ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与应用分析

摘要：目的 探讨分析ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与临床应用。方法 应用ELISA对我血库收集的血液标本32000份进行HIV抗体检测；同时选择正常人群血清与试剂盒内HIV阳性血清混合稀释，混合恰当比例，冷藏保存使用；同时将自制的质控血清保存1～12个月，对其均匀性、精确性及稳定性进行评价。结果 ELISA法检测结果显示阳性115例，阳性率为0.36%，实际上HIV抗体为阳性共120例，漏诊率为0.016%；研究结果显示正常人群的血清与试剂盒内HIV阳性血清以10：1的比例进行混合最为恰当；对自制的质控血清为期1～12个月的观察，发现其均匀性、S/CO值、准确性12个月的差异不显著（P

关键词：ELISA；HIV抗体；质控血清 HIV指人类免疫缺陷病毒，HIV病毒对人体的免疫系统造成破坏进而削弱机体的免疫抵抗力，造成健康人群患上获得性免疫缺陷综合征，感染HIV的途径主要包括血液传染、、母婴传播。现阶段，临床上对于艾滋病的治疗尚无显著进展，患者大都以死亡告终，其对人类的身体健康和生命安全产生极大的威胁，引起了国内外医学的高度重视[1]。目前，艾滋病主要以早发现及早控制为主，ELISA法在HIV抗体的检测中作用显著，然而有诸多因素会导致其检测结果出现偏差，故进行室内控制十分有必要，本文旨在探讨分析ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与临床应用，具体信息如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 由上海纪宁实业有限公司提供的人抗人类免疫缺陷病毒抗体（HIV）酶联免疫试剂盒；由北京万泰生物药业有限公司提供的HIV抗体试剂盒，批准文号：国药准字S20030001；由卫生部临检中心提供的临界值质控血清，批号为NCCL 070049；由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供的酶标仪。

1.2 方法 选择抗-HIV ELISA法对所有标本进行检测，一孔或两孔判断为阳性；将HIV抗体试剂盒的阳性血清通过诊断试剂进行检测，同时将阳性血清通过包含10%小牛血清PBS缓冲液稀释，每支装0.5ml于零下20℃的环境下保存待检，操作严格执行无菌操作，且严格遵循操作说明进行。

1.3 统计学分析 采用SPSS13.0统计学软件，计数资料采用x2检验，P

2 结果

应用ELISA法对HIV抗体检测结果显示阳性115例，阳性率为0.36%（115/32000），但实际上HIV抗体为阳性的共120例，漏诊率为0.016%（5/32000）；研究结果显示正常人群的血清与试剂盒内HIV阳性血清以10：1的比例进行混合最为恰当；对自制的质控血清为期1～12个月的观察，发现其均匀性、S/CO值、准确性12个月的差异不显著（P>0.05），无统计学意义，见表1。

3 讨论

自从1981年在美国发现首例由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的艾滋病以来，人类一直在与其进行着不懈的斗争。各类检测方法及检测手段都在不断改进和更新。目前，在HIV初筛实验中使用的第三代酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂，不仅包被的抗原高度纯化，且采用重组和多肽相结合的技术。双抗原夹心法的应用使HIV抗体需两次选择，大大提高了敏感性，使漏检率明显下降。但该检测方法对检测人员的操作技术及试验条件要求较高，易出现假阳性等。因此，开展实验室质量控制是保证实验室分析结果准确性的必要基础，也是保证实验间有可比性的关键。

随着艾滋病流行形势的日趋严峻，新发现的感染者数量不断增加，艾滋病检测也显得越来越重要。目前国内检测HIV抗体的方法主要是酶联免疫法（ELISA）。2004年版的《全国艾滋病检测技术规范》要求采用ELISA法时必须要包含内部和外部对照质控血清，其中外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异，通常为弱阳性对照，以该试剂盒临界值（Cut-off值）的2～3倍为宜。

HIV病毒主要侵入机体的T淋巴细胞[2]，与细胞结合而存在于血液之中，HIV抗体分布于患者的血液、、阴道分泌物、唾液、尿液之中，然而在血液、、阴道分泌物中浓度最高。近些年，感染HIV病毒的患者逐年上升，影响患者的身心健康、对生命安全产生威胁[3]，现阶段仍无有效的治疗方法，主要停留在预防控制阶段，因此及时的诊断并加以控制十分关键[4]。

临床上对HIV抗体的检测需要通过建立HIV抗体检测质量系统，有其特殊性，因此做好实验室的质量管理从而确保检测结果的准确可靠[5]。卫生部门的规章制度明确规定临床上对HIV抗体的检测需包含外部与内部质控血清两部分，主要是由于处于临界值上下的弱阳性外部对照质控血清，使得反应强度改变较易察看；然而为了保证HIV抗体检查结果的可靠准确，在应用ELISA法检测过程中需要有弱阳性对照质控血清，但是在临床检测中，医院由于较难获取HIV阳性抗体标本而需要通过自制质控血清。本文主要对ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与应用分析[6]，研究发现显示正常人群的血清与试剂盒内HIV阳性血清以10：1的比例作为自制质控血清的浓度最为合适，且于对自制的质控血清进行1～12个月的评估，结果显示其均匀性、S/CO值、准确性12个月无显著变化，表明自制质控血清较为稳定，能够作为HIV抗体室内质控血清，但是其存在挥发的可能性，因此质控血清使用次数需

综上所述，ELISA在HIV抗体的检测中具有较高的准确度，且检测结果能够在短时间内反映，值得临床推广应用；同时发现自制质控血清经济方便，且具有稳定性高的优点，具有较大的应用前景。

参考文献：

[1] 韦雪芳. ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备[J]. 检验医学与临床，2011，8（20）：2527-2528.

[2] 罗雯斌. 探讨ELISA法检测HIV抗体的影响因素[J]. 检验医学与临床，2010，7（20）：2252-2253.

[3] 乔健健. 直接ELISA法与间接ELISA法检测HIV抗体的对比分析[J]. 中国实用医药，2012，7（21）：111-112.

[4] 刘建军，李永明. ELISA检测HIV抗体的影响因素及质量控制措施[J]. 基层医学论坛，2012，16（17）：2231-2232.

[5] 胡静云，陈善昌. ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与应用[J]. 实验与检验医学，2009，27（5）：553，568.

[6] 赵建明. ELISA法检测HIV抗体的质量控制[J]. 医学信息：上旬刊，2010，23（15）：2962.

[7] 陈慧英，张锦锋，岑小鹏 .ELISA检测乙型肝炎HBsAg室内质控血清的试制和使用 [J] -上海医学检验杂志2000（04）：56-57

[8] 丛，蒋虹，金光，等.SHIV1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株静脉感染中国恒河猴有效浓度的确定 [J] .中国比较医学杂志，2011（4）：102-103.

[9] 刘浩，刘强，丛，等.模拟HIV性传播特点的SIVmac239恒河猴直肠黏膜感染 [J] .中国实验动物学报2010（2）：32-33.

[10] 史晓燕，张洪花，王慧，等.青岛地区43504例孕产妇HIV抗体检测结果分析 [J] .中国预防医学杂志2009（9）：88-90.

[11]刘浩，刘强，丛，等.C亚型SHIVCHN19P4强毒株在中国恒河猴体内的传代研究 [J] .中国比较医学杂志，2011（4）：66-67.

[12] 周伟清.抗凝剂在临床检验中的应用 [J] .现代中西医结合杂志，2006（24）.