液基细胞学联合HPV基因分型检测在宫颈癌前病变筛查中的应用

[摘要] 目的:探讨液基细胞学检查（TCT）联合人瘤病毒（HPV）基因分型检测在宫颈癌前病变筛查中的作用。方法：对我院2009年6月至2009年12月门诊TCT为非典型鳞状上皮细胞（ASCUS）及以上的患者行HPV基因分型检测。结果：（1） ASCUS及以上患者同时合并HPV阳性者共116例，其中ASCUS、LSIL、HSIL、SCC的例数（阳性率）依次为69（60%）、36（31%）、6（5%）、5（4%）；116例患者中HPV高危型39例，AUSCS、LISL、HISL、SCC HPV高危型例数（阳性率）依次为16（23%）、14（39%）、4（67%）、5（100%），显示SCC与HPV高危型感染密切相关。（2） HPV高危型39例，平均年龄42.1岁；HPV低危型77例，平均年龄33.5岁；两者比较有显著性差异。结论：TCT与HPV基因分型检测是筛查宫颈病变的有效方法，对患者的随访具有重要意义。

［关键词］ 液基细胞学； 人瘤病毒； 宫颈病变； 诊断

［中图分类号］ R711.32 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1671-7562（2011）01-0045-03

doi:10.3969/j.issn.1671-7562.2011.01.013

［收稿日期］ 2010-09-27 ［修回日期］ 2010-12-05

［作者简介］ 姜清明（1971-）,男,江西南昌人，主管检验师。

Application of thinprep cytologic test combined HPV-DNA checking

in cervical screening of precancerous lesions

JIANG Qing-ming

（Department of Laboratory, the Second People's Hospital of Shaoguan City, Shaoguan 512028， China ）

［Abstract］ Objective: To discuss the application of thinprep Cytologic Test combined HPV-DNA checking in cervical screening for precancerous lesions. Methods: HPV-DNA checking was performed in patients in our hospital who underwent TCT and showed positive（ASCUS and above）during June 2009 through December 2009.Results: （1） The number of TCT positive combined HPV infection was 116, including ASCUS 69（60%）, LSIL 36（31%）, HSIL 6（5%）, SCC 5（4%）. 39 out of 116 cases were the highly risky type of HPV, with the positive rates 16（23%）, 14（39%）, 4（67%） and 5（100%） respectively in AUSCS, LISL, HISL and SCC, indicating SCC closely correlated with high risk type of HPV infection. （2） The average age of the 39 high risk type of HPV infection cases was 42.1, while it was 33.5 in the 77 low risk type of HPV infection cases, which showed a significant differences. Conclusion: TCT and HPV-DNA checking in cervical screening for precancerous lesions is an effective method, which has a great significance to the following up patients.

[Key words] thinprep cytologic test； human papillomavirus； cervical lesions； diagnosis

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，全世界范围内其发病率和死亡率仅次于乳腺癌［1］。人瘤病毒（human papillomavirus，HPV）的持续感染是癌前病变及宫颈癌发病的重要致病因子［2］。本研究将宫颈液基细胞学检查（thinprep cytologic test，TCT）联合HPV基因分型检测用于HPV感染与宫颈癌及癌前病变的早期诊断，以期降低宫颈癌的发生率。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2009年6月至2009年12月在我院行TCT结果为非典型鳞状上皮细胞（atypical squamous cells of undetermined signification，ASCUS）及以上的患者共340例，年龄19～72岁，平均39.7岁。排除急性生殖道炎症，至少半年内未进行任何宫颈病变诊治处理，所有患者均进行HPV基因分型检测。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂与仪器 TCT仪，购自美国新柏氏公司；HPV分型基因芯片试剂盒购自深圳凯普生物技术有限公司;电子阴道镜为SLC-2000B型。

1.2.2 液基细胞标本采集及处理 采用专用塑料刷收集宫颈外口和颈管的脱落细胞，将收集的细胞洗入盛有Thinprep细胞保存液小瓶中，保存液中的标本经Thinprep 2000系统程序化处理（将标本中的黏液、血液和炎症细胞与上皮细胞分离，经高精密度滤器过滤后转移到静电处理过的载玻片上），制成直径为2 cm的薄层细胞涂片，95%酒精固定，巴氏染色，中性树胶封片。

1.2.3 HPV检测实验方法 采用凯普HPV核酸扩增分型检测系统进行21种HPV基因亚型的检测，将剩余在Thinprep细胞保存液小瓶中的标本移入1.5 ml微量离心管中，14 000 r・min－1离心5 min，弃去上清液，保留管底的细胞块，加入50 μl裂解液悬浮沉淀，100 ℃水浴加热15 min，14 000 r・min－1离心5 min，取上清液进行PCR扩增、杂交、洗膜及显色。检测高危型亚型16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68和低危型亚型6、11、42、43、44、CP8304等21种基因型。

1.3 观察指标及判定方法

1.3.1 细胞学诊断标准 采用2001年TBS诊断标准［3］,包括正常范围内（within normal limit， WNL）、意义不明的ASCUS、低度鳞状上皮内病变（low grade squamous intraepithelial lesions， LSIL）、高度鳞状上皮内病变（high grade squamous intraepithelial lesions， HSIL）及鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma， SCC），其中ASCUS、LSIL、HSIL及SCC为细胞学检查阳性。

1.3.2 HPV-DNA扩增结果判定 倒去显色液，用清水冲洗1次膜条，肉眼观察检测结果，HPV单一感染时，在膜芯片上相应HPV亚型探针位点处可见到1个蓝色斑点，双重或多重感染时在膜芯片上可见到两个或两个以上的显色斑点。

1.4 统计学处理

采用SPSS 13.0统计软件包，行χ[WTBZ]2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 TCT结果

TCT阳性合并HPV感染者共116例，ASCUS、LSIL、HSIL、SCC的阳性例数及阳性率详见表1。

表1 TCT结果

注：各组间阳性率比较，P＜0.05

2.2 TCT阳性时HPV高危型感染情况

116例TCT阳性标本中HPV高危型39例，阳性率34%。不同类型标本HPV高危型感染情况检测结果显示，ASCUS、LSIL、HSIL、SCC各组间HPV高危感染率有明显差异（P＜0.05），见表2。

表2 TCT阳性时HPV高危型感染情况

注：各组间HPV高危感染率比较，P＜0.05

2.3 TCT阳性时HPV低危型组和高危型组的比较

HPV低危型组共发现ASCUS 53例，LISL 22例，HSIL 2例，SCC 0例。ASCUS与LSIL患者多分布于HPV低危型组，HSIL与SCC患者多分布于HPV高危型组，同时提示SCC与HPV高危型感染密切相关。见表3。

表3 TCT阳性时HPV低危型组和高危型组的比较

a 与ASCUS+LSIL比较， χ212.65, P＜0.005

2.4 TCT阳性时HPV低危型组和高危型组发病年龄的比较

HPV低危型多分布于30岁以下患者，高危型多分布于30岁以上患者，两者比较有显著性差异（P＜0.01），见表4。

表4 TCT阳性时HPV低危型组和高危型组发病年龄的比较

a 与≤30岁者比较， χ28.40, P＜0.01

3 讨 论

宫颈癌是目前唯一可以经过医学干预使其发病率和病死率下降的人类恶性肿瘤，早期发现与及时治疗癌前病变是防止宫颈癌发生的关键。HPV感染是宫颈癌重要的致病因子。传统的巴氏涂片法由于取材、制片、诊断等方法本身的局限性导致较高的假阴性率，已逐渐被TCT技术替代［4］。本研究通过TCT检测共搜集ASCUS及以上患者340例，其中HPV阳性者116例，阳性率34%。HPV基因检测是直接针对病因的检查，本研究发现，HPV低危型多分布于ASCUS与LSIL患者，高危型多分布于HSIL与SCC患者，两者比较有显著性差异（P＜0.005），说明HPV感染危险类型与细胞学分级一致，低危型者细胞分化好，高危型者细胞分化差，5例SCC患者均为HPV高危型，与杨毅等［5］报道的HPV感染与CIN病变级别类似。

HPV低危型多分布于30岁以下患者，且感染率高，高危型多分布于30岁以上患者，两者比较有显著性差异（P＜0.01），说明HPV感染危险类型与患者年龄有关，30岁以下年轻患者多为低危型，30岁以上患者高危型明显增多，其中31～50岁患者高危型的比例最高，与临床上宫颈癌患者的发病年龄多位于该年龄段相符合，高危型以HPV16、HPV58、HPV52亚型为多，与Lin等［6］报道的一致。116例HPV阳性患者中35例（30.2%）患者合并多重感染。高危型及多重HPV感染可能是宫颈癌的危险及促发因素［7］。

高危型HPV病毒可以从感染到癌变的全过程中检出，并且可确定已经发生细胞形态改变者的病因；TCT能检测已经发生的细胞学改变，可判断是否进入亚临床或者临床期；两者联合既有利于预防又有利于治疗指导，所以HPV基因检测联合TCT在子宫颈癌的防治中正起到越来越重要的作用，对患者的随访具有指导意义。

［参考文献］

［1］ Ell K, VOURLEKIS B, XIE B, et al. Cancer treatment adherence among low income women with breast or gynecologic cancer: a randomized controlled trial of patient navigation［J］. Cancer, 2009,115（19）： 4606-4615.

［2］ BOSCH F X, MANOS M M, MUNOZ N, et al. Prevalence of human papilloma Virus in cervical cancer： a world wide perspective.International biological study on cervical cancer（IBSCC）Study Group［J］. J Nati Cancer inst, 1995,87：796-802.

［3］ SOLONON D, DAVEY D, KUMAN R, et al. The 2001 Bethesda System： terminology for reporting results of cervical cytology［J］. JAMA, 2001,287（16）:2140-2149.

［4］ 潘秦镜,李凌,乔友林,等.液基细胞学筛查宫颈癌的研究［J］.中华肿瘤杂志,2001,23（4）:309-312.

［5］ 杨毅,王友芳,郎景和,等.高危型人瘤病毒杂交捕获法Ⅱ评估宫颈上皮内瘤变的临床价值［J］.中国医学科学院学报,2006,（3）:395-398.

［6］ LIN M, YANG L Y, LI L J, et al. Genital human papillomavirus screening by gene chip in Chinese women of Guangdong province［J］. Aust N Z J Obstet Gynaecol， 2008,48（2）:189-194.

［7］ 廖秦平.宫颈癌病因学研究新进展［J］.中国妇产科临床杂志,2003,4（4）:243-245.