初发和复发生殖器疱疹患者NK\LAK细胞活性和T细胞亚群的比较

【摘要】 目的比较初发和复发生殖器疱疹患者NK、LAK细胞活性和T细胞亚群的变化,探讨免疫功能与生殖器疱疹初发及复发之间的关系。方法 对复发组、初发组的患者及正常对照组人群,检测NK和LAK细胞活性和T细胞亚群。结果 初发组和复发组的NK活性比正常组分别降低了28.2%和27.6%,经统计学处理有显著性或极显著性差异(P

【关键词】 生殖器疱疹;初发;复发;免疫功能;T细胞亚群;NK细胞;LAK细胞

作者单位:523721广东省东莞市塘厦医院(满洁 倪吉志 王雪宁 骆玲华 陈艳清 杨少强 谢国烈 陈伟俊);东莞市凤岗医院(王建勇)

生殖器疱疹(genital herpes,GH) 是有Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2) 感染引起的一种疾病, 由于HSV-2 在人体内不产生永久性免疫力,是一种常见的难治愈的性传播疾病,随着性传播疾病发病率的上升而逐渐增多。该病复发率高,一年内的复发率约为60%,在女性可引起不孕、流产或新生儿死亡。而HSV-2与女性宫颈癌的发生密切相关,还能激活HIV复制,增加 HIV感染机率[1]。大量研究证实,该病原发感染与细胞免疫功能低下有关,如免疫缺陷的患者皆易并发单纯疱疹。因此,预防复发及控制该病的流行显得非常重要。通过测定在初发和复发生殖器疱疹患者外周血中NK细胞、LAK细胞活性和T细胞亚群的变化,来探讨免疫功能与生殖器疱疹初作及复发之间的关系。现报告如下。

1 资料和方法

1.1 临床资料 患者均来自广东省东莞市塘厦医院2006年5月至2008年12月门诊的病例,均经PCR检测确诊。患者中,男性生殖器疱疹主要见于包皮、冠状沟及等,女性主要见于大小和阴道口,皮损为米粒大小,簇集性分布。复发组65例,男38例,女27例,年龄20~56岁,平均31.4岁;病程20～61个月,平均42.3个月,每年发作2～6次。初发组63例,男36例,女27例,年龄19~55岁,平均30.7岁。所有患者治疗前2年内未系统使用免疫调节剂及糖皮质激素,且排除妊娠及哺乳期妇女、患有免疫性疾病及系统性疾病、肝肾功能及血尿常规不正常者。正常对照组46例,健康体检者,男25例,女21例,年龄19~56岁,平均33.1岁。3组在年龄、性别、文化程度等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 NK和LAK细胞活性的测定[2]按常规用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,用RPMI1640培养液洗涤3次,调整细胞密度为5×10-9/L,加入IL-2(终浓度为500 ml/L)培养72 h,即可诱生出LAK细胞。以K562细胞(本室保存)作为靶细胞,采用LDH释放法测定NK和LAK细胞的杀伤活性。

1.2.2 T细胞亚群检测 由美国BD公司提供的FACSCalibur型号的流式细胞仪测定,所用鼠抗人CD-FITC、CD4-PerCP、CD-PE及对照管PE/IgG1-FITC/IgG单克隆抗体均购自美国BD公司。由化验室专人检测,每份标本均做各项测定管和阴性对照管。操作步骤如下:①EDTA抗凝血2 ml;② 准备4支试管,每管各加入相应单克隆抗体10 μl,全血100 μl混匀,避光15 min;③加溶血素2 ml避光10 min。④300 g/r离心10 min,倾去上清液,加2 ml PBS洗1次。⑤每管加l%多聚甲醛0.5 ml。上流式细胞仪检测,收集10000个以上细胞。用计算机分析测定结果。

1.2.3 统计学方法 所得数据以(x±s)表示,采用SPSS 11.0软件进行方差分析。

2 结果

2.1 3组NK和LAK细胞活性的变化 结果见表1。初发组和复发组的NK活性比正常组分别降低了28.2%和27.6%,经统计学处理差异有统计学意义(P

表1

3组NK和LAK细胞活性的比较(x±s,%)

组别例数NKLAK

正常组462.27±0.652.46±0.53

初发组631.63±0.51*1.78±0.46*

复发组651.12±0.30**1.33±0.35**

注:与正常组比较:*P

2.2 3组T细胞亚群的变化 结果见表2。由表2可知初发组和复发组的CD+4、CD+8及CD+4/CD+8与正常组比较差异有统计学意义(P

表2

3组T细胞亚群的变化(x±s)

组别例数CD+3(%)CD+4(%)CD+8(%)CD+4/CD+8

正常组4675.4±9.644.3±5.227.4±2.11.62±0.55

初发组6373.6±8.536.3±5.7*30.4±3.2*1.21±0.47*

复发组6572.3±9.131.4±4.5*33.5±3.4**0.99±0.34**

注:与正常组比较:*P

3 讨论

临床资料表明,HSV-2是生殖器疱疹的主要病原体(>90%)。人体感染HSV-2后,病毒可长期潜伏于骶神经节中,当宿主受外伤、细菌感染、月经来潮、精神创伤、劳累及免疫受抑制等情况下,病毒可以复苏和再激活,由神经节返回经常受累部位的皮肤黏膜而出现感染复发[3],而免疫抑制或免疫缺陷可导致HSV再活动频繁[4]。由于HSV-2在人体内不产生永久性免疫,同时又可逃避宿主的防御机制,所以,由于原发感染后,当有焦虑、紧张、劳累、性生活过度、月经期、酗酒等诱因时或内分泌紊乱、应激状态等情况下,病毒被激活复制而引起该病反复发作,平均年复发5～8次。近年来,此病的发病率迅速增加,WHO估计全球每年新发生殖器疱疹病例为2000万。根据国内报道,该病已在我国存在并在性传播性疾病中占有一定的比例[5]。人体HSV-2感染后抗体的产生对消除病毒血症及限制病程起一定的作用,但不能预防感染复发,说明细胞介导的免疫似乎起着明显决定作用,而抗体反应则相对次要。

研究已经表明,本病的发生、发展与机体的免疫状态,特别是与细胞免疫功能有着密切的关系[6]。NK细胞是机体免疫系统的重要组成部分,是机体抗病毒感染的第一道防线,可直接非特异性杀伤病毒感染的靶细胞,可诱导病毒凋亡;并可分泌IL-2和IFN-γ等,发挥其免疫增强作用[7]。LAK细胞来源于NK细胞,其杀伤活性远高于NK细胞。NK细胞和LAK细胞活性降低一方面减弱了直接对病毒的杀伤作用,另一方面间接减弱了特异性T细胞介导的消除HSV的免疫应答,从而造成HSV的复制和扩散,进而导致疾病反复发作,可能是生殖器疱疹发作和不断复发的重要原因之一。T淋巴细胞是机体免疫系统最重要的一大细胞群,在正常机体内各T淋巴细胞亚群相互作用,维持着机体正常的免疫功能,当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时,可导致机体免疫紊乱,造成对病原微生物的易感性增高。

笔者发现患者的外周血NK细胞和LAK细胞所占比例显著低于正常对照组,且复发患者外周血NK、LAK细胞所占比例显著低于初发者,患者的外周血T细胞总数和正常对照组比较差异无统计学意义,而CD+4细胞、CD+8细胞所占的比例以及CD+4/CD+8和正常对照组比较差异有统计学意义,表明患者外周血NK、LAK细胞下降及T细胞亚群的变化可能是导致生殖器疱疹患者发病及复发的原因之一,因此监测NK细胞、LK细胞和T细胞亚群的变化,可为临床早期病情的判断及治疗提供依据。

参 考 文 献

[1] Auvert B, Ballard R, Campbell C,et al. HIV infection among youth in a South African mining town is associated with herpes simplex virus-2 Seropositivity and sexual behaviour.AIDS,2001,15(7):885-890.

[2] 林兰英,叶冬桂,陈保国.复发性生殖器疱疹患者NK细胞数检测及其意义.浙江临床医学,2005,7 (11) : 1146-1147.

[3] 赵辨.临床皮肤病学.江苏科学技术出版社,2001:541-546.

[4] 马黎民,李亚,孙丽.复发性生殖器疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞检测分析.岭南皮肤病学,2005,12 (3):213-214.

[5] 赵胜光,俞丽珍,周常富,等.高危人群生殖器疱疹的血清流行病学调查分析.中国实用医药,2007,2(35):42-43.

[6] 杜清标,陈玲玲,陶耕,等.生殖器疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群、sIL-2R测定及意义.齐齐哈尔医学院学报,2002,22(3):243-244.

[7] Giron-Gonzalez JA , Moral FJ , Elvira J , et al . Consistent production of a higher Th1:Th2 cytokine ratio by stimulate T cells in men compared with women.Eur J Endocrinol,2000,143 : 31-37.