珍芪降糖胶囊囊壳中非法添加物――格列苯脲的鉴别

[关键词] 珍芪降糖胶囊；格列苯脲；TLC；HPLC

[中图分类号]R927 [文献标识码]C [文章编号]1673-7210（2008）03（c）-171-02

珍芪降糖胶囊是由珍珠、黄芪、黄精等14味中药组成的降糖类中药，具有益气养阴、清热生津的功效。临床用于气阴两虚，肺胃有热之消渴症。在日常的监督检查中，有用户反映该药降糖效果又快又好，我们怀疑该药可能非法添加了处方外化学药成分，于是我们对市售的珍芪降糖胶囊进行了检验。结果发现样品在胶囊内容物中，未检出格列苯脲，而在囊壳中检出了格列苯脲。

1 仪器与试药

LC-10TAVP高效液相色谱仪，附SPD-M10AVP二极管阵列检测器；CLASS-VP（日本岛津）；CS-930薄层色谱扫描仪（日本岛津）；电子天平HM-202（日本AND）。格列本脲对照品（批号：10135-0103，中国药品生物制品检定所提供）。珍芪降糖胶囊（哈尔滨某药业有限公司生产，批号：050101，规格：0.5 g/粒）；甲醇为色谱纯（天津市康科德科技有限公司），其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

为提高鉴别实验的准确性，我们采用了两种方法即TLC法和HPLC法进行鉴别。

2.1 TLC法

2.1.1 格列苯脲对照品溶液的配制精密称取格列苯脲对照品，加氯仿制成每1 ml含1.5 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的配制取本品5粒，除去内容物，将空囊壳置100 ml具塞锥形瓶中，加热水20 ml使溶化后转移至分液漏斗中，滤器用50 ml热水洗涤，洗液一并移至分液漏斗中，加氯仿提取两次（40、30 ml），分取氯仿液蒸干，残渣加氯仿1 ml使溶解，作为供试品溶液。

2.1.3 阴性对照液的配制取不含格列苯脲的空胶囊壳5粒，置100 ml具塞锥形瓶中，加热水20 ml使溶化后转移至分液漏斗中，滤器用50 ml热水洗涤，洗液一并移至分液漏斗中，加氯仿提取两次（40、30 ml），分取氯仿液蒸干，残渣加氯仿1 ml使溶解，即得。

2.1.4 测定法精密吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-环己烷-乙醇-冰醋酸(8∶13∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。再照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB薄层扫描法）进行光谱扫描(200~370 nm)。

2.1.5 TLC法结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；供试品光谱扫描图谱与对照品光谱扫描图谱一致。阴性对照液色谱图中，在与对照品色谱相应的位置上未出现相同颜色的斑点。

2.2 HPLC法

2.2.1格列苯脲对照液的配制精密称取格列苯脲对照品10mg，置50 ml量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.2.2 供试品溶液的配制取本品4粒，倾去内容物，擦拭干净壳内壁后，置50 ml锥形瓶中，加入热水20 ml，使胶囊完全溶化后，置分液漏斗中，以60 ml氯仿分3次提取，合并提取液置水浴上蒸干，残渣以流动相溶解并定容至5 ml。

2.2.3 阴性对照液的制备取4粒胶囊内容物，置50 ml锥形瓶中，以60 ml氯仿分3次提取，合并提取液置水浴上蒸干，残渣以流动相溶解并定容至5 ml。

取不含有格列苯脲的空胶囊壳4粒，置50 ml锥形瓶中，加入热水20 ml，使胶囊完全溶化后，置分液漏斗中，同法以60 ml氯仿分3次提取，合并提取液置水浴上蒸干，残渣以流动相溶解并定容至5 ml。

2.2.4 实验条件与方法为了提高检测的灵敏度和鉴别的准确性，本实验采用高效液相色谱法二极管阵列检测器，同时测定色谱和光谱图进行在线鉴别。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇－磷酸二氢铵溶液[取磷酸二氢铵1.725 g，加水300 ml溶解，用磷酸调节pH值至(3.50±0.05)](7∶3)为流动相；检测波长300 nm；流速：1.0 ml/min；色谱柱：Diamonsil TM(钻石)C18（250 mm×4.6 mm，5 μm；Cat.no.99903 S/N：8033825）。分别精密量取上述四种溶液各10 μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图。

2.2.5稳定性试验取供试品溶液一份，于室温放置，分别在0、2、4、6、8 h后取样10 μl ，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表1。

实验结果表明，样品溶液在上述时间内基本稳定。

2.2.6 HPLC法结果供试品色谱中，出现与格列苯脲对照品色谱保留时间相同的色谱峰，且该峰的紫外吸收光谱图也与对照品峰的紫外吸收光谱图完全一致。但在两种阴性对照液的色谱图中，均未出现与格列苯脲对照品保留时间相同色谱峰和与其对应的紫外吸收光谱图。

3 讨论

经以上实验初步断定：该批珍芪降糖胶囊的囊壳中非法添加了处方外化学药品格列苯脲。这说明造假者已不是简单地把违禁药品添加在药品中，而是想方设法逃避检查，造假的手段更加隐蔽，这也给药品质量监督带来一定的难度,对我们今后打击假药提出了更高的要求。

采用高效液相色谱法二极管阵列检测可同时将样品的色谱图与光谱图一次在线完成，大大提高了检测的准确度。

格列苯脲《中国药典》2005年版二部采用的检测波长为274 nm，本实验也进行了两个波长下的测定和最低检出限的测定，在300 nm波长处的最低检出浓度为0.43 μg/ml。结果表明：格列苯脲在300 nm 波长处的检测灵敏度高于274 nm，而且干扰峰较少。所以本方法采用300 nm为检测波长。

（收稿日期：2008-01-10）

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