人生长激素对人胃\结肠癌细胞株细胞周期的影响

【摘要】 目的 了解重组人生长激素(rhGH)在体外对人胃、结肠癌细胞有无促进增殖作用。方法 实验分对照组、rhGH组、奥沙利铂(L-OHP)组和L-OHP+rhGH组,利用体外细胞培养及流式细胞仪等方法,测定不同浓度的rhGH对人胃癌细胞株MKN45、人结肠癌细胞株Colo320细胞周期和增殖指数(PI)的影响。结果 rhGH在体外不促进MKN45和Colo320细胞分裂增殖。rhGH组与对照组、L-OHP+rhGH组与L-OHP组比较均无统计学意义(P>0.05),L-OHP+rhGH组与对照组比较或L-OHP+rhGH组与对应的rhGH组比较,阻滞于G0~G1期的细胞数增加,S期和G2~M期细胞明显减少,PI明显降低(P

【关键词】重组人生长激素;胃肿瘤;结肠肿瘤;细胞周期

In vitro effects of recombinant human growth hormone on cell cycle of human gastric and colonic cancer cell line

HUANG Shi-hua,CHENG Jia-yong,ZENG De-miao.Department of General Surgery,

The Fristh People’s Hospital of Zhaotou,Zhaotong 670000 YunNan,China

【【Abstract】 Objective To study effects of recombinant human growth hormone(rhGH)on proliferation of human gastric and colonic cancer cell in vitro.Methods After experiment were divided into control group,rhGH group,oxaliplatin(L-OHP)group and L-OHP+rhGH group,Cell cycle and Proliferation Index(PI)of human gastric and colonic cancer cell line,MKN45 and Colo320,were determined in different concentration of rhGH.Results In vitro the distincteffects of rhGH on proliferation of cell line,MKN45 and Colo320 were not found.There were not statistical significance compared rhGH group with control group or compared L-OHP+rhGH one with L-OHP one(P>0.05).The cells arrested in G0~G1 phase obviously increased,meanwhile,the cells in S phase and G2~M phase and PI distinctly decreased compared L-OHP+rhGH group with control group or between L-OHP+rhGH group and rhGH group in comparison(P

【Key words】Recombinant human growth hormone; Stomach neoplasm; Colonic neoplasm; Cell cycle

作者单位:670000云南省昭通市第一人民医院普外科(黄世华);

昆明医学院第二附属医院(陈嘉勇 曾德妙)

重组人生长激素(rhGH)对消化道恶性肿瘤患者术后进行代谢调理治疗,明显促进了肿瘤患者的康复,已经在外科领域广泛应用。但人生长激素(hGH)作为一种生长因子,肿瘤患者术后能否使用rhGH存在争议。本研究从细胞周期角度探讨rhGH对人胃、结肠癌细胞株MKN45和Colo320增殖的影响,为临床胃、结肠癌术后患者能否应用rhGH提供一定的实验参考依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器 人胃癌细胞株MKN45、人结肠癌细胞株Colo320(中科院上海细胞生物所细胞库);重组人生长激素(SAIZEN,瑞士Sernono公司);奥沙利铂(L-OHP,江苏恒瑞医药股份有限公司);RPMI1640(美国GIBCO公司)。小牛血清(浙江省杭州四季青生物工程材料有限公司);流式细胞仪(美国COULTER公司,EPICXU型)。

1.2 实验分组 对照组(RPMI1640)、抗肿瘤药物组(L-OHP)、rhGH组及L-OHP+rhGH组,后两组又分为4个亚组,表1。

1.3 细胞培养及样品制备 MKN45、Colo320细胞在含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液中、37℃、5%CO2的培养箱中培养。取对数生长期的细胞用0.25%胰蛋白酶消化,4 g/L台盼蓝染色后计算细胞活率(Via=99%),并细胞计数,调整细胞悬液密度为1×105/ml备用。将细胞悬液接种于6孔板中,2 ml/孔,每组设3个复孔,4 h细胞完全贴壁后加入药物。培养48 h后收集细胞,PBS液洗涤,70%乙醇固定,4℃保存24 h。加入荧光素(碘化丙啶)染色,激发波长488nm进行细胞周期分析。

表1

实验分组及药物浓度

组别药物浓度

分组亚组L-OHP(μg/ml)rhGH(ng/ml)

对照组00

L-OHP组40

rhGH组1050

20100

30200

40400

L-OHP+rhGH1组450

rhGH2组4100

rhGH3组4200

rhGH4组4400

1.4 统计学处理 数据用x±s表示;统计方法用SPSS 10.0软件统计包进行单因素方差分析或非参数检验。

2 结果

2.1 细胞周期 L-OHP组和L-OHP+rhGH组细胞周期发生明显变化。G0~G1期:L-OHP组和L-OHP+rhGH组比对照组或rhGH组显著增加,且L-OHP+rhGH与对应的rhGH组配对比较也显著增加(P0.05)。S期:L-OHP组和L-OHP+rhGH组比对照组和rhGH组降低(P

表2

药物作用后MKN45和Colo320细胞株各组的增殖周期百分数( x±s)

组别

MKN45(%)Colo320(%)

G0~G1SG2~MG0~G1SG2~M

对照组51.5±1.736.2±1.512.3±3.325.6±3.240.1±1.634.2±4.4

L-OHP组81.8±1.5*8.9±0.7*9.3±1.257.4±5.4*25.3±2.8*17.3±3.4*

rhGH1组54.6±3.433.5±6.511.9±3.326.4±2.539.9±1.533.6±2.7

rhGH2组53.8±4.134.7±6.111.5±1.625.9±3.741.0±2.234.0±3.4

rhGH3组52.1±4.235.8±7.312.1±3.526.9±3.142.1±2.230.9±2.0

rhGH4组53.9±4.733.9±7.812.2±3.925.4±4.241.9±2.632.7±2.0

L-OHP+rhGH1组82.5±3.4*7.7±3.8*9.8±1.957.3±3.0*26.8±3.1*15.9±1.1*

L-OHP+rhGH2组81.2±2.3*8.6±1.9*10.2±0.955.7±4.3*25.8±5.5*18.5±3.1*

L-OHP+rhGH3组83.1±1.8*8.1±5.0*8.8±4.556.1±7.2*27.0±5.0*16.8±4.5*

L-OHP+rhGH4组82.9±2.9*7.4±1.6*9.7±2.456.4±5.2*26.4±3.6*17.1±1.1*

注:与对照组和rhGH各亚组比较,*P

2.2 细胞增殖指数(PI)

PI(%)=S期细胞+G2~M期细胞G0~G1期细胞+S期细胞+G2~M期细胞×100%

L-OHP组和L-OHP+rhGH组的PI较对照组明显降低(P

表3

药物作用后MKN45和Colo320细胞株各组

细胞增殖指数( x±s)

组别MKN45(%)Colo320(%)

对照组48.5±1.975.4±3.2

L-OHP组18.2±1.6*42.6±5.3*

rhGH1组45.4±4.673.9±2.9

rhGH2组46.2±3.874.1±3.7

rhGH3组47.9±4.273.1±3.1

rhGH4组46.1±5.374.6±4.2

L-OHP+rhGH1组17.5±2.5*42.7±3.0*

L-OHP+rhGH2组18.8±2.9*44.3±4.3

L-OHP+rhGH3组16.9±1.4*43.9±7.2*

L-OHP+rhGH4组17.1±2.5*43.6±5.12*

注:与对照组和rhGH各亚组比较, *P

3 讨论

hGH用于肿瘤患者术后代谢调理至今存在争论,因为有不少学者认为hGH存在潜在影响肿瘤生长的促有丝分裂效应。本研究结果提示用hGH单独处理两株细胞,细胞周期、PI及DNA抑制率均未发生明显改变。此结果与Harrison等人发现给皮下接种了胰腺癌细胞的Athymic小鼠体内注射hGH的实验相符,15 d后检测发现,hGH体内应用仅提高了血浆IGF-1水平和肝内蛋白合成速率,没有促进肿瘤生长,也未改变细胞周期动力学和肿瘤组织的蛋白合成速率[1]。

大量文献报道,hGH能调节免疫功能,改善患者细胞和体液性的全身宿主防御,尤其是双向调控NK细胞,促进创伤患者的正氮平衡、加速伤口愈合、减少并发症有重要意义。有学者经动物实验证实,hGH和IGF-1能增强TPN应用过程中的免疫反应,促进TPN的蛋白合成作用,改善瘦体组织群,提高宿主的免疫功能,减少感染风险,但并不促进肿瘤生长。有文献报道rhGH用于术后恶性肿瘤患者的代谢调理[2,3],对促进患者正氮平衡起到了积极的作用。有的学者认为rhGH不会促进肿瘤细胞的增殖分裂,吴力群等[4]研究表明hGH对大鼠移植性肝肿瘤的生长无促进作用,与生长抑素合用可抑制肝肿瘤的生长。 Harrison等[1]报道在他们治疗的一组消化道肿瘤患者术后应用rhGH的随访病例中未发现其对肿瘤的复发,转移有促进作用;Jurgen等[5]对75例胃肠道肿瘤患者术后短期应用rhGH发现rhGH不会促进肿瘤的复发。Fiebig等[6]在体外用7种不同的人肿瘤细胞(结肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、卵巢癌和前列腺癌)培养实验中证实rhGH不会促进肿瘤细胞的增殖。

就体外实验的结果分析,MKN45和Colo320细胞都是恶性程度高的细胞株,本研究结果提示rhGH在体外总的趋势是对人胃、结肠癌细胞增殖分裂无明显促进作用。rhGH组与对照组、L-OHP+rhGH组与L-OHP组比较在细胞周期中各期细胞数量和PI均无显著差异(P>0.05),表明rhGH对体外培养的胃、结肠癌细胞无促进增殖的作用。在rhGH与L-OHP合用与对照组和rhGH组比较,S期及G2~M期的细胞及PI明显减少(P0.05)。为临床胃肠道肿瘤患者术后应用rhGH进行代谢调理提供一定参考。由于本实验未对细胞进行同步化处理,所以不能对胃、结肠癌细胞两株细胞株进行比较。

综上所述,本实验提示rhGH在体外不促进人胃、结肠癌细胞的增殖分裂,与以往文献报道结果相似[7-9]。

参 考 文 献

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