反相高效液相色谱法测定接骨胶囊中阿魏酸的含量

【摘要】 目的 建立接骨胶囊中阿魏酸的含量测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法,色谱柱：hypersil c18 (4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-1%冰乙酸(33∶67),检测波长为320 nm,流速为1.0 ml/min。结果 阿魏酸在0.12～1.2 μg范围内呈良好的线性关系(r＝0.999 9),平均回收率为99.6%,rsd＝1.8%。结论 该方法简便、准确,可用于控制接骨胶囊制剂的质量。

【关键词】 接骨胶囊；阿魏酸；高效液相色谱法；含量测定

abstract：objective to establish a method for determination of ferulic acid in jiegu capsule. method the samples were determined by rp-hplc on a hypersil c18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm). the mobile phase consisted of methanol and 1% acetic acid (33∶67). the detection wavelength was at 320 nm and the flow rate was 1.0 ml/min. results the calibration curves of ferulic acid was linear in the range of 6～60 μg/ml (r＝0.999 9). the average recovery was 99.6% and rsd was 1.8%. conclusion the method is simple and accurate, which can be used for the quality control of jiegu capsule.

key words：jiegu capsule；ferulic acid；hplc；content determination

接骨胶囊是在接骨片[《卫生部药品标准·中药成方制剂》(第2册)ws3-b-0402-90]的基础上研制的新制剂,由四号铜粉、川芎、制川乌、当归、乳香(醋炙)、没药(醋炙)、自然铜(煅)7味中药组成,具有散瘀、活血、止痛的功效,临床用于跌打损伤、筋伤骨折、瘀血肿痛。阿魏酸为本品有效成分之一,且含量较高。本试验采用高效液相色谱法对接骨胶囊中的阿魏酸进行了含量测定,为控制本品的质量提供依据。

1 仪器与试药

日本岛津高效液相色谱仪lc-6a系列；lc-6a溶剂输送泵；spd-6av紫外-可见分光检测器；nasta色谱工作站；7125型定量进样阀。接骨胶囊(自制,规格：0.2 g/粒,批号070810、070812、070814)；阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110773-9910)。甲醇为色谱纯,醋酸为分析纯,水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

hypersil c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-1%冰乙酸(33∶67,v/v)；检测波长：320 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 ml/min。在此条件下,阿魏酸与其他组份分离度大于1.5,按阿魏酸峰计算理论塔板数不低于2 000,色谱峰的对称因子为0.95～1.05。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取阿魏酸对照品适量,精密称定,用甲醇配成每1 ml含0.06 mg的溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

取接骨胶囊50粒,取研细内容物约2.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-水(50∶50, v/v)25 ml,密塞,称定重量,超声处理(功率200 w,频率40 khz) 30 min,放冷,再称定重量,用甲醇-水(50∶50,v/v)补足减失的重量,混匀,滤过,取续滤液,即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备

按照处方比例和制备工艺,制备不含川芎和当归的阴性模拟制剂,照“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3 分析方法验证

2.3.1 专属性考察

取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液,在上述色谱条件下进样20 μl,记录色谱图,结果见图1。由色谱图知,阿魏酸峰保留时间约15.6 min,阴性对照样品溶液在阿魏酸峰位置无干扰峰,阿魏酸与其他组份可完全分离。

2.3.2 标准曲线制备

精密吸取阿魏酸对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、10.0 ml,分别置10 ml棕色量瓶中,加甲醇-水(50∶50,v/v)稀释至刻度,摇匀,各进样20 μl,按上述色谱条件进行测定。以阿魏酸浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,计算得回归方程：y＝82 824x－560.95,r＝0.999 9,表明阿魏酸在0.12～1.2 μg范围内线性关系良好。

2.3.3 精密度试验

精密吸取阿魏酸对照品溶液2.0 ml,置10 ml棕色量瓶中,加甲醇-水(50∶50,v/v)稀释至刻度,摇匀,进样20 μl,重复进样5次,按上述色谱条件进行测定,结果阿魏酸峰面积rsd＝1.1%。

2.3.4 重复性试验

取同一批样品(批号070810)约2 g,精密称定,共5份,按“2.2.2”项下方法操作,测定结果的rsd＝1.7%。

2.3.5 稳定性试验

取同一供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、24 h,精密吸取20 μl,注入液相色谱仪,测定阿魏酸峰面积,rsd＝1.6%,说明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.3.6 加样回收率试验

取已知含量的样品(批号070810)约1 g,精密称定,共9份,分别加入1.5、3.0、4.5 ml阿魏酸对照品溶液,按“2.2.2”项下方法操作,按上述色谱条件测定,结果见表1。表1 接骨胶囊中阿魏酸的加样回收率试验结果（略）

2.4 样品测定

精密吸取供试品溶液20 μl,按上述色谱条件测定,3批样品测定结果见表2。表2 3批样品的阿魏酸含量测定结果(略)

3 讨论

样品提取方法及条件考察[1-2]分别采用甲醇-水(50∶50, v/v)、甲醇、流动相为溶剂,分别超声提取15、30、60 min,比较阿魏酸的含量,结果表明,样品用甲醇-水(50∶50,v/v)超声提取30 min较为适宜。另外,本试验曾用甲醇-水(50∶50,v/v)加热回流,结果阿魏酸含量与超声提取30 min比较没有明显提高,但因加热回流操作繁琐,故采用超声提取为样品提取方法。

本试验采用高效液相色谱法测定接骨胶囊中阿魏酸的含量,方法简便,结果可靠,可作为该制剂的质量控制方法。

【参考文献】

[1] 孙 忠,彭 康.hplc法测定补阳还五汤中阿魏酸的含量研究[j].中医药学刊,2004,22(5)：833－834.

[2] 李 玲,王 丽.hplc测定升血灵口服液中阿魏酸的含量[j].中成药, 2004,26(12)：1077－1078.