益骨口服液对去势大鼠血清激素及成骨细胞增殖的影响

摘要　目的：观察益骨口服液对去势大鼠骨钙素(BGP)、降钙素(CT)及成骨细胞增殖影响，以探讨其防治骨质疏松的疗效机制。方法：取12周龄的雌性wistar大鼠50只，体重约200g。将大鼠随机分为A、B、C、D、E五组各10只，A组为正常对照组(假手术)；B组为模型组(造模后给予蒸馏水亦即空白组)；C组为阳性对照组(切除双侧卵巢并予以西药倍美力治疗)；D组为高浓度组(造模后给予含生药1.5g／ml益骨口服液治疗)；E组为低浓度组(造模后给予含生药0.5g／ml益骨口服液治疗)。灌胃12周后，活杀各组动物，取血清用放免法测定血清中BGP、CT水平。结果：D组、E组血清BGP、血清Ca含量及成骨细胞数量均明显提高，与B组比较有显著性差异，P>0.05，与C组无显著性差异，P

关键词 去势大鼠 血清激素 成骨细胞 益骨口服液

骨质疏松症(osteoporosis，OP)是以单位体积内骨量绝对减少，骨组织的显微结构退化为特征，以致骨的脆性增高及骨折危险性增加的一种全身骨病。成骨细胞是骨质形成的物质基础，只有其不断的分裂增殖才可以产生丰富的胶原基质，并通过矿化作用形成更多骨质。通过刺激成骨细胞增殖促进骨组织形成是治疗骨质疏松症的主要方法之一。目前认为氟化物是作用于成骨细胞达到治疗骨质疏松的最主要药物，多年的临床应用取得了较好的结果。近年来的一些研究也表明一些中药也具有刺激成骨细胞的作用。前期实验中我们采用中药复方益骨汤中补骨脂、骨碎补、仙灵脾、生地等配成的混悬液给大鼠灌胃，观察其对去势大鼠骨质疏松模型的影响，本实验采用益骨口服液对去势大鼠血清激素及成骨细胞增殖的影响，按照益骨口服液的提取与成型工艺，进行实验研究进一步探讨其作用机理。

1　材料与方法

1.1　实验药物：益骨口服液水提液：①按照益骨口服液的提取与成型丁艺，由浙江中医药大学实验制剂中心加工。②倍美力水溶液：美国惠氏艾尔斯特制药公司制造，生产批号0502090，国药准字(2001)J-51(2)号。水溶液浓度为9.4ug／ml。③氯氨酮：上海第一生化药业有限公司生产，批号沪卫药准字(1995)第001064号。

1.2　实验动物：取12周龄的雌性wistar大鼠50只，体重约200g左右(由浙江中医药大学实验动物中心提供)，饲养室保持良好通风，室温控制在21±1℃，湿度63％，噪音

1.3　造模方法：腹腔注射氯氨酮(5ug／100g)麻醉条件下，打开B、C、D、E组大鼠腹腔去除双侧卵巢，逐层缝合；A组大鼠仅予以单纯剖腹后立即关闭。造模期间的首3天，肌注青霉素4万u／只，预防感染。

1.4　饲养与给药：造模后大鼠分笼予以常规饲料喂养，第4天起开始给药。A组、B组每天以蒸馏水10ml／kg灌胃；C组每天用浓度为9.4／ug／ml的倍美力水溶液以10ml／kg灌胃；D组、E组每天分别用1.5g／ml、0.5g／ml的中药煎剂以10ml／kg灌胃。整个灌胃过程持续12周。

1.5　观察指标：采用放射免疫分析法，测定骨钙素(BGP)、降钙素(CT)水平。用电极法，测定各组大鼠血清中Ca、P含量的变化；取右胫骨上端做病理切片，通过HE染色对成骨细胞进行观察比较。

1.6　数据处理：采用SPSS12.0统计软件包进行统计。各组数据采用x±s表示，各组数据间比较用t检验，计数资料采用Y2检验。

2　结果

2.1　各组血清BGP、CT水平变化比较：见表1。表1表明A组、D组、E组、C组BGP的含量均明显高于模型组，有统计学意义(P

2.2　各组血清ca、P含量变化比较：见表2。表2表明A组、D组、E组、C组Ca的含量明显高于B组，差异有统计学意义(PO．05)。A组与B组有显著性差异(P

2.3　各组成骨细胞数量变化比较：见表3。表3表明，HE染色见A组、D组、E组、C组的成骨细胞数量均多于模型组(P

3　讨论

在祖国医学中并无“骨质疏松症”的病名，然根据其临床症状及体征，却与“痛”、“痹证”相似，从病因病机上看本病又属于“骨痿”、“骨枯”、“骨极”、“骨痹”范畴。益骨口服液(主要成分：山药、枸杞、续断、骨碎补、补骨脂、仙灵脾等)根据“肾主骨生髓”的理论和老年病“多虚多瘀”的病理生理特点配伍而成，具有补肾填精、活血通络的功效。

BGP和CT是调节体内钙代谢的主要钙激素，血Ca、血P是骨代谢在体液内的反应。在骨代谢过程中，BGP通常又称骨y-羧基谷氨酸蛋白，是成骨细胞分泌的一种肽类物质，可促进骨沉积，增加骨细胞的矿化速度，研究认为BGP基因是成骨细胞分化的标志基因，其含量变化直接反映成骨细胞的活性，也直接反映骨形成率或骨转换率。BGP能特异地与骨的羟基磷灰石结晶结合，因而促进了硬骨组织矿物’质沉积的正常钙化过程。BGP可能与钙的体内平衡有关，包括Ca2+ 的代谢转运、沉积和排泄等。它能控制骨组织Ca2+的进出，影响肾小管对Ca2+的重吸收，故可视为调节钙的“缓冲池”。血Ca、血P是骨代谢在体液内的反应。CT是由32个氨基酸构成的多肽，是甲状腺C细胞合成和分泌的一种激素，主要是通过抑制破骨细胞的骨吸引而产生治疗作用，本项研究表明，高浓度组、低浓度组大鼠血清BGP含量及Ca明显高于模型组(P

成骨细胞起源于多能的骨髓基质的间质细胞，在骨重建过程中发挥重要作用，不仅参与骨形成，而且能分泌多种细胞因子，在骨吸收中也起关键性作用。成骨细胞功能减退导致新骨形成量减少，对骨吸收陷窝的修补能力减弱，造成骨小梁变细、薄弱、穿孔，皮质骨出现多孔性改变，从而引起骨质疏松症的发生。本研究发现，经过12周的灌胃治疗，HE染色可见高浓度组、低浓度组、阳性对照组的成骨细胞数量均明显增加，明显高于模型组。高浓度组、阳性对照组之间无明显差异。说明益骨口服液能够促进成骨细胞的分化、增殖，从而达到预防、治疗骨质疏松的作用。