染方面，GBS感染阳性组新生儿感染机率明显高于GBS检测阴性的。原因可能为：根据新生儿GBS感染发生的时间分为早发型、晚发型及复发型。早发型指出生后7d内发病，通常发生在出生后24h或72h内，以新生儿败血症为主，由宫内垂直感染所致；晚发型感染通常指出生7～90d内的感染，可由产时垂直传播、院内感染或其他因素所致，90%为Ⅲ型GBS，以肺炎、脑膜炎为主。有产科并发症的早产儿易受感染，发病率是足月儿的7倍，因脓毒血症死亡者高达90%；复发性是指新生儿GBS菌血症、脑膜炎等治愈后，经过一段时间间隔发生了与GBS菌血症、脑膜炎有关的新的临床疾病，并从体液中找到GBS。发病高峰在出生后90d内，发病率为0～8.8%[14]。由于新生儿疾病的基础背景不同，预防感染的措施对于早发型感染有效，但是不能预防晚发型感染。

本研究显示，实时荧光定量PCR方法检测围产期孕妇是否伴有GBS感染，具有较高的敏感性和特异性，如有GBS感染阳性的孕妇，该方法有利于临床接诊医生及时采取诊疗措施，降低母体宫腔感染和新生儿早期侵入性感染的发生率，提高母婴的生活质量，该方法有望成为围产期孕妇监测体内是否有感染的常规检测项目。

小结：围产期孕妇B族链球菌感染阳性明显增加宫内感染及新生儿入侵性感染的发生率，对妊娠结局造成不良影响。实时PCR检测B族链球菌感染有较高的敏感度和特异度，有望成为妊娠晚期孕妇常规检测B族链球菌的方法。

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