HPLC法测定蒸法和常规炮制方法对白芍中芍药苷含量的影响

[摘要] 目的 比较蒸法和常规炮制方法对白芍中芍药苷含量的影响。 方法 采用RP-HPLC法测定两种方法制得的白芍中芍药苷的含量。色谱柱为waters symmetry C18（150×3.9 mm，5 μm）；以乙腈-0.1%磷酸水溶液（14∶86）为流动相；检测波长为230 nm；流速为1 mL/min。 结果 通过HPLC法测定蒸法和常规炮制法制得的三批芍药苷的含量分别为5.3%、5.7%、5.5%和3.9%、3.5%、3.4%。该方法的平均加样回收率为100.54%，其RSD为1.09%。并且精密度良好。 结论 白芍中芍药苷以蒸法提取较好，含量较高，方法简便快速。

[关键词] 白芍；芍药苷；炮制；蒸法；HPLC

[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）04（a）-0078-02

The effect of HPLC determination of steaming method and conventional processing methods for the content of paeoniflorin in peony

LIN Bingguo

The Chinese Medicine Hospital of Foshan City in Guangdong Province, Foshan 528000, China

[Abstract] Objective To compare the effect of HPLC determination of steaming method and conventional processing methods for the content of paeoniflorin in peony. Methods RP-HPLC method for the determination of the content of paeoniflorin in peony was taken. The column was the waters symmetry C18 (150×3.9 mm, 5 μm). Acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution (14∶86) was taken as mobile phase. The wavelength was 230 nm by detection. The flow rate was 1 mL/min. Results The three batches of paeoniflorin by HPLC determination of evaporation and conventional processing system were 5.3%, 5.7%, 5.5% and 3.9%, 3.5%, 3.4%. The average recovery rate was 100.54%, and the RSD was 1.09%. And the precision was good. Conclusion Paeoniflorin in white peony extract has better evaporation, high content, and is simple and fast.

[Key words] Peony; Paeoniflorin; Concocted; Evaporation; HPLC

白芍在中国药典2010年版一部中收载，是毛茛科植物芍药（Paeunia lactiflora Pall．）的去干燥根[1]。性微寒，味苦、酸，归肝、脾经，具有养血调经、平肝止痛、敛阴止汗等多种活性[2]。芍药苷不仅是主要活性成分，并且也是中药饮片白芍质量标准的标定成分。加工方法不同可使白芍中的芍药苷含量变化显著[3]。本文以购自毫州的白芍中的芍药苷含量为指标，采用蒸法和常规炮制法进行比较，以RP-HPLC法进行测定，现将结果报道如下：

1 仪器与试剂

1.1 仪器

LC-20AD双泵高效液相色谱仪，SPD-M20A紫外检测器，SIL-20AC自动进样器，CTO-20A柱温箱，CBM-20A工作站，岛津AUW120D分析天平，岛津AUY220分析天平，3L机械定时超声波清洗器。

1.2 试剂

芍药苷对照品（批号：110736-200424，购自中国药品生物制品鉴定所），白芍（购自亳州产白芍），乙腈（色谱纯，Merck公司生产），水为双重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 蒸法供试品制备

选择适量的原药材，剔除杂质，置于适宜容器内以蒸汽熏蒸30 min至软为宜，切片，干燥，粉碎，精密称量细粉0.1 g，置50 mL容量瓶中，加入稀乙醇35 mL，超声30 min，摇匀，放冷后，以0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。同法制备3批样品。

2.2 常规炮制法供试品的制备

选择适量的原药材，剔除杂质，大小分档，分别于水中浸泡2～4 h，捞入筐中，盖湿布，润透后切片，干燥，粉碎，后续操作同上。

2.3 色谱条件

色谱柱：waters symmetry C18（150×3.9 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷而酸水溶液（14∶86）；检测波长：230 nm；流速：1 mL/min。柱温：25℃。进样量：10 μL。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。

2.4 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品适量，精密称定，用甲醇溶解定容，制成每1毫升含60 μg的溶液，即得。

2.5 定量限和检测限

配制一定浓度的芍药苷对照品溶液，逐步稀释得系列浓度溶液，照上述方法试验，信噪比约为10∶1时，即为该物质的定量限（0.1 μg/mL），信噪比约为3∶1时，即为该物质的检测限（0.03 μg/mL）。

2.6 线性关系考察

精密称取芍药苷适量，加甲醇溶解并稀释制成含芍药苷约1 mg/mL的溶液，并用甲醇稀释成系列浓度的线性溶液；按上述色谱条件，取上述线性溶液分别进样，记录色谱图，考察线性关系。以芍药苷含量为横坐标，以芍药苷峰面积为纵坐标，得线性方程：A = 1.516×106-2.794×104，r = 0.999 7，结果表明，芍药苷在0.2～0.7 μg/mL的线性范围内线性关系良好。

2.7 中间精密度试验

取样品（按重复性方法配制）由不同试验员在不同时间、用不同仪器平行测定，分别进样5次。统计测定结果的相对偏差以表示中间精密度。测定的芍药苷含量的RSD为0.86%。

2.8 加样回收率试验

取已知含量的样品3份，分别添加芍药苷对照品0.1 mg的80%、100%、120%，按含量测定项下的方法依法测定，外标法计算芍药苷的回收率均在98%~102%；其中平均回收率RSD为1.09％，提示以芍药苷加入量计，本方法的加样回收率符合要求。

2.9 样品测定

依据上述仪器、色谱条件，分别精密量取供试品溶液、对照溶液各10 μL进行分析，试验结果见表1。

由表1可见，蒸法和常规炮制法测得的3批样品的含量均在3.0%以上，蒸法所得的芍药苷含量高于常规炮制法，两者差异有统计学意义（P < 0.05）。

3 讨论

白芍是《中国药典》收载的药物品种，有平肝止痛、敛阴止汗、养血调经的作用[4]。临床治疗头痛眩晕，腹痛，四肢挛痛，月经不调，盗汗等症。白芍成分主要是单萜及其苷：芍药苷，同时含有苯甲酰芍药苷及OH-芍药苷等。芍药苷药理作用包括：抗感染，解痉，扩张冠状动脉血管，抗应激性溃疡，改善急性心肌缺血，抑制血小板聚集等。且其不良反应小，临床已开始用于冠心病治疗[5]。

白芍常规炮制法缺陷明显，炮制耗时一般在12 h左右，费时费力；水泡浸润，易导致芍药苷的损失；尤其在夏季，饮片污染严重。文献报道[6-8]，蒸法加工耗时短，有效成分损失小，所制备的饮片中芍药苷水平高于传统制备法1.5%以上。同时，在熏蒸过程中，药材中携带的致病菌及有害微生物被大量杀灭，饮片卫生安全性提高。本组研究中，以芍药苷为指标，通过HPLC法分析了白芍常规制备方法与蒸法所得样品的不同含量，发现蒸法和常规炮制法样品量均在3.0%以上，蒸法所得的芍药苷含量为5.5%，显著高于常规炮制法的3.6%。提示改用蒸法白芍炮制，能够显著提高有效成分含量，减少芍药苷损失，对于提高白芍饮片质量具有重要意义。此法简便易行，适合大、中、小不同类型的中药饮片厂、药厂及医院。

[参考文献]

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[6] 王晓玉，魏伟，唐丽琴，等. 芍药苷对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及其产生细胞因子的影响[J]. 安徽医科大学学报，2007，42（2）：189-191.

[7] 郭淑敏，张思波，徐红. HPLC法考察蒸法和常规炮制法对白芍中芍药苷含量的影响[J]. 中国药师，2004，7（2）：12.

[8] 时维静，储明明，谭志静. 不同炮制方法对白芍中芍药苷含量的影响[J].中国中医药信息杂志，2008，15（12）：23.

（收稿日期：2012-02-10）