芪附汤调节ERK1/2信号通路改善UUO阳虚证模型肾间质纤维化的作用和机制

[摘要] 目的：探讨芪附汤改善阳虚证模型鼠肾间质纤维化（RIF）的作用和机制。方法：将大鼠随机分为假手术组（A组）、模型组（B组）、芪附汤组（C组）、依那普利组（D组）。通过腺嘌呤灌胃联合单侧输尿管接扎术（UUO）的方法而建立RIF模型。造模成功后，C，D组大鼠分别经灌胃给予芪附汤水煎液或依那普利悬浊液；其余2组大鼠经灌胃给予蒸馏水，共干预3周。各在药物和蒸馏水干预前和干预后第1，2，3周末，分别称量大鼠体重，并检测24 h尿蛋白排泄量（Upro）、尿β2-微球蛋白（Uβ2-MG）、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（NAG）酶。药物干预第3周末，处死全部大鼠，抽取血液，摘除左肾，称重，并留取相应标本，观察肾脏外观和肾小管/间质形态；检测血清环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）和尿酸（UA）；检测肾组织中上皮型黏钙蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、细胞外调节激酶（ERK1/2）和磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白相对表达量。结果：芪附汤可以改善模型鼠血清中降低的cAMP和cAMP/cGMP；减少模型鼠升高的Uβ2-MG、尿NAG酶，改善肾间质细胞外基质及其胶原沉积，上调肾组织E-cadherin蛋白表达，下调肾组织α-SMA，TGF-β1，CTGF，p-ERK1/2蛋白表达；但是，对Scr，BUN，UA没有影响。芪附汤改善RIF的作用优于依那普利。结论：芪附汤可以改善模型鼠阳虚证指标以及尿β2-MG、尿NAG酶排泄，它可能是通过上调肾组织E-cadherin蛋白表达，下调肾组织α-SMA，TGF-β1，CTGF以及ERK1/2信号通路中关键信号分子――p-ERK1/2蛋白表达，改善肾小管EMT，从而减轻RIF。

[关键词] 肾小管/间质纤维化；芪附汤；肾小管上皮细胞间充质转分化；ERK1/2信号通路

研究表明，肾小管上皮细胞间充质转分化（epithelial to mesenchymal transition，EMT）是慢性肾脏病患者形成肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis，RIF）的主要病变途径[1-3]。EMT是指肾小管上皮细胞在多种致病因素的影响下失去黏附性，并丢失标志性蛋白，如上皮型钙粘蛋白（E-cadherin）而表达间充质细胞的标志性蛋白，如α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA），最终，发生细胞表型转分化而成为肌成纤维细胞（myofibroblast，MyoF）。转分化后的细胞在形态和功能上出现一些特征性改变，尤其是会过度合成和分泌细胞外基质（extracellular matrix，ECM），从而，促进肾间质纤维化的形成和进展[4-5]。单侧输尿管接扎术（unilateral ureteral obstruction，UUO）是国际公认的RIF造模方法，UUO模型鼠与人类RIF病理改变相似[6]。据报道[7-8]，UUO模型鼠具备肾小管EMT的典型特征，如肾小管E-cadherin表达减弱，α-SMA表达增强，转化生长因子（transforming growth factor，TGF）-β1和结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）表达上调，ECM过度产生等，而且，这些病变受到包括细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated protein kinase，ERK）1/2通路在内的多条信号通路的调控[9]。据报道[10-11]，一些中药复方或单味中药可以通过调节EMT而改善RIF。芪附汤（Qifu decoction，QFD）是首载于北宋《魏氏家藏》的古方，由黄芪、附子组成，具有“温助肾阳，益气补虚”的功效（《中医方剂大辞典》）。在临床上，QFD可以改善RIF，延缓肾功能减退。然而，迄今为止，其体内的相关作用和机制不甚清楚。因此，笔者借助腺嘌呤灌胃联合UUO的方法建立RIF模型，观察芪附汤对模型鼠EMT的干预作用，试图阐明其通过调节EMT和ERK1/2信号通路的活性而改善RIF的机制。

1 材料

11 动物 SPF级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠35只，8周龄，体重180～220 g，由南京大学医学院附属鼓楼医院（以下简称鼓楼医院）动物实验中心代购和饲养，合格证号SCXK（苏）2008-0010，所有大鼠均喂予标准饲料，自由饮水，购回后适应性喂养1周。

12 药物和试剂 芪附汤原液配制：生黄芪，产地内蒙古；炮附片，产地四川；2种生药饮片均购自北京同仁堂大药房，由江苏省中医院中药房代煎，并浓缩为生黄芪原液（05 g・mL-1）、炮附子原液（04 g・mL-1），依据浓度比例（2∶1）混合，配制成芪附汤原液。腺嘌呤（adenine）购于美国Sigma公司，将1 g腺嘌呤溶解于50 mL淀粉溶液中，配置成2%的悬浊液；马来酸依那普利购于江苏扬子江药业集团股份有限公司，将20 mg依那普利溶解于50 mL蒸馏水中，配置成04 g・L-1的依那普利悬浊液，连同中药原液一起放入4 ℃冰箱贮存、备用；全蛋白提取试剂盒、二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白浓度测定试剂盒和蛋白相对分子质量标记物购自凯基公司；蛋白上样缓冲液购自碧云天公司；脱脂奶粉购自伊利公司；聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜、辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）显色液购自Milipore公司；小鼠抗大鼠α-SMA单克隆抗体、兔抗大鼠CTGF多克隆抗体、兔抗大鼠上皮型黏钙蛋白多克隆抗体和异硫氰酸酯（fluorescein isothiocyanate，FITC）标记的山羊抗兔多克隆抗体以及山羊抗小鼠单克隆抗体均购自Abcam公司；兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗体购自Santa Cruze公司，兔抗大鼠ERK1/2和磷酸化-ERK1/2（phosphorylated-ERK 1/2，p-ERK 1/2）多克隆抗体、小鼠抗大鼠甘油醛磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）单克隆抗体以及HRP标记的山羊抗兔IgG和山羊抗小鼠IgG抗体均购自Bioworld生物试剂公司。大鼠血清环磷酸腺苷（serum cyclic adenosine monophosphate，cAMP）、环磷酸鸟苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）ELISA试剂盒购自上海优宁维生物制剂公司。其中，部分试剂和抗体委托鼓楼医院科研部代购。

2 方法

21 模型制作方法 RIF阳虚证模型制备：根据国内外文献，采用腺嘌呤灌胃联合UUO的方法建立大鼠RIF阳虚证模型[7，13]。在实验开始的第1～14天，进行腺嘌呤（150 mg・kg-1）灌胃，第15天，行左侧输尿管结扎手术。腹腔注射氯胺酮地西泮等体积混合液（3 mg・kg-1），麻醉后，将大鼠取仰卧位固定于手术板上，常规消毒，左侧腹部切口，暴露左肾，钝性分离肾周脂肪，沿肾门部位寻找输尿管，在输尿管上、下段结扎，并于中间处剪断。分层缝合切口，予青霉素钠（20万单位/只）腹腔注射，连续3 d。假手术组仿照模型组，开腹分离出左侧输尿管，不予结扎。

22 分组与给药方法 将35只大鼠按随机数字表分为4组，即假手术组5只、模型组（蒸馏水干预）10只、芪附汤组（芪附汤原液干预）10只、依那普利组（依那普利悬浊液干预）10只。根据60 kg标准体重患者芪附汤的每日临床治疗量（生黄芪30 g、炮附子15 g），按动物标准换算公式，大鼠的有效量相当于生黄芪3 g・kg-1、炮附子15 g・kg-1。芪附汤组大鼠于UUO术后第2天开始经灌胃给予芪附汤原液，模型组和假手术组大鼠同时经灌胃给予蒸馏水（2 mL），每日1次，连续3周。各组大鼠自给药开始计时，第3周末，经腹腔注射氯胺酮而麻醉，心脏穿刺处死，采集血液样本和肾组织，进行各项指标的检测。

23 一般情况和肾脏外观特征 每天观察各组大鼠精神、饮食、饮水、皮毛色泽以及活动情况等；在药物和蒸馏水干预前后，每周末称量大鼠体重；处死大鼠前观察肾脏外观特征；摘除大鼠肾脏后，拍照并称量肾脏质量（肾重）。

24 尿液指标 在给药前、手术前、处死前分别将大鼠放入金属代谢笼，禁食，给予正常饮水，留取24 h尿液，记录尿量；药物干预第3周末处死时，从左肾肾盂中抽取尿液，检测尿蛋白排泄量（24 h urinary protein excretion，Upro）、尿β2-微球蛋白（urinary β2-microglobulin，Uβ2-MG）、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（N-acety1-β-D-glucosamInIdase，NAG）酶。

25 血清生化指标 在实验开始第1天和第15天（手术前）经眼眶取血；药物干预后第3周末，经心脏采血，采用全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐（serum creatinine，Scr）、血清尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、血清尿酸（uric acid，UA）等生化指标。

26 肾脏形态特征 剖开大鼠腹腔，自肾门处摘取两侧肾脏；肾脏摘除后，分离皮、髓质，取少量肾皮质（一般选肾脏的上极或下极）固定于10%中性甲醛内，经脱水16 h后，石蜡包埋，切片3 μm，进行过碘酸雪夫（periodic acid schiff，PAS）染色和Masson染色；借助光学显微镜（光镜），观察肾小管/间质病理形态并拍照；每张切片随机选取20个肾小球，采用病理图像分析系统Image-pro plus（IPP）计算肾间质纤维化程度（ECM或胶原面积/肾间质面积）。

27 肾组织α-SMA，E-cadherin，TGF-β1，CTGF，ERK1/2，p-ERK1/2蛋白表达 采用Western blot检测上述蛋白的表达水平。从-80 ℃冰箱中取出100 mg肾组织，用剪刀剪碎；用磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution，PBS）冲洗肾组织，放入4 ℃离心机，离心（3 000 r・min-1×5 min），反复冲洗，再离心，共3次；弃去PBS冲洗液，向肾组织中加入含蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂和苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）的总蛋白裂解液，用电动匀浆机匀浆，在冰上放置30 min，每隔3 min震荡1次，最后，再次放入4 ℃离心机，离心（12 000 r・min-1×15 min），取上清液（即总蛋白），保存于-80 ℃冰箱备用；提取总蛋白后，采用BCA法测定蛋白浓度，配制10%分离胶和浓缩胶，将等量的各样本200 μL按4∶1的比例与蛋白上样缓冲液混匀，在沸水中煮10 min进行蛋白变性；分别加样，在电泳槽中加满电泳缓冲液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，PAGE-SDS）；电泳完毕后，取下凝胶，将凝胶上的蛋白电转移至PVDF膜上，根据目的蛋白的位置留取所需膜，用含10%脱脂奶粉的聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯（tris buffered saline tween，TBST）缓冲液封闭2 h；分别加入相应的一抗，密封孵育4 h，用TBST缓冲液洗涤约1 h，分别加入二抗，孵育2 h后，再次用TBST缓冲液洗涤膜；取出PVDF膜，将HRP显色液均匀地撒在膜上，在暗室曝光、定影。用Quantity One 444软件（Bio-Rad）进行光密度分析，结果分别与GAPDH光密度对照，其比值表示蛋白相对表达量。

28 血清cAMP，cGMP含量 采用ELISA试剂盒检测（1MJ02439和YY01568B，操作程序详见说明书）。

29 统计学分析 实验数据用±s表示，统计学处理使用SPSS 150统计软件包进行，计数数据2组间的比较采用Mann-Whitney U检验，P

3 结果

31 大鼠一般情况和肾脏外观特征 除假手术组外，各组大鼠造模后均出现明显的精神萎靡，活动度下降，恶寒蜷卧，食欲不振，轻度腹泻，毛发枯暗而杂乱，体重减轻，多尿，尿道口周围潮湿等情况，其中，模型组大鼠症状最为严重；经芪附汤和依那普利干预后，上述情况均有所改善，处死前体重亦有所增加，与模型组大鼠相比，差异有统计学意义（P

表1 各组大鼠体重、肾重/体重的比较（±s）

Table 1 Comparison of body weight and kidney weight/body weight of rats in each group（±s）

组别n干预前体重/g干预后体重/g干预后左肾重/体重/g・kg-1

假手术521863±107230453±2741321±012

模型922175±94124175±14721）772±2391）

芪附汤1021912±112828431±21271，2）528±1241，2，3）

依那普利1022253±9652829±23461，2）621±1491，2）

注：与假手术组比较1）P

32 芪附汤对大鼠阳虚证指标的作用 与假手术组大鼠相比，模型组、依那普利组大鼠血清cAMP含量、cAMP/cGMP显著降低，其差异有统计学意义

3.3 芪附汤对模型鼠尿蛋白的影响 与假手术组大鼠相比，模型组大鼠Uβ2-MG，UNAG均显著增加，其差异有统计学意义（P

3.4 芪附汤对模型鼠肾功能的影响 除假手术组外，各组大鼠在药物干预后第3周末，Scr和BUN都有显著增高，与假手术组大鼠相比，差异有统计学意义（P

表3 各组大鼠Upro，Uβ2-MG，UNAG的比较（±s）

Table 3 Comparison of urinary protein excretion，urinary β2-MG and urinary NAG of rats in each group（±s）

组别nUpro/mg・L-1Uβ2-MG/μg・L-1UNAG/U・L-1

假手术519.83±4.212.43±0.384.74±0.37

模型921.62±5.028.14±0.621）12.8±0.521）

芪附汤1020.81±4.925.23±0.371，2，3）9.36±0.611，2，3）

依那普利1021.67±3.927.73±0.591，2）10.57±0.851，2）

表4 各组大鼠肾功能的比较（±s）

Table 4 Comparison of renal functions of rats in each group（±s）

组别nScr/μmol・L-1BUN/mmol・L-1UA/μmol・L-1

假手术519.83±4.215.43±0.38112.35±21.72

模型986.62±28.021）10.14±0.621）120.02±18.35

芪附汤1080.81±24.921）9.87±0.371）119.82±19.37

依那普利1092.67±23.921）9.73±1.261）116.58±22.31

3.5 芪附汤对模型鼠肾小管/间质形态的影响 经光镜观察，正常组大鼠肾小球毛细血管襻开放良好，肾小管上皮细胞排列整齐，未见肾间质ECM增宽和明显的炎性细胞浸润；模型组大鼠肾小管上皮细胞排列紊乱，肾间质出现明显的ECM增宽，胶原所占面积呈弥漫性增加，肾小管萎缩、断裂，大量炎症细胞浸润；经芪附汤及依那普利干预后，肾小管上皮细胞形态改善，炎症细胞浸润减轻，肾间质ECM及胶原所占面积明显减少，与模型组大鼠相比，其差异有统计学意义（P

3.6 芪附汤对模型鼠肾组织E-cadherin，α-SMA，TGF-β1，CTGF，ERK1/2，p-ERK1/2蛋白表达水平的影响 假手术组大鼠E-cadherin蛋白表达水平较高，α-SMA，TGF-β1，CTGF，p-ERK1/2蛋白基本不表

A～D.PAS染色（×400）；E～H.Masson 染色（×400）；A，E.假手术组；B，F.模型组；C，G.芪附汤组；D，H.依那普利组。

图2 各组大鼠肾小管/间质形态的比较

Fig.2 Renal histopathology of the rats in each group

表5 各组大鼠肾间质纤维化指数评分的比较（±s）

Table 5 Comparison of renal interstitial fibrosis score of rats in each group（±s）

组别n间质基质增宽比例/%间质胶原沉积比例/%

假手术55.78±3.256.92±3.21

模型918.47±5.921）32.19±7.281）

芪附汤1011.32±6.421，2，3）26.47±6.431，2，3）

依那普利1014.43±5.761，2）29.32±7.481，2）

达或少许表达；模型组大鼠E-cadherin蛋白表达水平显著降低，α-SMA，TGF-β1，CTGF，p-ERK1/2蛋白表达水平明显增高；芪附汤和依那普利可上调模型鼠E-cadherin蛋白表达水平，下调α-SMA，TGF-β1，CTGF，p-ERK1/2蛋白表达水平，与模型组大鼠相比，其差异有统计学意义（P

4 讨论

研究表明，RIF发生、发展过程错综复杂，涉及众多细胞、细胞因子和ECM之间相互作用。其中，炎症细胞浸润、肾小管EMT、成纤维细胞增殖和活化、促纤维化细胞因子释放以及ECM合成与降解的失衡是RIF形成的关键环节[14]。笔者认为，RIF归属于“络病”、“积”范畴，其病理形态类似“肾络积” [15]。肾为先天之本，水火之脏，内寄真阳，人体一切生命活动都是靠肾的气化功能来完成的，而气化作用的动力就是肾阳。“积之始生，得寒乃生，厥乃成积也”（《灵枢・百病始生》）。因此，“肾阳亏虚、阴寒停积”是肾络瘕的基本病机，“温助肾阳、益气补虚”的芪附汤可以作为治疗RIF的基本方剂之一。

为了阐明芪附汤对阳虚证RIF的改善作用，笔者首先建立腺嘌呤灌胃联合UUO的动物模型，试图模拟人类RIF阳虚证的病理特点。UUO是国际公认的RIF经典动物模型，与人类RIF病理改变相似[6]；腺嘌呤模型[12]是国内学者研究较多的“阳虚证”模型，其阳虚表现的物质基础是cAMP和cGMP。据报道[16]，cAMP含量和cAMP/cGMP在阳虚证患者体内均降低，因此，可作为肾阳虚的客观指标[13]。笔者的研究表明，芪附汤提高了模型鼠血清cAMP含量和cAMP/cGMP，改善了其阳虚状态。

腺嘌呤经体内代谢形成腺嘌呤结晶沉积在肾小管，引起小管扩张，短期内出现明显肾功能减退；而UUO形成的单侧输尿管梗阻，引起肾间质脏炎症，具有无蛋白尿和肾功能一过性升高等特点[7，13]。笔者将腺嘌呤灌胃与UUO相结合而诱导出RIF模型，该模型鼠具有以下特点：反映肾小管早期损害的标志性尿蛋白（尿β2-MG和尿NAG酶）明显升高和肾功能明显减退。笔者发现，芪附汤能够减少模型鼠尿β2-MG、尿NAG酶的排泄量，在药物干预第3周末，芪附汤组大鼠的Scr，BUN低于模型组，而依那

与假手术组比较1）P

图3 各组大鼠肾组织E-cadherin，α-SMA，TGF-β1，CTGF，ERK1/2，p-ERK1/2蛋白表达的比较

Fig.3 Comparison of E-cadherin，α-SMA，TGF-β1，CTGF，ERK1/2 and p-ERK1/2 protein expression of rats in each group

普利组大鼠的Scr，BUN高于模型组。因此，芪附汤可以改善模型鼠肾小管性蛋白尿和肾功能，但是，依那普利没有这样的作用，这可能与梗阻性肾损伤模型不宜使用ACEI类药物有关。

笔者发现，芪附汤可明显改善模型鼠排列紊乱的肾小管上皮细胞形态，减轻炎症细胞浸润，减少肾间质ECM和胶原所占面积的比值。也就是说，芪附汤对其肾小管/间质形态也有明显的改善作用。EMT特征性标志包括肾小管上皮细胞角蛋白、E-cadherin表达减弱，和α-SMA、波形蛋白表达增强等[4-5]。研究表明，在UUO动物模型中E-cadherin的表达显著减弱，α-SMA表达明显增强，肾小管EMT是UUO模型出现RIF的重要发病机制[7]。笔者的研究结果显示，芪附汤可以明显逆转模型鼠肾组织减弱的E-cadherin蛋白表达和增强的α-SMA蛋白表达。在RIF的发生、发展过程中，TGF-β1是最重要的致纤维化因子；CTGF是TGF-β1的下游效应物质，也是致纤维化的生长因子，二者在调控EMT和反映纤维化程度方面发挥着重要的作用；在UUO模型中，TGF-β1和CTGF明显上调，并诱导ECM产生[7-8]。笔者的研究结果表明，芪附汤可以明显降低模型鼠肾组织中增加的TGF-β1和CTGF蛋白表达水平。

据报道[9]，ERK1/2信号通路是调控肾小管上皮细胞EMT的重要通路之一，p-ERK1/2的表达增加标志着该条信号通路的激活。祝胜郎等观察了UUO模型中TGF-β1和p-ERK1/2蛋白表达特征，结果发现，TGF-β1和p-ERK1/2蛋白均随着时间的迁移而逐渐升高，表达时相一致，而且，呈明显正相关[19]。研究表明，在各种器官纤维化的发生过程中，包括TGF-β1和CTGF在内的多种细胞因子均能激活ERK1/2信号通路[20]。笔者发现，在腺嘌呤灌胃联合UUO的模型鼠肾脏中，p-ERK1/2蛋白表达增加，ERK1/2信号通路被激活；而芪附汤可以减少模型鼠肾组织内p-ERK1/2蛋白表达，也就是抑制了ERK1/2信号通路的活性。

综上所述，借助腺嘌呤灌胃联合UUO诱导的RIF阳虚证模型鼠，笔者阐明，芪附汤可以改善模型鼠阳虚证指标以及尿β2-MG、尿NAG酶排泄，它可能是通过上调肾组织E-cadherin蛋白表达，下调肾组织α-SMA，TGF-β1，CTGF以及ERK1/2信号通路中关键信号分子――p-ERK1/2蛋白表达，改善肾小管EMT，从而减轻RIF。

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Effects and mechanisms of Qifu decoction ameliorating renal tubulointerstitial

fibrosis through inhibiting ERK1/2 signaling pathway in unilateral

ureteral obstruction rats with yang deficiency

SUN Wei1，2 *， YIN Xue-jiao3， TU Yue2， WAN Yi-gang2，4， LIU Hong2， HU Hao2

（1. Jiangsu Provincial Hospital of Chinese Medicine， The Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine，

Nanjing 210029， China；

2. Research Institute of Kidney Disease， Nanjing University of Chinese Medicine， Nanjing 210029， China；

3. Yellow River Sanmenxia Hospital， The Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology，

Sanmenxia 472000， China；

4. Department of Chinese Medicine， Nanjing Drum Tower Hospital， The Affiliated Hospital of Nanjing University

Medical School， Nanjing 210008， China）

[Abstract] Objective： To demonstrate the effects and mechanisms of Qifu decoction（QFD）on renal interstitial fibrosis（RIF）in model rats with yang-deficiency syndrome. Method： The rats were randomly divided into 3 groups，the Sham group（Group A），the Model group（Group B），the Qifu decoction group（Group C）and the Enalapril group（Group D）. The RIF model was established by adenine administrated and unilateral ureteral obstruction（UUO）of the left ureter. After the model was successfully established，the rats in Group C and D were administrated with QFD or the Enalapril suspension，while the rats in Group A and B were administrated with distilled water. All rats were administrated for 3 weeks. Before administration and at the end of week 1，2 and 3，the rats were weighted，and 24 h urinary protein excretion（Upro），urinary β2-microglobulin （Uβ2-MG） and urinary N-acetyl-D-glucosaminidase（NAG）were examined，respectively. All rats were killed after administration for 3 weeks. Blood and renal tissues were collected，renal morphology and tubulointerstitial morphology were evaluated，respectively. Serum cyclic adenosine monophosphate（cAMP），cyclic guanosine monophosphate（cGMP），blood urea nitrogen（BUN），serum creatinine（Scr）and uric acid（UA）were detected，respectively. The protein expressions of E-cadherin，α-smooth muscle actin（α-SMA），transforming growth factor-β1（TGF-β1），onnective tissue growth factor（CTGF）extracellular signal-regulated protein kinase 1/2（ERK1/2）and phosphorylated-ERK1/2（p-ERK1/2）in kidney were evaluated，respectively. Result： QFD ameliorated serum cAMP level and the rate of cAMP/cGMP，attenuated urinary β2-MG level，NAG level and renal tubulointerstitial fibrosis，increased E-cadherin protein expression，and reduced α-SMA，TGF-β1，CTGF and p-ERK1/2 protein expressions in the kidney. However，QFD had no influence on renal function in vivo. In addition，these effects were better than those of the model rats treated by Enalapril. Conclusion： QFD could alleviate yang-deficiency parameters，as well as urinary β2-MG level and NAG level in model rats induced by adenine administration and UUO. Moreover，QFD could improve EMT and RIF by up-regulating E-cadherin protein expression，and down-regulating α-SMA，TGF-β1，CTGF and p-ERK1/2 protein expressions，the key molecular in ERK1/2 signaling pathway.

[Key words] renal tubulointerstitial fibrosis； Qifu decoction； epithelial mesenchymal transition； extracellular signal-regulated protein kinase 1/2 signaling pathway

doi：10.4268/cjcmm20142102