蒙药用植物棉团铁线莲总生物碱和总黄酮含量的测定

摘要：目的 研究蒙药用植物棉团铁线莲的总生物碱和总黄酮含量。方法 用乙醇提取棉团铁线莲的总生物碱和总黄酮，采用分光光度法测定其含量。结果 棉团铁线莲的总生物碱含量为：0.0056 mg/g，黄酮含量为0.1085 mg/g。结论 蒙药用植物棉团铁线莲中富含有黄酮类化合物和生物碱类化合物，其生物碱含量较高。

关键词：蒙药用植物；棉团铁线莲；总生物碱；总黄酮

棉团铁线莲（Clematis hexapetala.）别名山蓼、棉花团、威灵仙，为毛茛科（Ranunculaceae）铁线莲属多年生宿根草本植物。在我国分布于内蒙古、甘肃东部、陕西、山西、河北、辽宁、吉林、黑龙江。生固定沙丘、干山坡或山坡草地，尤以东北及内蒙古草原地区较为普遍。分布广，资源丰富[1]。棉团铁线莲全草入蒙药，夏末、秋前采收。具有破痞，调温，"协日乌素"，止腐，消肿，止泻之功效。临床上主治寒痞，消化不良，寒性"协日乌素"病，"吾雅曼"病，黄水疮，疮疡，水肿，寒泻，祛除各种瘤的功效[2]。最近研究发现其具有抗肿瘤、降血压、降糖、抑菌、抗氧化等药理作用，主要有效成分为生物碱类化合物[3-4]。本研究测定蒙药用植物棉团铁线莲的总生物碱含量和总黄酮含量，为这一民主植物药的开发利用提供实验数据。

1资料与方法

1.1一般资料 实验用棉团铁线莲采自内蒙古呼和浩特市大青山，采摘后自然晾干，粉碎后过100目的筛子，保存于阴凉干燥处。盐酸小檗碱标准品和芦丁标准品购于中国生物检定所。主要仪器有，HH-W600数显恒温三用水箱，SG8200H超声波清洗器，GL-22M高速冷冻离心机，SHB-B95 循环水式多用真空泵，IKA- RV10B25 旋转蒸发仪和UV-2000紫外可见分光光度计等。

1.2盐酸小檗碱标准曲线的制作 精确称取2.5 mg盐酸小檗碱标准品，用甲醇定容至25 mL得到母液，分别吸取0.5 mL、1 mL、1.5 mL、2 mL、2.5 mL、3.5 mL、4.5 mL 母液于5 mL玻璃试管中，再分别用甲醇定容至刻度，以甲醇为空白对照在 408 nm下测吸光值，以盐酸小檗碱浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，测定总生物碱的含量。

1.3盐酸小檗碱标准曲线的制作 准确称取芦丁标准品 25.00 mg于 100 mL 容量瓶中，加入少量80%乙醇，溶解，定容至刻度，摇匀，得芦丁标准溶液，浓度为0.25 mg/mL。精确量取芦丁标准品溶液0 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、2.4 mL分别置于10 mL刻度的试管中，均用蒸馏水稀释至2.40 mL，各加5 %亚硝酸钠0.40 mL，混匀，放置6 min，加10%硝酸铝0.40 mL混匀，放置6 min，加4.3%氢氧化纳4.0 mL，最后用水稀释至刻度，混匀，放置15 min。以试剂空白为参比，在506 nm处测定吸光度值。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。

1.4总生物碱的提取测定方法 称取4 g棉团铁线莲干粉，加入80 mL pH为3的95%乙醇，50℃下提取1 h，反复提取2次，合并滤液，旋转蒸发得乙醇浸膏，用10 mL 1%盐酸溶解，过滤，滤液用25%氨水调节pH至10，用三氯甲烷萃取2次取下层，合并滤液，旋转蒸发，用5 mL甲醇溶解，在408 nm下测定其吸光度。

1.5总黄酮的提取测定方法 准确称取棉团铁线莲干粉1.00 g于试管中，加入80%乙醇10 ml ，浸泡30 min（含研磨时间），加1g石英砂研磨，离心，取上清液。取提取1 mL于10 mL有刻度试管中，加水至2.40 mL，加5%亚硝酸钠0.40 mL，混匀，放置6 min，加10%硝酸铝0.40 mL混匀，放置6 min，加4.3%氢氧化纳4 mL，最后用水稀释至刻度，混匀，放置15 min以试剂空白为参比，在506 nm处测定吸光度值，代入标准曲线，计算黄酮含量。

2结果

2.1总生物碱含量 以盐酸小檗碱浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程：y=10.118x+0.0160，R=0.9980，见图1。棉团铁线莲总生物碱在418 nm处的吸光度为0.075，见表1，根据回归方程计算棉团铁线莲干粉中提取到的总生物碱含量为0.1085 mg/g。

2.2总黄酮含量 以芦丁标准品浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程：y=0.051x-0.0161，R=0.9881，见图2。棉团铁线莲总黄酮在506 nm处的吸光度为0.999，见表1，根据回归方程计算棉团铁线莲干粉中提取到的总生物碱含量为0.0056 mg/g。

图1 小檗碱标准曲线 图2 芦丁标准曲线

3结论

棉团铁线莲是蒙古民族独特的药用植物，具有破痞，调温，"协日乌素"，止腐，消肿，止泻之功效。临床上主治寒痞，消化不良，寒性"协日乌素"病，"吾雅曼"病，黄水疮，疮疡，水肿，寒泻，祛除各种瘤的功效[2]。通过本研究发现棉团铁线莲含有生物碱和黄酮类化合物。总生物碱含量较高，在本实验条件下，1 g干粉中提取到的总生物碱含量为0.1085 mg。黄酮含量为0.0056 mg/g，含量较低。

综上所述，棉团铁线莲总生物碱和总黄酮的提取工艺条件简便、含量较高，因此进一步加强其总生物碱和总黄酮的的分离纯化和药理研究，使其得到有效的开发和利用，对社会和经济发展具有重大意义和价值。

参考文献：

[1]刘立波，杨慧，王锦.铁线莲属植物研究进展[J].安徽农业科学，2009，37（15）：6959-6961.

[2]张鸽香，武珊珊.我国铁线莲属植物的研究现状及其园林应用方式[J].安徽农业科学，2010，38（22）：12076-12078.

[3]刘立波，杨慧，王锦.铁线莲属植物研究进展[J].安徽农业科学，2009，37（15）：6959-6961.

[4]孙凤，杨得坡.铁线莲属植物的化学成分研究进展[J].中国中药杂志，2009，34（20）：2660-2668. 编辑/张燕