液相色谱法测定腐竹中甲醛次硫酸氢钠

摘要：建立了衍生高效液相色谱法测定腐竹样品中甲醛含量的分析方法。该方法中样品经酸性溶液提取甲醛次硫酸氢钠分解得到甲醛，与衍生剂2，4-二硝基苯肼发生反应，经优化实验确定衍生时间为20min效果最好，正己烷提取衍生产物，利用高效液相色谱进行测定。测定条件流动相为乙腈-水（30 ∶ 70），流速为0. 8 mL・min - 1。方法在0. 00 ～ 0. 80 mg /L 范围内线性关系良好，相关系数为0.9998。粉条样品的加标回收率为93%～ 95%，RSD 为0.80%～ 1. 4%，检出限为0. 035 μg /g. 结论：可满足腐竹样品中甲醛和吊白块测定的要求。

关键词：腐竹 高效液相色谱 甲醛次硫酸氢钠

1、引言

甲醛次硫酸氢钠（NaHSO2CH2O・2H2O）俗称“吊白块”，是一种白色块状或结晶性粉粒的有机化合物，在60℃以上即可分解出甲醛和二氧化硫，具有强还原性，主要应用于印染工业做拔染剂 。人若误食“吊白块”则会产生喷嚏、咳嗽、视物模糊、头晕、上腹痛、呕吐、呼吸困难等甲醛急性中毒症状，一次性食用仅10g 就会有生命危险，长期食用更是后患无穷 。国家已明令禁止将“吊白块”加入食品中，但近年来仍有一些不法商贩在经济利益的驱使下在生产面粉、腐竹、粉丝等过程中掺入“吊白块”，严重损害了消费者的身体健康。本文利用高效液相色谱方法，对腐竹样品进行了甲醛含量测定。

2、材料与方法

2.1仪器与试剂

高效液相色谱；高速离心机；恒温水浴锅。

盐酸-氯化钠溶液：称取20g氯化钠于1000mL中，加60ml37%盐酸

磷酸氢二钠溶液（质量分数 18%）

衍生剂：2，4-二硝基苯肼200mg溶于100ml乙晴中

甲醛标准液（40μg/ml）。

2.2试验分析

2.2.1 样品处理

将样品用组织捣碎机捣碎成粉状，取样品约5克于150ml具塞三角瓶中，加入50ml盐酸-氯化钠溶液，置于振荡机上振荡提取40min。将提取液倒入离心管中，于4000r/min离心30min，上清液加活性炭粉0.8-1.0g，搅拌2min，过滤，滤液待测。

2.2.2 甲醛测定

准确吸取甲醛标准使用液0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00ml（相当于0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00μg）分别加入2ml盐酸-氯化钠溶液，1ml磷酸氢二钠溶液，1ml衍生剂，补充水至10ml，盖上，摇匀。置于60度水浴中15min，取出用流水冷却至室温。准确加入5ml正己烷，将比色管横置，水平方向轻轻摇3-5次，然后静置30min，去10微升进样。以所取甲醛标准使用液中甲醛质量（微克）为横坐标，甲醛衍生物峰面积为纵坐标。

2.2.3色谱条件

色谱柱Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18（4. 6 mm × 250 mm，5 μm）； 流动相： 乙腈- 水（30 ∶ 70），等度洗脱，流速0. 8 mL /min，VWD 检测波长412 nm，不控温，进样量10 μL。

3、结果与分析

3. 1 衍生剂的选择

分别进行衍生剂与衍生产物在水溶液与正己烷有机相中的溶解实验，发现2，4-二硝基苯肼与甲醛的反应产物在正己烷中的溶解度比水相中大，而试剂与甲醛的反应产物在正己烷中的溶解度小于水相中。因此实验选用2，4-二硝基苯肼试剂作衍生试剂。

3. 2 衍生反应条件

实验考察了衍生反应温度、衍生剂用量、反应时间等因素的影响。分别在25、30、40、50、60、70 ℃下进行衍生反应，产物经液相色谱分析，结果发现在50 ℃下衍生物的峰面积最大，因此确定衍生反应的最佳温度为60 ℃。分别加入0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0 mL 2，4-二硝基苯肼进行衍生反应，发现用量达到1 mL 以上时其峰面积基本不变，考虑到不同样品中的甲醛含量情况，实验选择衍生剂用量为1 mL。分别对衍生反应时间为10、20、30、40、50、60 min 时的色谱峰面积进行了考察，发现在10 ～ 20 min 内反应完全，色谱峰面积最大，反应超过20 min 后峰面积有所减少，表明衍生物在60 ℃的较高温度下会部分分解，因此最佳衍生反应时间为15 min。

3.3 标准曲线、线性范围及检出限

在10 支比色管（10 mL） 中分别加入甲醛标准使用液0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00ml mL， 按照“1. 4”实验方法衍生反应后进行色谱分析。以甲醛含量（X，μg）为横坐标，衍生物的峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准工作曲线。结果显示甲醛的质量浓度在0. 00 ～ 0. 80 mg /L 范围内线性良好，线性方程为Y =5935.1x-1.1247，相关系数为0. 999 8。以3 倍信噪比（S /N = 3）计算方法的检出限为0. 035 μg /g。

3.4 准确度与精密度

按照样品处理方法进行粉条样品加标回收率和相对标准偏差的测定，分别加入2. 0mg /L 甲醛标准使用液，使加标后样品中甲醛的含量为5. 0、15. 0、25. 0 μg /g，每个水平做5 次平行实验，结果见表1。粉条样品的平均加标回收率为93% ～ 95%，RSD 为0. 75%～ 1. 5%。

4、结论

建立了柱前衍生高效液相色谱法快速测定腐竹样品中甲醛含量的分析方法。样品经振荡提取、离心分离后采用2，4-二硝基苯肼试剂柱前衍生。该方法的衍生反应时间短，简便快捷，衍生反应时间缩短了25 min，且方法学的实验结果符合样品的分析要求。

参考文献：

[1] 任学坤.大米粉中吊白块检测方法的研究. 黑龙江农业科学，2010（ 12） ： 112～114

[2] 陈华奇. 高效液相色谱法对粉条中甲醛含量的快速检测. 分析测试学报，第30 卷 第12 期 2011年12月