巴戟天酒对肾阳虚证小鼠影响的实验研究

[摘要] 目的 了解巴戟天酒对肾阳虚证的影响程度,为肾阳虚病证的辅助治疗提供依据。方法 采用实验的方法分别设正常对照组、肾阳虚造模组、造模加药物组,每组20只动物,实验结果表明模型组与正常组比较,差异显著,模型组与治疗组比较,有差异性。结果 模型组与正常组比较,模型组MDA、NOS活性明显比正常组高,差异显著;模型组与治疗组比较,模型组MDA、NOS活性比治疗组高,有差异性。结论 巴戟天酒对小鼠肾阳虚证有改善作用。

[关键词] 巴戟天; 肾阳; 实验

[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)11-57-02

肾阳,又称命门之火,为人体阳气之根本。中医基础理论认为肾阳是建立在肾之精气基础上,具有温煦、蒸腾、气化、推动、激发以及固摄等生理作用,具体表现在能增强脏腑组织器官的功能活动,促进机体新陈代谢作用,制约体内阴寒之气,并不断化生人体所必需的物质等方面。肾阳以气的形式发散到人体全身脏腑组织器官及四肢百骸等具体部位而发挥以上各种作用。肾阳主宰着人体一身之阳。肾阳足,全身之阳亦足,则生命力强壮;肾阳衰,全身之阳亦衰,则生命力衰弱;肾阳亡,则全身之阳随之而亡,生命也就不复存在了。因此,肾阳被视为人体生命活动的原动力,在整个生命活动过程中占有至关重要的地位。

1 材料与方法

1.1 药物的配制

巴戟天酒是巴戟天等药材浸泡入白酒中而成,具体由福建农林大学食科院功能食品研究所提供,冰箱储存备用。

1.2 实验动物及其分组

昆明种封闭群小鼠60只,雌雄各半,体重(22±2)g,分笼饲养,随机分成5组,分别设正常对照组、肾阳虚造模组、造模加药物组,每组20只动物,分笼饲养,自由饮水,饲料由福建中医学院实验动物中心提供标准颗粒饲料。

1.3 动物模型的制作及给药

参照郑平东等[1]的方法并改进制作肾阳虚模型。方法是腺嘌呤研细末与饲料按0.5%比例均匀混合投给,投入量每日约350mg /kg(体重),持续15d,其间,造模加药物组每天灌胃药物。

1.4 指标的测定

行为学观察:观察动物的体重、体温、尿量、神态、体毛、活动度等情况。指标测定:于末次给药后第二天,取小鼠心脏血2mL, 3000转/min离心15min,取血清,分别测定NOS活性、MDA活性。

1.5 统计学分析

应用SPSS12.0软件进行分析。所有结果用均数±标准差来表示,各组间数据比较采用t检验和单因素方差分析。

2 结果

2.1 各组造模及给药前后一般情况观察

所有动物实验前精神好,动作灵活,毛发白而有光泽,皮肤黏膜红润,饮食量、饮水量正常,体重18～22g。实验结束后,正常对照组体重上升了10g,其他一般情况没有变化。模型组在造模后动物精神萎靡,乏力、倦怠、闭目、纳食减少,体重逐渐下降或持平,毛发疏松,粗糙无光泽,且颜色发黄,易脱落。造模加药物治疗组动物随着中药治疗,饮食逐渐恢复,动物功能低下的表现逐渐改善,皮毛变得舒展,黏膜逐渐红润,体重也逐渐增加,到第3周时基本恢复正常,与正常对照组比较无明显异常。

2.2 各组动物丙二醛(MDA)、NOS活性比较(表1)

从表1中可以看出,模型组与正常组比较,模型组MDA、NOS活性明显比正常组高,差异显著;模型组与治疗组比较,模型组MDA、NOS活性比治疗组高,有差异性。

3 讨论

3.1 关于肾阳虚

肾阳虚从总体上有肾阳虚体质和肾阳虚证的差别。肾阳虚体质的形成受气候环境、饮食、疾病以及生活行为等因素的影响。何裕民等认为体质是个体生理特性整体性的综合反映。在生理上表现为机能、代谢等方面的个体差异,在病理上表现为对某些病因和疾病的易感性或易罹性。肾阳虚体质属于病前的亚健康状态,在重视健康、重视生活质量的今天,关注对肾阳虚体质的改善,对防病健身,有着特殊的现实意义。证是机体在疾病发展过程中的某一阶段多方面的病理特性概括。当机体肾阳虚程度处于比较轻浅的范围内,并无显著突出的临床症状,如常感畏寒、四肢不温、小便偏多,此当属生理状态范围内的病理改变,即属中医的肾阳虚体质。在一定因素作用下,肾阳虚进一步发展,其病理改变超过一定程度时,则进入疾病状态,此时对其具体的证候、体征进行病理概括,所得出的诊断结果即是肾阳虚证。“证”的表现之中,往往或多或少地体现出个体的体质特征。肾阳虚证的临床表现中会或多或少地体现出肾阳虚体质的特征,肾阳虚体质的个体临床中亦易表现为肾阳虚证。

3.2 关于巴戟天酒

巴戟天是一味温补肾阳的中药,中医认为具有补肾壮阳、强筋骨、祛风湿的功效。已有研究表明[2],中医的肾阳不足与学习、记忆能力低下,自由基损害和过氧化脂质形成等相关。阳虚患者与甲状腺功能低下症有共同之处,均表现为脉缓无力、畏寒、乏力、肢冷、反应迟缓等。巴戟天具有良好的调节免疫功能、调节甲状腺功能、抗衰老、抗疲劳、增强记忆、抗肿瘤、促进骨生长及促造血功能等作用,表明巴戟天能改善与肾阳不足相关的药理学指标,提示巴戟天具有补肾壮阳作用。

巴戟天酒是由福建农林大学食科院功能食品研究所研制的一种药酒,具有温肾壮阳的功能,目前还没有验证其确切疗效。通过本课题的研究,可以确定巴戟天酒对肾阳虚的影响程度,对改善巴戟天酒的配方和疗效提供实验依据,为以后巴戟天酒能更好的投放市场生产提供支持。

3.3 各组动物NOS活性比较的意义

NOS的生物活性是参与NO合成的关键性酶,NO在体内的作用具有双重性,既是一种新型的细胞内和细胞间信使性气体物质,也是一种活性很强的气体分子自由基。在生理状态下传递信息,在病理性状态下对细胞具有毒性作用。研究表明,不同脑区神经核团的神经元一氧化氮合成酶(NOS)活性差别很大,大脑皮层灰质NOS活性纹状体内较强,下丘脑的视上核、视旁核,中脑的视上丘、下丘,脑垂体等部位NOS活性很高。NOS能促进NO合成,形成过量的NO。本研究表明模型组血清中NOS活性增高,参与生成的NO就增多,与上述研究结果相一致。过量NO会导致细胞功能紊乱甚至死亡,当NO得到一个电子时形成还原型NO-,它能与超氧阴离子O-2作用,形成过氧化亚硝酸根阴离子(ONOOO-),后者及分解产物羟自由基等能引起脂质过氧化和细胞毒性,实际上NO、ONO+也可分别与O-2、H2O2等反应生成过硝酸根(OONO-),其在酶的条件下可分解成OH和NO-2两种自由基,也都有较强的细胞毒性。NO的神经细胞毒性作用导致细胞膜功能失调致细胞死亡。

本实验结果表明,肾阳虚证血清中NOS活力升高,其机理可能是肾阳的温煦、激发、兴奋和促进的功能下降,不能推动温煦组织正常的代谢,导致自由基堆积过多而形成的。而温阳的药物可使受损组织中NOS活力降低是因为益气助肾药物补充了小鼠的肾气,肾气充足,机体生命力旺盛,细胞活跃,自由基产生减少,故NOS活力降低。

3.4 各组动物MDA比较的意义

已知机体在肾虚病证中交感肾上腺髓质系统可分泌大量儿茶酚胺,其代谢及氧化产物又可进一步产生具有广泛细胞毒作用的氧自由基。所以在造模过程中,氧自由基的大量形成和脂质过氧化的增加是细胞损伤的主要病理过程之一。MDA是脂质过氧化反应的最终产物,测定MDA的含量可反映组织中自由基的含量和脂质过氧化程度。氧自由基具有高度活性和细胞毒性,并通过脂质过氧化作用引起细胞损伤,导致细胞内蛋白质和核酸碎裂、聚合及构象改变,造成细胞不可逆损伤。MDA为众多脂质过氧化产物的一种。测试MDA的含量可以反映脂质过氧化程度,间接反映出细胞损伤程度。本实验通过检测血清中MDA含量,间接反应细胞脂质过氧化损伤程度。

本实验表明,在造模过程中,随着造模时间的延长,大脑海马中MDA含量逐渐增加,说明造模刺激造成自由基增多,从而引起脂质过氧化加强,由此使细胞受到多方面的损害。肾阳虚,肾气不足,推动无力,温煦无源,机体代谢减慢,导致自由基的堆积过多,而温肾阳的药物可以促进肾气的生成来纠正这种损害。

[参考文献]

[1] 郑平东. 腺嘌呤诱发“肾阳虚”动物模型的研制[J]. 中国医药学报,1990,5(8):228.

[2] 陈彩英. 巴戟天的药理研究进展[J]. 中药新药与临床药理,2009,20(3):54-56.

(收稿日期:2010-01-08)

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