反相高效液相色谱法测定盐酸吗啉胍片的含量

【前言】反相高效液相色谱法测定盐酸吗啉胍片的含量由文秘帮小编整理而成，但愿对你的学习工作带来帮助。1.2 色谱柱：安捷伦 C18色谱柱（218mm×4.6mm，5μm）。 1.3 对照品：盐酸吗啉胍 购自中国药品生物制品检定所。 1.4 试剂：甲醇（济南鑫博化工有限公司）、乙腈（广东东太化工有限公司）、冰醋酸（深圳华祥化工有限公司）、磷酸二氢钠（深圳鑫汇化工有限公司）、溴化四...

摘 要：建立反相高效液相色谱法测定盐酸吗啉胍片中盐酸吗啉胍的含量。方法：采用安捷伦 C18色谱柱（218mm×4.6mm，5μm），2%庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈-三乙胺（25：30：18：0.1），检测波长为237nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。盐酸吗啉胍在18～60？滋g・mL-1范围内呈良好的线性关系（r=0.99995）。盐酸吗啉胍平均回收率分别为99.3%。结论：本法简便、准确，可用于盐酸吗啉胍片中盐酸吗啉胍的含量测定。

关键词：盐酸吗啉胍片；含量；测定

盐酸吗啉胍化学名为N-N-（2-胍基-乙亚氨基）-吗啉盐酸盐。盐酸吗啉胍片能抑制病毒的DNA和RNA聚合酶，从而抑制病毒繁殖。盐酸吗啉胍片对甲型H1N1流感、流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、冠状病毒、腺病毒等有抑制作用。盐酸吗啉胍片用于流感、流行性腮腺炎、水痘、疱疹、滤泡性结膜炎等的防治。本实验采用高效液相色谱法对盐酸吗啉胍片中的盐酸吗啉胍的进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器：FL2200-2高效液相色谱仪（上海仪先仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（上海子期实验设备有限公司）；320 XT 电子分析天平（上海精科天美贸易有限公司）；SCQ-K001空气超声波清洗器（上海声彦超声仪器有限公司）；FA1204B电子分析天平（上海精科天美贸易有限公司）；Chemvak无油真空泵（北京桑翌实验仪器研究所）；TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

1.2 色谱柱：安捷伦 C18色谱柱（218mm×4.6mm，5μm）。

1.3 对照品：盐酸吗啉胍 购自中国药品生物制品检定所。

1.4 试剂：甲醇（济南鑫博化工有限公司）、乙腈（广东东太化工有限公司）、冰醋酸（深圳华祥化工有限公司）、磷酸二氢钠（深圳鑫汇化工有限公司）、溴化四丁基铵（北京迈瑞达科技有限公司）、三乙胺（北京格林凯默科技有限公司）、庚烷磺酸钠（南京都莱生物技术有限公司）、四氢呋喃（深圳鑫汇化工有限公司）。

1.5 试药：盐酸吗啉胍片。

2 测定方法确定

2.1 色谱条件

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-12]。流动相：2%庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈-三乙胺（25：30：18：0.1），检测波长：237nm，流速：1.0m・min-1。柱温：30℃。理论板数按盐酸吗啉胍峰计算应不得低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取盐酸吗啉胍对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含20？滋g的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取盐酸吗啉胍片适量，研细，精密称取，置50mL量瓶中，加流动相适量，超声处理十分钟使溶解，放置至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.4 专属性试验

在处方中去盐酸吗啉胍，按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂。照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在盐酸吗啉胍出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.5 精密度试验

精密称取盐酸吗啉胍对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为20μg・mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.76%，表明本方法精密度良好。

2.6 对照品的线性考察

精密称取盐酸吗啉胍对照品15mg，置250ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1.5、2.5、3.0、3.5、4.5mL，置于5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，盐酸吗啉胍在18～60μg・mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.7 重现性试验

称取同一批的盐酸吗啉胍片样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.61%，结果表明此方法的重现性良好。

2.8 准确度试验

精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的盐酸吗啉胍对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.3%，RSD=0.66%。结果表明此方法的回收率良好。

2.9 样品稳定性试验

取同一批盐酸吗啉胍片样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、2、4、6、8、10、12小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定盐酸吗啉胍片中盐酸吗啉胍的RSD=0.92%。结果表明供试品12小时内稳定。

3 结论

分别考察甲醇-缓冲液（磷酸二氢钠6.0g，加水溶解并稀释至1000ml， 加三乙胺1ml， 用浓氢氧化钠溶液调节pH 值至7. 0）（30∶70），2%庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈-三乙胺（25：30：30：0.1），乙腈-四氢呋喃-三乙胺磷酸缓冲液（25：15：60），2%庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈-三乙胺（25：30：18：0.1），甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钠缓冲液（每1000mL的缓冲液含0.5mol/L溴化四丁基铵45mL，用磷酸调节pH至3.5）（体积比40∶60）不同比例的流动相，结果以2%庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈-三乙胺（25：30：18：0.1）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用2%庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈-三乙胺（25：30：18：0.1）为流动相。本实验表明此方法可用于盐酸吗啉胍片中盐酸吗啉胍的含量测定。盐酸吗啉胍片中盐酸吗啉胍的含量为标示量的95-105%。

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