OX40L和ICAM―1在子痫前期患者外周血中的表达水平及意义

【摘要】 目的：通过检测子痫前期患者外周血中协同刺激分子（OX40L）和细胞间黏附分子（ICAM-1）的水平，探讨OX40L和ICAM-1在子痫前期发生机制中的作用。方法：选择本院2014年

4月-2014年8月收治的40例重度子痫前期（重度子痫前期组）和35例正常孕妇（对照组）为研究对象，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定其血清中OX40L和ICAM-1的水平，比较两组患者细胞因子水平。结果：重度子痫前期组OX40L、ICAM-1在外周血的表达与对照组比较均有所增强，差异均有统计学意义（P

【关键词】 OX40L； CAM-1； 外周血； 重度子痫前期； 发病机制

【Abstract】 Objective：To discuss the role of OX40L and ICAM-1 in the pathogenesis of preeclampsia by examining OX40L and ICAM-1 levels in peripheral blood of patients with preeclampsia.Method：Forty cases of severe preeclampsia（the severe preeclampsia group） and thirty-five cases of normal pregnancy women（the control group） admitted to our hospital from April 2014 to August 2014 were selected as the objects，then whose OX40L and ICAM-1 levels were detected and compared by ELISA method.Result：The OX40L and ICAM-1 values of the severe preeclampsia group were significantly increased compared with the control group，the differences were statistically significant（P

【Key words】 OX40L； ICAM-1； Peripheral blood； Severe preeclampsia； Pathogenesis

First-author’s address：Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.14.022

子痫前期是妊娠期特有的高血压疾病，是指妊娠20周后出现收缩压≥140 mm Hg和/或舒张压≥90 mm Hg伴蛋白尿≥0.3 g/24 h，或随机尿蛋白（+）的症状。血压和尿蛋白持续升高，发生母体脏器功能不全或胎儿并发症时即发展成为重度子痫前期。重度子痫前期涉及孕妇的各个系统，是严重危害母婴健康的妊娠期并发症，其病因与发病机制尚未阐明。免疫学病因与发病机制是近年来国内外学者关注的重点[1]。近年来，有部分学者将免疫系统疾病的研究重点集中于协同刺激分子（OX40L）与细胞间黏附分子-1（ICAM-1）在免疫机制中的作用，研究发现OX40L在乳腺癌、原发性干燥综合征、狼疮、过敏性紫癜及Graves病等众多免疫疾病中起重要作用[2-13]。ICAM-1是细胞内信号转导中重要分子，是免疫机制中不可或缺的角色[14]。免疫系统疾病患者体内OX40L与ICAM-1的表达水平高于正常人，由此推测OX40L与ICAM-1可能参与了免疫系统疾病的发生与发展。由于众多理论研究认为重度子痫前期的发生与免疫因素有关，OX40L与ICAM-1可能也参与了重度子痫前期的发生与发展。目前尚未有文献报道OX40L与重度子痫前期的关系。本研究利用已建立的特异性检测人OX40L和ICAM-1的ELISA试剂盒检测40例重度子痫前期患者和35例正常妊娠孕妇外周血中OX40L和ICAM-1的水平，探讨OX40L和ICAM-1在子痫前期发生发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年4月-2014年8月山西医科大学第一医院产科收治的重度子痫前期患者40例为重度子痫前期组，同期正常妊娠晚期孕妇35例为对照组。重度子痫前期组的纳入标准为：单胎妊娠，诊断为重度子痫前期，无妊娠合并症，既往无高血压史、肾病史与糖尿病史。重度子痫前期的诊断标准参照《妇产科学》（第8版）[15]。对照组的纳入标准为：单胎、足月妊娠，无妊娠并发症与合并症，新生儿体重正常、无窒息。两组孕妇的年龄、孕周比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法 所有研究对象均空腹取静脉血3 mL，所得样本以2000 r/min、15 min离心分离血清后将血清保存于-4 ℃冰箱待测。本试验采用双抗体夹心ELISA检测法：用抗人sICAM-1单克隆抗体预包被酶标板，加入适度稀释的样本和标准品。其中的sICAM-1会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的sICAM-1抗体，抗人sICAM-1抗体与结合在单抗上的人sICAM-1结合而形成免疫复合物，洗去游离成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有sICAM-1，辣根过氧化物酶会使无色的显示剂现蓝色；加终止液变黄。在450 nm下检测OD值，sICAM-1浓度与OD 450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出标本中sICAM-1浓度。同理测定血清中OX40L。试剂由上海西唐生物科技有限公司提供。

1.3 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计学分析，计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验，相关性分析采用Pearson积差相关，以P

2 结果

在重度子痫前期组和对照组中均检出了OX40L和ICAM-1，这两个因子在两组中均有表达。重度子痫前期组的OX40L和ICAM-1水平较对照组均明显增加，差异均有统计学意义（P

3 讨论

OX40/OX40L是一对重要的协同刺激分子，在机体的免疫应答和多种疾病中，其相互作用能促进CD4+T细胞的活化、增殖、迁移，延长其寿命，并促进生发中心的形成和DC的分化成熟[16]，OX40L协同刺激T细胞的活化，促进B细胞产生高效价抗体和类别转换，介导OX40+T细胞向炎性反应部位浸润。OX40/OX40L在机体的免疫应答和多种疾病中起重要作用，通过干预其相互作用所进行的免疫治疗已在许多动物模型上取得非常好的疗效。OX40属于肿瘤坏死因子受体超家族，它的作用仅限于激活T细胞和它的表达方式。OX40对于T细胞与DC细胞间相互作用及T细胞与记忆性T细胞的增殖有至关重要的作用。OX40的配体（OX40L）的表达不仅在树突状细胞，而且在其他细胞，如B细胞、血管内皮细胞、自然杀伤细胞和肥大细胞。OX40L广泛分布的病理生理意义需要进一步研究，特别是血管内皮上表达的OX40L可能在炎症性血管炎及动脉粥样硬化中发挥作用。最近的研究及动物模型表明OX40L可能参与了许多疾病的病理生理过程。封闭OX40/OX40L的相互作用已被证明可以预防、治愈或改善这些疾病。相反，激活OX40可能打破机体对肿瘤细胞的耐受进而导致肿瘤的发生。许多研究表明OX40L在乳腺癌、原发性干燥综合征、狼疮、过敏性紫癜、支气管哮喘、皮肤病及Graves病等众多免疫疾病中都有升高趋势。ICAM-1（intercellular cell adhesion molecule-1，即细胞间黏附分子-1），又叫做CD54，属于黏附分子中免疫球蛋白超家族（IGSF）中的成员，是介导黏附反应重要的一个黏附分子[17]。ICAM-1在静息的血管内皮细胞（VEC）上呈低水平表达，通过与血管内皮细胞表面上的特异性受体结合而发挥其生物学活性。ICAM-1在稳定细胞间相互作用起到重要作用，并促进白细胞和内皮细胞的迁移。ICAM-1不但可以促进炎症部位的粘连，还可以控制肿瘤恶化和转移，并且在调节机体免疫反应中起到重要作用。ICAM-1与其受体特异性的结合，促使了白细胞、炎症细胞和肿瘤细胞等与内皮细胞间的黏附作用增强，促进内皮细胞活化，使得它们变得更容易穿透内皮。细胞间黏附分子介导细胞与细胞间或细胞与基质间相互接触和结合，从而参与了细胞的信号转导与活化、细胞组织生长及分化、免疫应答、炎症反应、血管生成及肿瘤转移等生理病理过程。

在本研究中重度子痫前期组OX40L水平明显高于对照组，比较差异有统计学意义（P

重度子痫前期组ICAM-1水平与对照组比较，差异有统计学意义（P

正常妊娠是一种“特殊Th2现象”，即妊娠期母体是趋向于Th2型细胞因子参与的体液免疫，而避免了Th1型细胞因子参与的细胞免疫[18]。而重度子痫前期患者机体内Th1/Th2免疫状态失衡，表现为Th1/Th2免疫状态向Th1漂移[15]。OX40/OX40L是一组双向信号，主要通过影响其介导产生的细胞因子，进而影响CD4+T细胞的分化。对CD4+T初始T细胞，在中性环境下，它促进CD4+T初始细胞向辅助T细胞2（Th2）方向分化，然而在抗原刺激下，它促使CD4+T初始细胞分泌IL-12、IFN-α，可促进其向Th1方向分化，抑制向Th2方向分化[19-21]。处于可逆期的单核细胞来源MΦDC，在OX40/OX40L信号作用下使MΦDC细胞膜分子CD80、CD86、CD54、CD40表达上调。OX40/OX40L除发挥共刺激信号作用之外，还介导了T细胞和内皮细胞间的黏附[22-23]。在重度子痫前期患者体内OX40/OX40L受到抗原的刺激，促使CD4+T初始细胞分泌IL-12、IFN-α，促进其向Th1方向分化。在其信号作用下并促进了MΦDC细胞膜分子CD54（ICAM-1）的表达，进而介导Th1细胞与内皮细胞的黏附，促进内皮细胞活化，使其通透性增强，进而使Th1细胞向炎性部位游走发挥作用。

子痫前期的治疗目前仅局限于对症支持治疗，延长患者孕周，病情加重时终止妊娠，尚无一种从根本上控制其发病的手段，所以研究清楚子痫前期的发病机制是为子痫前期患者及其胎儿带来莫大希望及帮助的办法。在未来的研究中，可以增加轻度子痫前期组及子痫组进一步研究这两种因子在此种疾病中的作用；可以通过阻断OX40与OX40L抗原抗体反应或阻断ICAM-1介导的信号转导，甚至在高水平层次敲除OX40L和ICAM-1的基因，负调控其转录水平等来延缓或阻止子痫前期的发病。许多因子已被证实与子痫前期的发生有关，如Th1/Th2的比例平衡、Th17细胞与Treg细胞的免疫调节、Foxp与T-bet均与子痫前期有关，或许这些因子以及OX40L与ICAM-1之间有着内在的联系，然而目前尚无此类文献报道，或许在未来的子痫前期机制研究中可以明确这些因子相互之间的作用，进而指导临床工作中子痫前期的检验与治疗。

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（收稿日期：2015-11-20） （本文编辑：刘蕾）