祛瘀化痰方与补肾化湿方对高脂血症大鼠血管细胞粘附因子-1表达影响的研究

摘要 目的:通过对比观察祛瘀化痰方与补肾化湿方分别对高脂血症大鼠血管细胞粘附因子-1(sVCAM-1)表达的影响,从药物反证的角度探讨两方对高脂血症大鼠血脂及症状的改善作用。方法:将大鼠随机分为4组。造模成功后分别用祛瘀化痰方和补肾化湿方灌服高脂血症模型大鼠,给药30天后腹腔静脉取血,最终检测各项指标进行系统评价。结果:祛瘀化痰方与补肾化湿方和模型组相比sVCAM-1均显著降低(P

关键词 祛瘀化痰方 补肾化湿方 高脂血症 血管细胞粘附因子-1(sVCAM-1) 大鼠

近年来,中医药治疗血脂异常和血管内皮损伤的研究取得了较大的进展,已初步表明中医药可以从多种途径调节脂质代谢,并具有血管内皮保护作用。本实验采用了祛瘀化痰方和补肾化湿方来进行对比分析高脂血症大鼠的各项指标。祛瘀化痰方由泽泻汤加味而成,具有健脾理气、化痰祛瘀的作用。补肾化湿方是由何首乌、枸杞子、桑寄生等补肾药为主的基础上加化湿的泽泻、白术。两方均在中医辨证论治的基础上参考现代医药学研究成果,选用现代药理学验证有降脂作用,又确有临床效果的药物为辅组方,以确立实验有效性的形成。

1 实验材料

1.1 实验动物:7周龄清洁级雄性SD大鼠32只,体重:200±20g,均由浙江中医药大学动物实验中心提供。

1.2 实验试剂及仪器:甘油三酯试剂盒:上海复星长征医学科学有限公司生产,批号:P060311;胆固醇试剂盒:上海复星长征医学科学有限公司生产,批号:P060441;高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒:威特曼生物科技(南京)有限公司生产,批号:06―10;血管内皮细胞粘附因子-1定量酶联检测试剂盒:上海森雄科技实业有限公司生产;血管内皮生长因子定量酶联检测试剂盒:上海森雄科技实业有限公司生产。Vialab SE自动生化分析仪仪器:荷兰威图公司。22PC可见分光光度计:上海分析仪器三厂。TGL68高速台式离心机:上海安宁科学仪器厂;GKC可控硅恒温水浴锅:上海锦屏仪器仪表有限公司。

1.3 中药制剂:祛痰化瘀方由泽泻、白术、绞股蓝、海藻、昆布、丹参、生山楂、姜黄、郁金等组成。补肾化湿方由何首乌、枸杞、桑寄生、泽泻、白术组成。各药物按临床应用比例进行配伍,各方常规水煎取煎液浓缩,分别制成含生药量为相当生药20.8g/kg、5.2g/kg的溶液,4℃冰箱保存备用。

1.4 动物高脂饲料制备:高脂饲料制备方法,选用猪油5%,蛋黄粉10%,胆酸钠0.5%,胆固醇2%,普通饲料82.5%,喂养8周。饲料由浙江省医学科学院饲料中心提供。

2 实验方法

2.1 造模及给药方法:清洁级雄性SD大鼠32只,随机分为空白对照组、模型对照组、祛痰化瘀组、补肾化湿组,除空白对照组一般常规饮食外,其余3组均给予高脂饲料喂养。3周后均眼眶取血检测血脂四项从而确立形成高脂血症模型。然后继续喂养高脂饲料4周,模型组给予蒸馏水,中药治疗组灌服中药,第50天禁食腹腔静脉取血测血管细胞粘附因子-1(sVCAM-1),根据两方结果观测不同证型对高脂血症大鼠血脂及症状的改善作用,从而探讨对高脂血症的调脂机理。

2.2 检测指标:分述如下。

2.2.1 一般状态:每日观察动物外观变化,包括皮毛色泽、粪便、精神状态以及实验前后体重变化等。

2.2.2 实验室检查:测定血脂四项总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以确定动物模型成立。最终测定血管细胞粘附因子-1(sVCAM-1)。

2.3 统计学处理方法:各项指标结果均以均数±标准差(x±s)表示。实验数据用SPPSS11.0软件进行处理,应用方差分析进行统计学分析。

3 结果分析

3.1 一般状态:造模后模型对照组大鼠活动明显减少,形体肥胖、舌质紫暗、皮毛粗糙、粪便油腻。造模前两组中药组与空白对照组相比无显著性差异。造模后,大鼠体重模型对照组与空白对照组比较有极显著意义(P

3.2 对大鼠血脂的影响:造模后,模型对照组与空白对照组比较有显著意义(P

3.3 对大鼠sVCAM-1的影响:防治后,模型对照组与空白对照组比较有极显著意义(P

4 讨论

研究表明,高脂血症诱导内皮表面粘附分子的高度表达是炎症发生的基础,它带来粘附分子及相应配体包括单核细胞和T淋巴细胞在内皮的粘附[1],内皮细胞血管细胞粘附分子-1(sVCAM-1)表达在活化内皮细胞上,释放入血成为相应的可溶性粘附分子,作为内皮细胞活化的标志。魏玉杰等[2]研究提示sVCAM-1是反映血小板和内皮细胞受损和激活状态的良好指标,并能反映冠脉病变程度。所以粘附分子可以促进白细胞与血管内皮的粘附,粘附到血管内皮的白细胞迁至到内皮下又可促进内皮损伤形成恶性循环。故本课题通过两个组方祛瘀化痰方、补肾化湿方进行相互对比,通过研究大鼠sVCAM-1来探讨中医辨证论治对高脂血症治疗效果的差异性。

本实验前四周通过造模并检测血脂四项判断高脂血症大鼠模型成立。最终通过检测sVCAM-1对比系统分析同时对体重数据进行分析,研究表明:祛瘀化痰方、补肾化湿方均对高脂血症大鼠有比较显著的治疗效果,其中祛瘀化痰方的效果明显优于补肾化湿方。因此我们可以推测在相对短的时期内,高脂血症大鼠仍然以祛瘀化痰法为主要治疗方法,但在相对长的时期内祛瘀化痰是否仍然优于补肾化湿法,有待进一步研究。

5 参考文献

[1]CLAPP B R,H INGORAN IA D,KHARBANDA R K,et al.In-flammation-induced endothelial dysfunction involves reduced ni-tric oxide bioavailability and increased oxidant stress[J].Cardio-vasc Res,2004,64(1):172-178.

[2]魏玉杰,刘惠亮,荆丽敏,等.血清sVCAM-1和vW F的水平与冠脉病变程度的相关性[J].心血管康复医学杂志,2006,10(15):452-455.

收稿日期 2009-11-16