双黄连粉针中连翘用大孔树脂精制的工艺研究

摘 要：本文采用AB-8大孔树脂对双黄连粉针连翘苷的精制工艺进行研究。以连翘苷为指标，采用高效液相进行测定，色谱条件为固定相为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（5μm，4.6mm×150mm），乙腈-水（25：75）为流动相，检测波长为277nm，流速1.0ml/min。本实验对大孔树脂精制双黄连粉针中连翘的工艺进行研究。

关键词：双黄连粉针；大孔吸附树脂；研究

双黄连粉针，是由双花、黄芩、连翘等制成的天然药物注射剂，具有清热解毒，辛凉解表的功效。双黄连粉针用于外感风热，邪在肺卫，证见发热，微恶风寒或不恶寒，咯痰色黄，咽红肿痛；急性上呼吸道感染、急性扁桃腺炎、轻型肺炎等，目前已成为全国临床治疗肺炎、上呼吸道感染等多种疾病的常用药物之一。连翘具有清热，解毒，散结，消肿的功效。《日华子本草》记载：“通小肠，排脓。治疮疖，止痛，通月经。”大孔吸附树脂是可以通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，具有选择性好，再生处理方便，吸附速度快等特点。本实验对大孔树脂精制双黄连粉针中连翘的工艺进行研究。

1 仪器与试药

P1201高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）； SB-4200DTN超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；TG16-WS台式高速离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；YP1004万分之一电子分析天平（南京麒麟分析仪器有限公司）；MW实验室级超纯水器（北京盈安美诚科学仪器有限公司）；Orion Star A 台式/便携式 基础型pH测量仪（赛默飞世尔科技水质分析仪器）。甲醇（成都市福田精细化工有限公司）、乙腈（济南世纪通达化工有限公司）、冰乙酸（成都市福田精细化工有限公司）。磷酸二氢钾（成都市福田精细化工有限公司）、三乙胺（东光鑫源化工有限公司）、甲酸（东光鑫源化工有限公司）、磷酸（成都市福田精细化工有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件

依据查阅文献及考查的结果[1-5]，确定色谱条件如下。色谱条件为固定相为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（5μm，4.6mm×150mm），乙腈-水（25：75）为流动相，检测波长为277nm，流速1.0ml/min。

2.2 供试品溶液的制备

精密称取样品适量，置于容量瓶内，加适量流动相超声溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取连翘苷对照品适量，加流动相制成每1mL含连翘苷300μg的溶液，即得。

2.4 流动相考察

分别考察乙腈-磷酸-0.2moloL-1磷酸二氢钾（50∶0.01：50），甲醇-0.1moloL-1磷酸二氢钾-三乙胺 （50∶50：0.01），乙腈一水一甲酸（17：80：0.5），甲醇∶2%冰醋酸水溶液（20∶80），乙腈-水-三乙胺（30：70：0.1），乙腈-0.1%磷酸溶液（50：50），乙腈-水（25：75）不同比例的流动相，结果以乙腈-水（25：75）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故x用乙腈-水（25：75）为流动相。

3 树脂的预处理

先用乙醇浸泡二十四小时以上，使树脂充分溶胀。采用湿法装柱，分别用20倍柱体积乙醇通过树脂层，用去离子水洗尽乙醇，用20倍柱体积的5%HCl溶液流速通过树脂层， ，而后用去离子水流速洗至中性。再用20倍柱体积的2% NaOH溶液通过树脂层，用去离子水洗至中性即处理完毕。

4静态吸附实验

4.1树脂吸附容量及吸附率的测定

称取预处理好的AB-8大孔树脂，装入三角瓶中，精密称取一定量干膏粉加适量水溶解也装入三角瓶中，在恒温水浴振荡器上振摇十二小时，过滤，测定滤液中连翘苷的浓度，计算吸附容量及吸附率。

4.2树脂解吸率测定

取上述吸附饱和的树脂，准确加入一定体积的乙醇溶液，置恒温水浴振荡器上振荡十二小时，过滤，测定解吸液中连翘苷浓度，计算解吸率。

5 树脂的动态吸附和洗脱实验

5.1 上样液浓度对吸附效果的影响

取不同克数的连翘干膏用水溶解，上样质量浓度分别为生药0.1克/毫升、0.2克/毫升、0.3克/毫升、0.4克/毫升、0.5克/毫升进行动态吸附实验。实验表明，上样质量浓度为生药0.3克/毫升时上样吸附效果最好。分别采用每小时一倍柱体积、每小时二倍柱体积、每小时三倍柱体积、每小时四倍柱体积、每小时五倍柱体积的流速上药，实验结果表明，每小时一倍柱体积、每小时二倍柱体积、每小时三倍柱体积的流速上药吸附效果相当优于每小时四倍柱体积、每小时五倍柱体积，每小时一倍柱体积、每小时二倍柱体积上药速度较慢，所以采用每小时三倍柱体积的流速上药。

5.2 洗脱剂乙醇浓度对连翘苷解吸效果的影响

上样质量浓度为生药0.3克/毫升，每小时三倍柱体积的流速上药，分别采用20%乙醇、30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇、60%乙醇洗涤，实验结果表明30%乙醇洗涤效果最好。

5.3 pH值对洗脱液的影响

上样质量浓度为生药0.3克/毫升，每小时三倍柱体积的流速上药，分别采用ph值为3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的30%乙醇洗涤，实验结果表明ph值为7.0的30%乙醇洗涤效果最好。

5.4 洗脱剂的用量

上样质量浓度为生药0.3克/毫升，每小时三倍柱体积的流速上药，洗脱剂为ph值为7.0的30%乙醇，分别采用洗脱剂的用量为4倍量树脂柱体积、5倍量树脂柱体积、6倍量树脂柱体积、7倍量树脂柱体积、8倍量树脂柱体积进行实验。实验结果洗脱剂的用量为6倍量树脂柱体积洗脱效果最好。

6 结果

最佳工艺为：上样质量浓度为生药0.3克/毫升，每小时三倍柱体积的流速上药，洗脱剂为ph值为7.0的30%乙醇，洗脱剂的用量为6倍量树脂柱体积。

参考文献

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