顶空气相色谱法测定萜类物质(Y211)中的甲醇和石油醚

摘 要 目的 建立萜类物质（Y211）中残留溶剂甲醇和石油醚的顶空气相色谱测定方法。方法 采用DB-624毛细管色谱柱，程序升温，氢火焰离子化检测器，顶空温度100℃。选用DMF为溶剂。结果 各待测组分完全分离，线性关系良好，精密度RSD% 0.79%～1.29%，检测限0.060～0.12μg/mL，回收率均大于85%。结论 此法操作简单灵敏，结果准确可靠，可用于Y211中残留溶剂检测。

关键词 顶空气相色谱法 Y211 残留溶剂 甲醇 石油醚

前 言

Y211为一种萜类物质，是几种异构体的混合物，几种单体沸点分别为125～127℃，146～147℃，200～201℃。Y211能促进胃粘膜微粒体中糖质中间体的生物合成。甲醇有较强毒性，对人体神经系统和血液系统影响最大；它经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应，甲醇蒸气能损害人的呼吸道粘膜和视力[1，2]，甲醇不易排出在体内、发生蓄积，氧化生成有毒性的甲醛和甲酸。石油醚的蒸气或雾对眼睛、粘膜和呼吸道有刺激性，中毒表现为烧灼感、咳嗽、喘息、喉炎、气短、头痛、恶心和呕吐，且对皮肤有强烈刺激性。在Y211制备过程中，使用甲醇和石油醚，根据ICH相关要求需要进行残留溶剂控制[3，4]。本实验采用顶空气相色谱法[5～8]建立Y211中残留溶剂甲醇[9～12]和石油醚[13～15]的测定方法。

1 仪器与试药

Agilent 7890A气相色谱仪，Agilent G1888 顶空进样器，氢焰离子化检测器（FID） 。

甲醇、石油醚、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）均为分析纯，天津市凯信化学工业有限公司。试验样品：Y211（01、02、03批）。

2 试验方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DB -624 毛细管柱 （60.0m×0.53mm×3.00?m），固定相为6%氰丙基苯-94%二甲基硅氧烷共聚物；气化室温度250℃；检测器温度250℃；程序升温：50℃维持2min，升温速率10℃/min，升温至220℃，维持1min；载气为氮气，流速1.5mL/min，分流比10∶1；顶空加热温度100℃，平衡时间20min，进样量3mL。

2.2 溶液配制

2.2.1 标准溶液 标准贮备液：准确称取甲醇375mg、石油醚625mg，置50mL棕色容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释到刻度，混匀；标准溶液：准确量取标准贮备液1mL置25mL量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，混匀；80%标准溶液：准确量取标准储备液0.8mL置25mL量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，混匀，即得；120%标准溶液：准确量取标准贮备液1.2mL置于25mL量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，混匀。

2.2.2 供试品溶液 分别准确称取3批（01、02、03批）样品约200mg置10mL顶空瓶中，加入2mL N，N-二甲基甲酰胺溶解，加盖密封，混匀，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 最小检测限试验 将标准溶液用N，N-二甲基甲酰胺逐步稀释，以信噪比S/N=3计算检测限，甲醇和石油醚的最小检测浓度分别为0.060μg/mL，0.12μg/mL。

2.3.2 定量限及其重复性 取标准溶液用溶剂逐步稀释，以信噪比S/N=10计算定量限。连续进行6次重复测定，计算各溶剂峰面积RSD%。在设定条件下，甲醇和石油醚定量限浓度分别为1.5μg/mL，0.25μg/mL；定量限重复性RSD%分别为1.37%和3.46%。

2.3.3 线性关系试验 分别移取标准储备液0.5mL，0.8 mL，1.0mL，1.5mL，2.0mL置于25mL置棕色容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，混匀。分别取2mL稀释后的标准储备液溶液加入10mL顶空瓶中，加盖密封，进样测定，记录色谱图。以各溶液浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归（见表1）。

2.3.4 精密度试验 取标准溶液2mL，共6份，分别置于10mL顶空瓶中，加盖密封，进行测定。计算各溶剂峰面积的RSD%。甲醇和石油醚峰面积的RSD%分别为0.79%和1.29%。

2.3.5 稳定性试验 取标准溶液2mL，分别置于10mL顶空瓶中，加盖密封。分别于0h，4h，8h，12h，13h，17h进样测定，记录色谱图，计算各溶剂峰面积RSD%。结果表明：甲醇和石油醚在13h之内稳定，其RSD%分别为1.15%和1.32%。

2.3.6 回收率试验 取01批样品200mg共9份，准确称定，置10mL顶空瓶中，分别加入上述相应标准溶液2 mL，加盖密封，混匀，进行测定。在该试验条件下，甲醇和石油醚的回收率均值分别为100.29%和87.57%。 RSD%分别为1.92%和1.98%。

2.4 样品测定

准确称取样品200mg置顶空瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺2mL使其溶解，加盖密封，混匀。按上述色谱条件以外标法进行测定，以峰面积计算其残留量。

3批样品中所检出的甲醇和石油醚含量均符合中国药典2010年版限度要求（见表2，图1）。

3 讨论

3.1 色谱柱选择

采用色谱柱HP-Innowax，石油醚基本不保留，很快出峰；采用色谱柱HP-5，得到十几个峰，与甲醇及溶剂DMF的分离度不好；采用色谱柱DB-624，调节合适的程序升温条件，能够达到很好的分离效果。

3.2 顶空进样方法与温度选择

甲醇和石油醚沸点分别为64～65℃和60～90℃，比较顶空温度80℃和100℃对残留测定的影响，在100℃时待测物响应略有提高，故确定顶空加热温度为100℃。

3.3 溶剂选择

待测物和样品在DMF中溶解度大， DMSO空白试剂干扰较多、难分开，故选用DMF作为溶剂，提高待测物响应，且溶解度适宜。

3.4 石油醚检测

石油醚为混合物，成分复杂，在不同色谱柱上都会产生多个色谱峰，与其他溶剂相互干扰，给检测增加难度。在计算时，将石油醚的各个峰面积相加，作为石油醚峰面积。在本实验色谱条件下，石油醚出15个色谱峰，与甲醇及溶剂DMF很好地分离。考虑到石油醚各组分比例固定，选取最大的峰面积做检测限和定量限，其保留时间为5.18min。

4 结论

甲醇与石油醚广泛应用于药物合成中，对长期接触者将造成较大危害。采用所建立的顶空气相色谱法测定Y211中石油醚和甲醇，可用于Y211中残留溶剂的检测，较好地控制甲醇和石油醚残留量，保证Y211安全性。该分析方法灵敏度高、重复性好、简单易操作。

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