心衰1号方、心衰2号方对慢性心衰模型大鼠的干预作用

作者：周文斌，王大伟，陈力，尹克春，严夏

【摘要】 【目的】观察心衰1号方、心衰2号方对慢性充血性心力衰竭(chf)模型大鼠的影响。【方法】选用sd大鼠，随机分为假手术组、模型组、心衰1号方组、心衰2号方组，后3组大鼠采用腹主动脉缩窄及冰柜冷冻法复制阳虚心衰复合模型。造模成功后，后2组大鼠按3?24g·kg-1·d-1剂量灌胃给药，连续4周。采用酶联免疫吸附法检测血清脑钠肽(bnp)、血管紧张素ⅱ(angⅱ)、白介素6(il?6)含量，并行心肌组织病理学检查。【结果】模型组大鼠血清bnp、angⅱ、il?6含量均显著升高(p<0?05或p<0?01)，心肌组织出现明显的病理改变;心衰1号方组、心衰2号方组血清bnp、angⅱ、il?6含量均显著降低，与模型组比较差异有显著性意义(p<0?05或p<0?01)，心肌细胞断裂、变性明显改善，炎症细胞浸润减少，间质出血明显减少，心肌细胞呈修复性改变，且心衰1号方组作用优于心衰2号方组。【结论】心衰1号方、心衰2号方治疗chf的作用与其能调控模型大鼠的神经内分泌和炎症因子水平及改善心肌结构有关，且治疗阳虚型chf温阳活血法作用优于行气活血法。

【关键词】 充血性心力衰竭，慢性/中药疗法;心衰1号方/药理学;心衰2号方/药理学;心肌/病理学;　疾病模型，动物;大鼠

慢性充血性心力衰竭(congestive heart failure， chf)是临床上常见的危重病症，以神经内分泌激活和外周血流分布异常为特征，是心脏疾患的最终结局及主要死因。全国名老中医颜德馨教授在临床上运用自拟心衰1号方[1]、心衰2号方[2]治疗心衰，临床效果满意，本实验通过复制慢性心衰大鼠模型，观察心衰1号方、心衰2号方对大鼠死亡率、血清脑钠肽(brain natriureticpeptide，bnp)、血管紧张素ⅱ(angⅱ)、白介素6(il?6)及心肌病理形态学的影响，比较温阳活血法与行气活血法治疗chf的差异，并探讨其作用机制。现将结果报道如下。

1材料与方法

1?1动物sprague?dawley(sd)大鼠，spf级，体质量200～250g，雌雄各半，3～4周龄，共36只，购于广州中医药大学实验动物中心，合格证号：0019429。

1?2主要试剂与与仪器bnp、angⅱ、il?6酶联免疫试剂盒均由uscn life science & technology公司提供。advia centaur 全自动化学发光免疫分析仪(bayer公司)，vectorx?5多功能免疫分析仪(pe公司)，e600生物显微镜(日本nikon公司)。

1?3药物心衰1号方组成：炙麻黄16%，熟附子16%，细辛10%，蒲黄16%，丹参26%，葛根16%;心衰2号方组成：桃仁7%，红花7%，当归7%，生地黄10%，川芎7%，赤芍7%，牛膝7%，桔梗5%，柴胡5%，枳壳7%，黄芪25%，降香4%，甘草2%。以上为100g药中所含的质量比例，采用中药免煎颗粒配制，药物由江阴天江药业有限公司提供，生产批号：0611132。按处方比例称取纯药后，加入蒸馏水，配成浓度为1g/ml的药液。

1?4模型复制随机取26只sd大鼠，雌雄各半，参考文献[3-4]造模方法改良，首先采用腹主动脉缩窄法复制chf模型：100mg/l水合氯醛按3?5ml/kg腹腔注射麻醉，于剑突下腹正中切口，分层打开腹腔，在肾动脉分支以上钝性游离腹主动脉，将8号注射器针头平行置于腹主动脉上，用4号手术丝线将腹主动脉和注射器一同结扎，使大鼠腹主动脉直径缩窄为0?8mm，然后缓慢将注射器撤出，关腹，分层缝合。术后给予青霉素4×105u/只腹腔注射3d，预防感染。正常喂养1周后进行阳虚造模，将大鼠每天置于-2℃～-4℃冰柜中2h，持续4周，即可完成阳虚心衰的模型复制。其中有2只大鼠造模失败。另设假手术组10只，100mg/l水合氯醛按3?5ml/kg腹腔注射麻醉，于剑突下腹正中切口，分层打开腹腔，再分层缝合。

1?5分组及给药将造模成功的34只大鼠分为4组：假手术组(10只)、模型组(8只)、心衰1号方组(8只)、心衰2号方组(8只)，后2组大鼠于成功完成动物模型复制后，分别给予心衰1号方、心衰2号方灌胃治疗，共4周。具体给药剂量根据“人和动物体表面积折算的等效剂量比率表”[5]计算，确定为3?24g·kg-1·d-1。

1?6标本采集与检测于各组大鼠心脏穿刺抽血约5ml，用高速离心机离心，取血清约1～2ml，-20℃保存，采用酶联免疫吸附(elisa)法测定血清bnp、angⅱ、il?6含量。将各组大鼠处死后，立即在左室冠状面中部切取环状心肌组织块，用40g/l多聚甲醛固定，常规石蜡包埋切片，苏木素—伊红(he)染色，进行病理学观察。

1?7统计学方法实验数据运用spss17?0版软件分析，采用组间对照，两均数差别的显著性检验用t检验，组间样本均数用one way?anova分析后采用秩和检验，计数资料采用χ2检验，检验水平α=0?05。

2结果

2?1各组大鼠存活率比较表1结果显示：心衰1号方组、心衰2号方组大鼠死亡率较模型组均有下降，但差异无显著性意义(p>0?05)。表1各组大鼠存活率比较

2?2各组大鼠血清angⅱ、il?6、bnp含量比较表2结果显示：心衰1号方组、心衰2号方组与模型组比较，angⅱ、il?6含量均显著下降(p<0?05或p<0?01)，但心衰1号方组与心衰2号方组比较差异无显著性意义(p>0?05);心衰1号方组、心衰2号方组与模型组比较，bnp含量均显著下降(p<0?05或p<0?01)，与心衰2号方组比较，心衰1号方组的bnp水平下降更显著(p<0?05)。表2各组大鼠血清angⅱ、il?6、bnp含量比较

2?3各组心肌组织病理形态观察结果图1(彩图见第440页)结果显示：假手术组心肌细胞组织结构正常，未见明显病理改变。模型组心肌细胞大片坏死，核固缩，细胞核溶解，可见心肌脂肪浸润，心肌纤维浊肿、颗粒变性、断裂;间质不同程度出血，可见炎细胞浸润，以t 淋巴细胞为主。心衰1号方组心肌细胞排列相对均匀，可见完整的心肌细胞核及横纹，并可见心肌瘢痕组织形成，心肌细胞呈修复性;心肌纤维断裂处有少量炎细胞，心肌纤维浊肿消失，间质出血明显减少。心衰2号方组心肌细胞仍有轻度坏死，心肌间质有炎性细胞浸润，心肌纤维断裂处有少量炎细胞，断裂、变性现象减轻，间质出血减少，心肌纤维浊肿有改善，出现间质纤维化倾向。

3讨论

近年来研究表明，多种细胞因子与心力衰竭有关，它们通过免疫、炎性反应参与心力衰竭的病理及病理生理过程。其中肾素—血管紧张素系统(renin angiotensin system，ras)过度激活和炎症细胞因子的分泌增加是chf病理生理过程发生发展的两大因素[6]，而ras激活是造成心力衰竭恶性循环的重要原因之一[7]。angⅱ是ras的主要活性物质，能直接刺激血管平滑肌收缩，促进肾小管对钠的重吸收，刺激肾上腺皮质释放醛固酮，并且促进心肌肥厚和纤维化[8]。心力衰竭时ras激活，循环中angⅱ水平升高，不仅通过本身的血管收缩作用、致心室重塑作用等影响chf的进程，而且angⅱ还能够激活巨噬细胞，使血清中肿瘤坏死因子α(tnf?α)、白细胞介素?1β(il?1β)、il?6表达上调，导致心肌炎症反应，使chf进一步加重。il?6是参与心功能异常调节的细胞因子，对心肌细胞产生细胞毒性作用，直接损伤心肌细胞，促进心肌细胞肥大和加重心肌重构，抑制心肌细胞的兴奋收缩耦联。

血浆bnp是肾素—血管紧张素—醛固酮系统的天然拮抗剂，可抵制垂体后叶素及交感神经的保钠、保水、维持血压的作用，参与血压、血容量以及水盐平衡的调节，提高肾小球滤过率，利钠、利尿、扩张血管、降低体循环血管阻力及血浆容量，从而起到维持心功能的作用[9]。bnp主要来源于心室，当心室肥大或出现chf时，bnp浓度升高[10]。当心室由于血容量扩充或压力过高致使心室容积增加和心脏前后负荷压力增加引起扩张时，bnp大量释放到外周血液，当心功能改善后bnp释放明显减少。因此，血浆bnp水平已成为国际公认慢性心功能不全诊断及疗效评价的敏感指标[11-12]。

全国名老中医颜德馨教授从医多年，根据人体特点，提出了“气为百病之长，血为百病之胎” 、“有一分阳气，便有一分生机”、“瘀血乃一身之大敌”的理论[13]，认为心衰是本虚标实之证，与气血失常关系密切，病机关键点为心气阳虚、心血瘀阻。据此制定具有温阳活血功效的心衰1号方、行气活血功效的心衰2号方。本实验研究结果表明：大鼠心衰时血清bnp、angⅱ、il?6含量均明显升高，心衰1号方组、心衰2号方组与模型组比较，bnp、angⅱ、il?6含量均显著降低(p<0?05或p<0?01)，并可见心肌纤维断裂、变性现象明显改善，炎症细胞浸润减少，抑制了间质出血，心肌细胞呈修复性改变，改善了心肌结构;而心衰1号方组对bnp降低、心肌结构的改善作用较心衰2号方组更好。

心衰1号方是由麻黄附子细辛汤加丹参、蒲黄、葛根组成。方中附子大辛大热，走而不守，助阳补火，散寒解凝，有退阴回阳、起死回生之功。配伍辛温发散之麻黄，温经散寒之细辛，升阳散邪之葛根，使心阳得宣，寒凝得解，为治本之药。丹参、蒲黄同入少阴，可活血化瘀，通络止痛，以解心经瘀血，为治标之药。故此方标本兼治，可收温运阳气，活血化瘀之功。心衰2号方是在血府逐瘀汤基础上加黄芪、降香而成。方中以桃仁、红花、赤芍、川芎为君，可活血化瘀，畅通血脉;臣以桔梗、柴胡、枳壳、牛膝、降香、黄芪以补气理气行滞;佐以生地、当归、甘草，养血和血。诸药相配，活血兼以养血，理气兼以补气，攻补兼施，共奏调畅气血之功，但温阳力不足，偏于祛邪为主。

心体阴而用阳，心阳虚衰，则心的正常功能衰退，往往出现虚寒证候。心主血脉，心气阳不足，推动乏力，必然合并瘀血证候，但其中以心阳亏虚为主，故温运阳气是要法。阳气生，则可助气化，气化调达，则瘀血自除。因此，阳虚型心衰必当首选温阳活血法。

本实验研究提示：(1)心衰1号方、心衰2号方均可有效降低慢性心衰大鼠的bnp、angⅱ、il?6水平，并改善心肌结构，从而改善心功能，其可能机制是心衰1号方、心衰2号方抑制了心衰时神经内分泌的过度激活及炎症因子的释放，改善心肌结构，逆转心室重塑，从而改善心力衰竭。(2)与心衰2号方比较，心衰1号方疗效更优，表明对于阳虚型心衰温阳活血法较行气活血法效果更好。

【参考文献】

[1]刘泽银，王大伟，严夏，等.心衰1号方治疗慢性心衰30例临床观察[j]. 山东中医杂志，2007，26(8)：520.

[2]严夏，杨吉，王大伟.心衰2号方对慢性心力衰竭大鼠血清angⅱ及il?6的影响[j].中西医结合心脑血管病杂志，2008，6(11): 1307.

[3]赵英强，孙兰军，徐强，等. 慢性充血性心力衰竭大鼠动物模型制备[j].天津中医药，2004，2(4)：318.

[4]张明雪，曹洪欣. 冠心病心阳虚证动物模型的制作[j].中国中医基础医学杂志，2002，8(4):71.

[5]徐淑云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[m].3版.北京：人民卫生出版社，2002：202.

[6] mydlowska b，salomon p.cytokines and remodeling of the heart in patients with congestive heart failure[j].pol arch med wewn，2003，109(1) ：23.

[7] pfeffer m a，swedberg k，granger c d，et al.effects of candesartan on mortality and morbidity in patients with chronic heart failure：the charm?overall programme[j].lancet，2003，362(9386)：759.

[8]沈武忠，高广道，刘健，等.angⅱ对成年大鼠心肌成纤维细胞分泌et?1、no功能的影响[j].中国病理生理杂志，2002，18(9)：1050.

[9]yoshimura m，yasue h，morita e，et al.hemodynamic，renal and hormonal responses to brain natriuretic peptide infusion in patients with congestive heart failure [j].circulation，1991，64(12):1581.

[10]levin e r，gardener d g，sam son w k.natriuretic peptides[j].n engl j med，1998，339(5):321.

[11] 钟远伦，罗昭琴，任凌.血浆bnp在慢性心功能不全诊断和治疗中的应用[j]. 实用医学杂志，2008，24(3):428.

[12]goto t，takase h，toriyama t，et a1.circulating concentrations of cardiac proteins indicate the severity of congestive heart failure[j].heart，2003，89(11)：1303.

[13]颜德馨.颜德馨临床经验辑要[m].北京：中国医药科技出版社，2000：73.