青刺果多糖提取分析论文

1器材

1.1材料

青刺果，苯酚，3,5－二硝基水杨酸，亚硫酸，氢氧化钠，酒石酸钠正丁醇，三氯甲烷，95%乙醇，无水乙醇，考马斯亮蓝G-250。

1.2仪器数显恒温水浴锅HH-2型(国华电器有限公司)，电子天平MODELJD200-3（沈阳龙滕电子有限公司），800B型离心沉淀器（上海安亭科学仪器厂），旋转蒸发器（巩义市英峪高科仪器厂），unicoUV-2102PC型紫外可见分光亮度计（尤尼柯上海仪器有限公司）。

2方法

2.1青刺果多糖的提取称定青刺果50g，按比例加入蒸馏水，于恒温水浴锅中回流提取，布氏漏斗过滤，将滤液于旋转蒸发仪上进行浓缩，浓缩至约80ml时，再将浓缩液用Savage法除蛋白，即是向浓缩液中加其1/4体积的三氯甲烷，随之再加入三氯甲烷体积1/4的正丁醇，剧烈振摇5～10min，混匀，以1500r/min离心20min，分去水层与有机层交界处的变性蛋白质，水层仍按照此方法反复除蛋白5次。然后在上清液中加入一定量无水乙醇，使乙醇的终浓度达一定比例，沉淀过夜。沉淀用布氏漏斗抽滤，然后用无水乙醇和丙酮反复多次抽洗，直至沉淀呈粉末状时将其置于表面皿中。将表面皿于60℃干燥至恒重即得青刺果多糖粗品，计算粗多糖得率。

2.2正交实验根据有关资料报道，选取温度(A)，提取时间(B)，料液比(C)，乙醇终浓度(D)4个因素，每个因素3个水平，选用L9(34)正交实验方案提取青刺果多糖，以多糖得率为指标确定最佳提取工艺。因素水平见表1，实验安排方法见表2。表1青刺果多糖提取实验因素水平（略）表2青刺果多糖提取实验方案（略）

2.3含量测定采用硫酸-苯酚比色法测定粗多糖中川牛膝总糖含量［4］，DNS法测定粗多糖中还原糖的含量［5］，考马斯亮蓝G-250比色法测定粗多糖中蛋白质含量［6］。

2.4多糖含量计算

多糖含量(%)=总糖含量-还原糖含量

多糖得率(%)=多糖含量×干燥提取物质量原药材粉末质量×100%

3结果

3.1多糖含量从表3中可以看出，影响多糖得率的因素主次顺序为A>B>C>D，温度对多糖得率的影响最大，其次为时间，料液比和乙醇终浓度。根据正交表分析，青刺果多糖的最优提取工艺应为A3B3C3D2，即温度100℃，提取时间8h，料液比1：20，乙醇终浓度85%。表3正交实验结果（略）

3.2测定青刺果中蛋白质含量经计算得回归方程为Y=0.0163X-0.0539，相关系数r=0.9925，样品蛋白质含量见表4，由表4可知，含量最大的为样品1，含量为19.58%。表4青刺果蛋白质含量（略）

4讨论

多糖遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物与苯酚试剂发生缩合反应，生成橙黄色化合物。此化合物在490nm处有最大吸收波长，其颜色深度与粗多糖中总糖的含量成正比，可用比色法测定其含量，以此计算粗多糖中总糖含量。苯酚极易氧化，因此在测定时要避光和操作迅速。本法简单，显色稳定，灵敏度高。用乙醇沉淀所获得的多糖，常混有较多的蛋白质，降低了多糖的纯度，必须予以去除。Savage法是从多糖中去除蛋白质最缓和的方法，但要达到除尽蛋白质的目的需进行反复多次的处理，如能配合加入蛋白质水解酶（膜蛋白酶、胃蛋白酶、链蛋白酶等），使蛋白质大分子先进行一定程度的降解，再用Savage法处理，效果更好。

实验结果表明，采用水提法提取青刺果多糖，工艺简单，是一种理想的提取多糖类物质的方法。此外青刺果多糖含量较高，以青刺果为原料开发以其多糖为主要成分的药物、保健品等具有极为良好的应用前景。

【参考文献】

［1］中华人民共和国药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.广州:广东科技出版社，1995:27.

［2］黄芳,蒙义文.活性多糖的研究进展［J］.天然产物研究与开发,l999,1(5):90.

［3］范志远,习学良,欧阳和.青刺果的植物学特性及其人工栽培技术［J］.西部林业科学,2005,34(4):47.

［4］白红进,赵小亮,蒋卉.新疆刺山柑多糖的提取及含量测定［J］.食品研究与开发,2007,28(3):120.

［5］张惟杰.糖类复合物生化研究技术［M］.杭州：浙江大学出版社,1994:13.

［6］杨华,阮振寰,姚宏.百合多糖的提取及蛋白含量测定［J］.美中国际创伤杂志,2005,4(2):53.

【摘要】目的研究青刺果多糖的提取工艺并测定多糖的含量。方法采用正交实验，进行水提醇沉法的优选；以葡萄糖标准液绘制标准曲线，用苯酚-硫酸，紫外分光光度法于490nm波长处测定青刺果多糖的含量。结果多糖的最佳提取条件为100℃，料液比为1:20，提取时间8h，乙醇终浓度为85%。测定青刺果多糖含量最高达36.44%。结论最佳提取条件得率高，测定方法准确，对青刺果多糖含量的测定获得较满意结果。

【关键词】青刺果；多糖；紫外分光光度法