尖锐湿疣组织中MMP-9的表达及意义

[摘要] 目的:研究尖锐湿疣组织中MMP-9的表达及与CD105标染的疣体内微血管密度(MVD)和瘤体生物学行为的相关性。方法:运用免疫组化SP法检测MMP-9在35例尖锐湿疣组织、15例正常包皮组织中的表达及CD105标染的新生血管的密度,分析MMP-9在尖锐湿疣组织中的表达情况,进一步分析其表达与MVD值、临床病理特征及复发的关系。结果:MMP-9在尖锐湿疣组的表达水平明显高于正常包皮组(P

[关键词] 尖锐湿疣;MMP-9;CD105;微血管密度;免疫组织化学

[中图分类号] R752.5+3[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2009)07(a)-019-02

Expression and significance of MMP-9 in condyloma acuminatum tissues

XIE Jing, XU Qiaolian, ZHAO Meifang, LIU Xiaolan

(Fuyong Family Planning Service Center of Bao'an District, Shenzhen City, Shenzhen 518103, China)

[Abstract] Objective: To study the expression of MMP-9 in condyloma acuminatum (CA) tissues and detect the correlation between CD105 stained MVD and the biological behaviors of the disease. Methods: The expression of CD105 and MMP-9 in 35 cases of CA and 15 cases of prepuces was studied by SP immunohistochemical method. The correlation between their expression levels and clinical pathological features was also analyzed. Results: The expression of MMP-9 in CA tissues was higher compared with normal prepuces (P

[Key words] Condyloma acuminatum; MMP-9; CD105; MVD; Immunohistochemistry

基质金属蛋白酶类(matrix metalloproteinases,MMPs)是一种明胶酶,通过降解细胞外基质,促进恶性肿瘤的浸润和转移。基质金属蛋白酶在许多常见肿瘤中的表达多呈异常上调。近年研究表明,MMPs还可调节肿瘤血管生成,其中MMP-9被视为重要的血管生成因子[1-3]。CD105是近年来受人瞩目的新生血管标志物,它参与血管生成,在增殖内皮细胞上高表达。已有文献报道CD105抗体标记的微血管密度(micro vessel density,MVD)与多种肿瘤预后的相关性[4-7]。尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)临床上具有生长快、易复发的特点,少数可在短期内因疣体过度增生而形成巨大型CA,甚至恶变,这可能与MMP-9等的异常表达有关。本研究通过免疫组化SP法检测尖锐湿疣组织中MMP-9的表达情况和CD105标记的MVD,探讨MMP-9表达情况及其与疣体临床病理特征、血管生成的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

35例CA患者皮损典型,病理确诊,其中,男23例,女12例;年龄21～45岁,平均29.6岁;病程15 d～4个月,平均55.2 d。取材前未接受系统治疗,排除其他系统性疾病。15例包皮组织取自进行包皮环切手术的正常成年男性作为对照。

1.2 方法

标本均经10%中性甲醛溶液固定,石蜡包埋,4 μm连续切片,分别行常规HE染色和CD105、MMP-9免疫组化SP法染色。鼠抗人CD105(105C02)、MMP-9(GE-213)单克隆抗体为美国Lab Vision公司产品,即用型SP检测试剂盒、DAB酶底物显色剂等均购自福州迈新生物技术公司。CD105工作浓度为1∶20,MMP-9工作浓度为1∶40,免疫组化染色步骤按说明书进行。以PBS代替一抗作为阴性对照,以已知阳性的大肠癌组织切片作为阳性对照。

1.3 结果判断

MMP-9阳性表达定位于胞质内,参照文献[8],结合阳性肿瘤细胞数和染色强度进行染色结果评分,两者相乘为最后得分:0～1分为(-),2～3分为(+),4～5分为(++),≥6分为(+++)。采用抗CD105单抗标记新生血管内皮,MVD计数方法按Weidner方法进行[9],先在低倍镜(×40)下找到血管密度最高区域,随后在高倍镜(×400)下选择5个视野进行微血管计数,取平均值为MVD。

1.4 统计学分析

数据以均数±标准差(x±s)表示,计量资料采用单因素方差分析,组间均数的两两比较用LSD法;计数资料采用χ2检验;MMP-9、MVD与临床病理参数间的关系用Spearman相关分析;所有统计均在SPSS 10.0统计软件中进行,P

2 结果

2.1 MMP-9在尖锐湿疣和正常包皮组织中的表达

35例CA组均表达MMP-9,阳性率为100%,阳性细胞遍布表皮全层,以基底层、棘层表达最为显著;表达强度多在(++)～(+++),MMP-9阳性物质定位于胞质,呈棕黄色、棕褐色颗粒。正常人组织中的阳性率为80%(12/15),表达强度多在(+)～(++)。两组阳性率表达强度比较,差异有统计学意义(?字2=22.31,P

表1 MMP-9在尖锐湿疣和正常包皮组织中的表达(例)

2.2 CD105在尖锐湿疣和正常包皮组织中的表达

CD105阳性物质定位于胞质,呈棕褐色。CD105标染的微血管显色于尖锐湿疣疣体间质细胞间,定位于新生血管内皮细胞上,正常包皮组织的血管内皮细胞包括较大血管基本无表达。

2.3 MVD与MMP-9表达的相关性

CD105标染的MVD值与MMP-9表达的相关性见表2。尖锐湿疣组的MVD值显著高于正常包皮组,差异有显著性(P

表2MMP-9蛋白表达与CD105标染的MVD值的关系(x±s)

3 讨论

尖锐湿疣是HPV感染引起生殖器及附近皮肤黏膜产生的一种良性肿瘤,临床上具有易复发、难治疗的特性,巨大尖锐湿疣及尖锐湿疣恶变也时有报道,病理显示尖锐湿疣组织中MVD明显增加,认为与尖锐湿疣疣体形成及复发关系密切。

血管生成是CA生长和复发的基础,丰富的血管为疣体的生长提供足够的营养物质。CD105是近年发现的新生血管标志物,它仅在处于增殖状态的血管内皮细胞上强表达,而在正常组织血管内皮细胞上无表达[4]。MMPs是一种明胶酶,能够降解细胞外基质,在许多常见肿瘤中的表达多呈异常上调,认为其与恶性肿瘤的浸润和转移有关。而近年研究表明,MMPs还可调节肿瘤血管生成,其中MMP-9被视为重要的血管生成因子,有研究表明,肿瘤组织中MMP-9含量增加,新生血管也相应地增加[10-12]。MMPs促进肿瘤血管生成的作用可能是通过降解血管外的基底膜和细胞外基质而实现的,MMP-9是MMPs酶系家族中降解细胞外基质的主要蛋白溶解酶[5]。本研究结果显示,CD105在CA组织中表达于新生血管内皮细胞,几乎不表达于正常组织。CA组织中存在MMP-9的表达上调,且MMP-9的表达与MVD呈正相关(r=0.549,P

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(收稿日期:2009-03-18)