HPLC法测定救心丸中人参皂苷Rg1的含量

【摘 要】 目的：建立救心丸的中人参皂苷Rg1。方法：采用高效液相色谱法对人参皂苷Rg1进行了含量测定。结果：用高效液相色谱法对人参皂苷Rg1进行了含量测定，人参皂苷Rg1在0.17384～0.8692μg范围内与峰面积有良好线性关系，回归方程为Y=270985X-723.9（r=0.9996），平均回收率为100.7%，RSD=1.7%。结论：方法专属性强，重现性好，回收率良好，可有效控制救心丸的产品质量。

【关键词】 救心丸 HPLC 人参皂苷Rg1 含量测定

救心丸收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十九册，具有活血化瘀、化痰通络的功能，由八味名贵药材人工麝香、人工牛黄、珍珠、人参茎叶总皂苷、牛胆膏粉、冰片、蟾酥、三七膏粉组成。目前质量标准中尚无含量测定，仅有显微、理化鉴别，为更好的控制产品质量，本实验采用HPLC法对方中人参茎叶总皂苷、三七膏粉中人参皂苷Rg1进行了含量测定，能进一步控制产品质量。

1 试验仪器与材料

仪器：LC-10ADvp高效液相色谱仪（日本岛津）。依利特牌C18色谱柱（5μm，250mm×4.6mm ID）；SCL-10Avp二极管阵列检测器；756CRT紫外分光光度仪（上海分析仪器厂）。

试药：人参皂苷Rg1对照品由中国食品药品检定研究院提供（批号110703-200726，供含量测定用）；乙腈为色谱纯（国药集团化学试剂有限公司）；水为二次蒸馏水；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

（1）色谱条件的确定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05%磷酸溶液（20：80）为流动相；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于4000。

（2）阴性干扰性检查。按本制剂处方组成，制备不含三七膏粉，人参茎叶总皂苷双阴性的空白制剂，制得阴性对照溶液，分别精密吸取阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪。结果阴性对照溶液中在人参皂苷Rg1色谱峰处无相应色谱峰出现，而供试品溶液中在人参皂苷Rg1峰处有峰出现，说明对人参皂苷Rg1的测定无干扰。

（3）对照品溶液的制备。精密称取置人参皂苷Rg1对照品适量置量瓶中，加甲醇适量，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。

（4）供试品的处理方法。取供试品20粒，精密称定重量，研细，称取样品0.1g，置25ml量瓶中，加入甲醇适量，超声提取30分钟，放冷后用甲醇定容至刻度，摇匀。过滤，弃其初滤液，取其续滤液，即得。

（5）精密度考察。按所选定的供试品溶液的制备方法制备供试液，精密吸取同一供试品溶液10μl，重复进样5次，注入液相色谱仪，测定人参皂苷Rg1峰面积值，结果见表1。

RSD=0.57%，结果表明精密度良好。

（6）线性关系考察。精密称取人参皂苷Rg1对照品11.12mg，置25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，精密吸取2.5ml，置25ml容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀（C对=0.04346mg/ml），分别精密吸取4、8、12、16、20、10μl注入液相色谱仪，测得的峰面积值见表2。

以峰面积值（Y）对进样量（X）进行回归，得标准曲线方程Y=270 985X-723.9，r=0.9996。以峰面积值（Y）对进样量（X）作图（见下图）。以上结果表明，在0.17～0.87μg范围内，人参皂苷Rg1峰面积值与进样量有良好的线性关系。

（7）重复性考察。按标准中的含量测定方法，取同一批样品6份，分别按照供试品溶液的制法制备供试液，按拟定的色谱条件测定人参皂苷Rg1的含量，结果见表3。

人参皂苷Rg1含量RSD=0.65%，结果表明重复性良好。

（8）稳定性考察。按所选定的供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24小时进样，测定供试品溶液中人参皂苷Rg1峰面积，结果见表4。

0-12h，RSD=0.54%。0-24h，RSD=2.47%。结果表明样品在12小时内稳定性良好，而在24小时内不稳定。

（9）加样回收率试验。取一批成品按所选定的供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液。分别对照品溶液（C对=0.3139mg/ml）和供试品溶液注入液相色谱仪。测定人参皂苷Rg1的含量为16.3mg/g。取此批样品约0.05g，共6份，精密称定，分别在其中精密加入浓度为0.3139mg/ml人参皂苷Rg1对照品溶液2.0ml，挥干溶剂，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，照样品测定法测定人参皂苷Rg1的含量，以下列公式计算回收率，结果见表5。

回收率（%）=×100%

结果表明，平均回收率为100.7%，RSD=1.17%，加样回收率良好。

（10）三批样品测定。按已确定含量测定的方法对三批样品人参皂苷Rg1的含量进行测定，结果见表6。

根据上述十批样品测定结果，建议确定救心丸人参皂苷Rg1含量（本品每粒含人参皂苷Rg1，不得少于0.25mg）。

参考文献：

[1] 卫生部药品标准中药成方制剂第十九册.33.

[2] 张成义，陈曦，李贺，等.消渴灵冲剂降糖作用的研究[J].北华大学学报：自热科学版，2007，8（2）：154—7.

[3] 中国药典2010年版一部.2010：285-286.