巴戟天配方颗粒中多糖含量测定研究

[摘要] 目的：测定巴戟天配方颗粒中总多糖的含量。方法：用紫外分光光度法测定其含量，测定波长为626 nm。结果：检测浓度在0.035 5～0.136 8 mg/ml范围内与吸收度线性关系良好（r=0.998 8）。结论：研究的方法可有效地控制巴戟天配方颗粒的质量。

[关键词] 巴戟天配方颗粒；紫外分光光度法；多糖

[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2011）01（b）-005-02

Determination of polysaccharides in morinda particulate formulations research

LUO Wenhui, LI Yangxue, SUN Dongmei

(Guangdong Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Province, Guangzhou 510095, China)

[Abstract] Objective: To determinate total polysaccharide content in morinda particulate formulations. Methods: UV Spectrophotometry was adopted in the determination with the detection wavelength set at 626 nm. Results: In 0.035 5-0.136 8 mg/ml range, detection concentration and absorbance linear relations were good (r=0.998 8). Conclusion: The method can contol the quality of morinda particulate formulations effectively.

[Key words] Morinda particulate formulations; UV spectrophotometry; Polysaccharides

巴戟天配方颗粒具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效，主治阳萎遗精、宫冷不孕、月经不调、风湿痹痛、筋骨痿软等症[1]。现代药理研究表明，巴戟天多糖有明显的免疫增强作用[2]，故选多糖作为巴戟天质量控制的指标成分，进行巴戟天配方颗粒中多糖的含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津UV-2501PC紫外分光光度计（日本）、电子分析天平（Sartorius）、KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山）。

1.2 试药

巴戟天配方颗粒（批号：0901072、0902035、0906032、0907044、0910084、0911019、1002056、1008023）由广东一方制药有限公司提供。D（+）-葡萄糖对照品（批号：110833-200503）由中国药品生物制品检定所提供。水为蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 巴戟天多糖的提取与精制

取巴戟天药材，粉碎、烘干后，称取500 g，加入10倍的水，沸水浴提取1 h，滤过，加3倍体积的乙醇，静置过夜，收集沉淀，干燥得粗多糖。将粗多糖复溶于适量的蒸馏水中，采用Sevage试剂[三氯甲烷∶正丁醇（4∶1）]除蛋白（重复3次），加乙醇使其浓度为80%，静置过夜，收集沉淀。无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥。取沉淀溶于蒸馏水，加乙醇至乙醇浓度达70%，静置过夜，滤过，用70%乙醇反复淋洗，沉淀干燥，得精制巴戟天多糖[3]。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取D（+）-葡萄糖（105℃烘干）10 mg于50 ml容量中，加水溶解并稀释至刻度，配成0.212 8 mg/ml的对照品溶液，备用。

2.3 线性关系考察

精密吸取D（+）-葡萄糖对照品溶液（0.212 8 mg/ml）1、2、3、5、7、9 ml，分别置具塞试管中，加入蒽酮-浓硫酸试剂5 ml，同法操作为空白对照，然后沸水浴加热10 min，冰水浴冷却，在626 nm处测定吸收度。以D（+）-葡萄糖浓度（Y）对吸收度（X）进行线性回归分析，得线性回归方程：Y=1.399 6X-0.006 5（r=0.998 8）。结果表明含量在0.035 5～0.136 8 mg/ml范围内，D（+）-葡萄糖的浓度与吸收度有良好的线性关系[4]。

2.4 换算因子的测定

精确称取干燥至恒重的精制巴戟天多糖25 mg，置于100 ml容量瓶中，加水定容，60℃水浴加热溶解，放置至室温，得巴戟天多糖储备液。吸取多糖储备液4 ml，置于10 ml容量瓶中，加水定容。吸取上述溶液1 ml，置具塞试管中，加入蒽酮-浓硫酸试剂5 ml，同法操作为空白对照，然后沸水浴加热10 min，冰水浴冷却，于626 nm处测定吸收度。求得精制巴戟天多糖溶液中葡萄糖的含量，按下式计算换算因子。

换算因子f=

式中：W为多糖重量（mg），C为巴戟天多糖储备液的葡萄糖浓度（mg/ml），D为多糖的稀释倍数。

2.5 供试品溶液的制备

将巴戟天配方颗粒研细，精密称取约1 g，置锥形瓶中，加水30 ml，超声处理40 min，滤过，残渣以热水洗涤3次（每次5 ml），合并滤液，放冷后，置50 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密吸取2.5 ml，置50 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.6 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液，重复测定6次，结果RSD为0.53%，表明仪器的精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液，室温避光放置，分别于0、4、8、16、24 h，在626 nm波长处测其吸光度。结果吸光度基本无变化，测得吸收度的RSD为0.36%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.8 重现性试验

取同一批巴戟天配方颗粒供试品6份，分别按供试品溶液制备方法制备溶液测定吸光度，结果RSD为1.14%。

2.9 回收率测定

取已知含量的同一巴戟天配方颗粒供试品6份，各约1 g，精密称定，分别加入“2.1巴戟天多糖的提取与精制”项下所得的巴戟天多糖，分别按供试品溶液制备方法制备溶液，测定吸光度，计算回收率，结果见表1。

2.10 供试品测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，测定吸光度，由回归方程计算供试品中葡萄糖含量，按下式计算供试品中多糖的含量。结果见表2，图1、2。

多糖含量（%）=×100

式中：C为供试品溶液中葡萄糖的含量（mg/ml），D为供试品溶液的稀释倍数，f为换算因子，W为供试品重量（mg）。

3 讨论

本试验确立了巴戟天配方颗粒中多糖的紫外测定方法，蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮反应后溶液呈蓝绿色。本法具有简便、快速、成本低且重现性好的特点，为巴戟天配方颗粒质量标准的制定和提高提供了实验基础。

[参考文献]

[1]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典（2010版一部）[M].北京:中国医药科技出版社,2010:75.

[2]陈小娟,李爱华,陈再智.巴戟多糖免疫药理研究[J].实用医学杂志,1995,11(9):348-349.

[3]郭素华,王和鸣,黄涛,等.南靖巴戟天多糖的含量测定[J].福建中医学院学报,2006,16(1):32-33.

[4]王晓华,陈家春.湖北麦冬多糖含量的测定[J].湖北中医杂志,2005,27 (3):50-51.

（收稿日期：2010-11-01）