双黄连片对小鼠流感病毒和腺病毒感染的保护作用

【摘要】 目的 观察双黄连片在实验动物体内抗流感病毒和腺病毒的作用，为临床用药提供试验依据。方法 建立流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠模型和腺病毒ADV3株感染小鼠模型，分别灌胃给予高、中、低剂量双黄连片，设立病毒唑对照和正常对照组，观察各组小鼠的死亡数、测定小鼠存活时间、肺指数和肺组织流感病毒滴度。结果 双黄连片可明显降低流感病毒和腺病毒感染小鼠的死亡率，延长肺炎小鼠的存活时间,降低肺炎小鼠的肺指数；同时，双黄连片还能降低肺组织中流感病毒的滴度。结论 双黄连片在小鼠体内有明显抑制流感病毒和腺病毒的作用。

【关键词】 双黄连片；流感病毒；腺病毒；肺炎；肺指数

Antiviral activity of shuanghuanglian tablet against influenza A1 virus FM1 and adenovirus ADV3 in mice SHEN Si．yao，LIU Jun．hui，TIAN Yan．ru，et al.Department of Pathogenic Biology and Immunology，School of Medicine，Xi’an Jiaotong University，Xi’an 710061 China

【Abstract】 Objective To study the protective effects of shuanghuanglian tablet on influenza viral pneumonia and Adenoviral pneumonia in mice.Methods Viral pneumonia model established by influenza A1 virus FM1 and adenovirus ADV3 in mice.The mice were randomly divided into some groups:normal control group，shuanghuanglian tablethigh dose group(2．4 g/kg)，shuanghuanglian tabletmiddle dose group(1．2 g/kg)，shuanghuanglian tablet low dose group(0．6 g/kg)，virazole group(50 mg/kg)and normal control group.The mice were treated for 7 days,one time per day.Mortality wasobserved.Antiviral activities of shuanghuanglian tabletwere tested by survival time，pulmonary．index，and influenza virus tiler of lung in vivo.Results Compared with virazole group,shuanghuanglian tabeltcould obviously decrease mice mortality(P

【Key words】 Shuanghuanglian tablet;Influenza A1 virus FM1;Adenovirus ADV3;Pneumonia;Pulmonary．index

双黄连是由双花(金银花)、黄芩和连翘三味中药提取制成的中药制剂，主要用于抗病毒、细菌感染和增强免疫力，治疗由病毒或细菌感染所致疾病，经过多年临床观察，疗效确切。双黄连片是双黄连制剂中便于携带、疗效可靠的剂型，是抗病毒和细菌感染的理想药物，具有较广泛的应用前景。为了进一步观察双黄连片对呼吸道病毒的作用，本实验试验模拟自然感染，将流感病毒和腺病毒用滴鼻的方式感染小鼠，建立小鼠病毒性肺炎模型，然后连续灌胃双黄连片1周，通过死亡保护率、生命延长率、肺指数、肺炎抑制率和小鼠肺部病毒含量的测定等指标，了解双黄连片在动物体内抗流感病毒和腺病毒的作用，为临床应用提供一定的实验依据。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 实验药物 双黄连片，20片/盒，0．5 g/片；陕西白鹿制药股份有限公司生产，批号：060437。

1．1．2 对照药物 病毒唑注射液，0．1 g/1 ml/支，南京第三制药厂出品，批号：20051004

1．1．3 实验动物 ICR封闭群小鼠，体质量(20±2)g，雌雄各半。由西安交通大学医学院实验动物中心提供。

1．1．4 病毒株 甲型流行性感冒病毒鼠肺适应株FM1，腺病毒ADV3株，均购自中国医学科学院北京病毒研究所，本室液氮保存。

1．2 实验方法

1．2．1 病毒滴度测定 将FM1接种于9~11 d胚龄鸡胚尿囊腔，0．2 ml/胚，35℃孵育72 h；连续传代2次，收获鸡胚尿囊液。用血凝实验测定混合的尿囊液中FM1的血凝效价。混合尿囊液病毒滴度为1 280 Hμ/ml。病毒液分装，保存于．80℃备用。将腺病毒ADV3用Hela细胞单层连续传代2次，收获细胞培养液。收获的新鲜病毒液分装，冻藏于．80℃冰箱备用。

1．2．2 病毒毒力(LD50)测定 ICR小鼠100只，随机分10组，每组10只，雌雄各半。用Hank’s液分别将FM1病毒液和ADV3病毒液自原液浓度起做10倍梯度稀释，稀释度分别为1、10．1、10．2、10．3、10．4。用乙醚对小鼠进行浅麻醉。每一稀释度病毒滴鼻感染一组小鼠，0．03 ml/只，正常对照组用生理盐水滴鼻，0．03 ml/只。小鼠感染病毒后连续饲养观察7 d，逐日记录小鼠死亡数及活动情况。当正常对照组小鼠无异常，全部存活时，按Bliss法计算FM1和ADV3对ICR小鼠的LD50及其95%可信区间。

1．2．3 小鼠病毒性肺炎造模 采用10×LD50的病毒量滴鼻感染ICR小鼠。

1．2．4 死亡保护率和生命延长率测定 FM1病毒试验组ICR小鼠60只，随机分6组：高、中、低剂量双黄连片实验组、病毒唑对照组、肺炎模型组和正常对照组，每组10只，雌雄各半。除正常对照组外，其他组小鼠浅麻醉状态下滴鼻感染10×LD50 FM1，0．03 ml/只。高、中、低剂量双黄连片实验组小鼠分别灌胃2．4、1．2、0．6 g/kg双黄连片药液，病毒唑对照组小鼠灌胃50 mg/kg病毒唑注射液，肺炎模型组和正常对照组小鼠0．5 ml/20 g生理盐水灌胃。1次/d，连续给药7 d。逐日观察记录各组小鼠发病死亡数。ADV3病毒试验组ICR小鼠60只，随机分6组：高、中、低剂量双黄连片实验组、病毒唑对照组、肺炎模型组和正常对照组，每组10只，雌雄各半。除正常对照组外，其他组小鼠浅麻醉状态下滴鼻感染10×LD50 ADV3，0．03 ml/只。给药同上。统计各组小鼠存活时间，计算小鼠生命延长率和小鼠死亡保护率。

生命延长率(%)＝(实验组存活时间．模型组存活时间)/模型组存活时间×100%

死亡保护率(%)＝(模型组死亡率．实验组死亡率)/模型组死亡率×100%

1．2．5 肺指数测定 小鼠造模、分组及给药同上。给药7天期间死亡的小鼠在死亡后立即秤取体质量(g)和肺脏重量(g)。给药7日后仍然存活的小鼠断颈处死，秤取体质量和肺脏重量。计算肺指数和肺炎抑制率。

肺指数＝肺脏重量(g)/体质量(g)×100

抑制率(%)＝(模型组肺指数．实验组肺指数)/模型组肺指数×100%

1．2．6 病毒感染小鼠肺部组织中流感病毒含量的测定 将上述实验小鼠的肺脏称重，按每0．1 g肺组织加1 ml的比例加入生理盐水，组织匀浆器中研磨制成的匀浆液，1500 rpm/10 min离心，取上清液用血凝实验测定流感病毒的滴度(血凝单位Hμ/g)。

1．2．7 数据处理 采用SPSS10．0版本进行数据处理。计量资料比较采用ANOVA．LDS， 计数资料比较采用秩和检验，质反应指标用χ2检验，以P

2 结果

2．1 对流感病毒性肺炎小鼠的保护作用 流感病毒FM1给小鼠滴鼻后，连续观察7 d，FM1感染的肺炎小鼠死亡发生在感染后的第3、4和5 d。模型组小鼠在第3、4和5 天分别死亡4、4和2只，死亡率100%。双黄连片3个剂量组的小鼠死亡数随着剂量的增加而减少，对流感病毒性肺炎小鼠的死亡保护率分别为100%、80%和50%；小鼠的存活时间随着剂量的增加逐渐增高，与模型组比较差异有统计学意义(P

2．2 对腺病毒性肺炎小鼠的保护作用 腺病毒ADV3给小鼠滴鼻后，连续观察7 d，感染的肺炎小鼠死亡发生在感染后的第3~5天。模型组小鼠在第3、4和5 d分别死亡3、6和1只，死亡率100%。表2结果显示，双黄连片3个剂量组的小鼠死亡数随着剂量的增加而减少，对腺病毒性肺炎小鼠的死亡保护率分别为80%、60%和40%；小鼠的存活时间随着剂量的增加逐渐增高，与模型组比较差异有统计学意义(P

3 讨论

双黄连是我国医学的传统方剂,具有辛凉解表、清热解毒之功效。现代医学研究表明，双黄连具有广谱抗菌、抗病毒、增强免疫力等多种生物活性。在临床应用较广泛，主要有注射液、粉针剂、片剂等多种剂型。双黄连片剂由于其携带方便，服用简单，疗效确切，且没有明显的毒副作用，深受广大医生和患者的喜爱，在临床治疗上得到广泛应用。

据文献报道，双黄连有明显的体内、体外抗病毒作用[4]和广泛的抑菌、杀菌作用[7]。本实验通过建立小鼠病毒性肺炎模型，观察了双黄连片在小鼠体内抗流感病毒和腺病毒的作用，通过比较发现，其抗病毒效果明显优于临床常用抗病毒药物病毒唑，因此双黄连片是一种较好的高效低毒的抗病毒药物，我们的研究为其临床应用和进一步研究提供了一定的实验依据。

由病毒或细菌感染所引起的呼吸道疾病，从临床表现及三大常规检查，有时很难区分；而病原学诊断又受到诸多因素的限制，所以在临床治疗中，滥用抗生素的现象较为普遍，并由此产生了菌群失调、耐药性和抗生素的毒性反应等严重的不良反应和副作用。综合实验结果表明，双黄连具有明显的抗流感病毒和腺病毒作用，确如有些文献指出：它能很好的弥补抗生素和抗病毒药物的不足[8．10]，将会广泛用于病毒感染引起的呼吸系统疾病的预防和治疗。

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