缺铁性贫血Wistar大鼠对Hp的易感性分析

幽门螺杆菌(Hp)感染被认为是消化性溃疡和胃癌的主要危险因素之一。Hp感染可导致缺铁性贫血(IDA)[1]。近年来，Hp感染与缺铁性贫血(IDA)之间的关系越来越受到众多学者的关注[2]。然而，正常的Wistar大鼠很难被Hp感染，本研究用Hp感染缺铁性贫血的Wistar大鼠，分析其对Hp的易感性。

资料与方法

实验动物：体重180±5g的雌性Wistar大鼠24只(购自兰州大学实验动物中心)。

Hp的培养：于-80℃的冰箱中取出HpSS1.Hp11637(金昌分离株)后融化，离心2000r/3分钟。用无菌枪头吸取沉淀，将菌液接种于哥伦比亚培养基上。在37℃的恒温箱中需氧环境(5%氧气，85%氮气，10%二氧化碳)培养72小时后，取出培养基，用L环刮取透明的针尖样的菌落，用同样的方法传代3～5次后，配制成菌液。

缺铁性贫血模型的建立：采用已有的低铁饲料喂养的方法[3]，建立Wistar大鼠的缺铁性贫血模型。

实验动物处理：Hp感染组饲以清洁级饲料，缺铁Hp感染组饲以低铁饲料，两组大鼠均饮去离子水。1个月后，两组大鼠每周用Hp混合菌液1.5ml(1010CFU/ml)灌胃2次，灌胃前禁水禁食24小时，并以5% NaHCO3溶液2ml预先处理。15分钟后，再给予HpSS1和Hp11637的混合(1:1)菌液1.5ml(1010CFU/ml)灌胃。3个月后，处死两组大鼠，取出胃黏膜，观察其形态有无异常，并做快速脲素酶试验，观察脲酶试纸的颜色变化。

结 果

Hp感染组中脲素酶试验均为阴性，缺铁Hp感染组中有2只大鼠脲素酶试验为阳性。肉眼下，两组大鼠的胃黏膜均无明显异常。

讨 论

幽门螺杆菌是一种单极.多鞭毛.末端钝圆.螺旋形弯曲的细菌。长2.5～4.0μm，宽0.5～1.0μm。在胃黏膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。在固体培养基上生长时，除典型的形态外，有时可出现杆状或圆球状。幽门螺杆菌是微需氧菌，环境氧要求5%～8%，在大气或绝对厌氧环境下不能生长。幽门螺杆菌检测试剂为目前国内使用最广泛的幽门螺杆菌检测工具。许多固体培养基可作幽门螺杆菌分离培养的基础培养基，布氏琼脂使用较多，但需加用适量全血或胎牛血清作为补充物方能生长。常以万古霉素.TMP.两性霉素B等组成抑菌剂防止杂菌生长。幽门螺杆菌的全基因序列已经测出，其中尿素酶基因有4个开放性读框，分别是UreA.UreB.UreC和UreD。UreA和UreB编码的多肽与尿素酶结构的两个亚单位结构相当。幽门螺杆菌的尿素酶极为丰富，约含菌体蛋白的15%，活性相当于变形杆菌的400倍。尿素酶催化尿素水解形成“氨云”保护细菌在高酸环境下生存。此外，尚有VacA基因和CagA基因，分别编码空泡毒素和细胞毒素相关蛋白。根据这两种基因的表达情况，又将幽门螺杆菌菌株分成两种主要类型：Ⅰ型含有CagA和VacA基因并表达两种蛋白，Ⅱ型不含CagA基因，不表达两种蛋白，尚有一些为中间表达型，即表达其中一种毒力因子。现在多认为Ⅰ型与胃疾病关系较为密切。幽门螺杆菌对临床微生物实验中常用于鉴定肠道细菌的大多数经典生化实验不起反应。

Hp是一种世界范围内广泛分布的革兰阴性杆菌，发达国家5%的人口是Hp亚临床感染，发展中国家儿童Hp感染率甚至可达80%～90%[4]。与Hp感染有关的研究也成为近几年的热点，Hp感染可引起IDA。但Hp感染的模型不易建立。

本实验Hp感染组饲以清洁级饲料，缺铁Hp感染组饲以低铁饲料，两组大鼠均饮去离子水。1个月后，两组大鼠每周用Hp菌液1.5ml灌胃2次。3个月后，处死两组大鼠，取出胃黏膜，观察其形态有无异常，并做快速脲素酶试验，观察脲酶试纸的颜色变化。通过Hp感染缺铁性贫血的Wistar大鼠，得出缺铁性贫血的Wistar大鼠对Hp的易感性高于正常的Wistar大鼠。这可能与缺铁使Wistar大鼠的抵抗力下降有关。本实验一方面更好的验证了IDA与Hp感染的关系，另一方面为建立Hp感染模型开辟了一条新途径，在排除缺铁性贫血的干扰因素后可用此方法建立简易的Hp感染模型，从而进行更多的与此相关的研究。

参考文献

1 Marignani M,Delle-Fave G,Mecarocci S,et al.High prevalence of atrophic body gastritis in patients with unexplained microcytic and macrocytic anemia:a prospective screening study［J］.Am J Gastroenterol,1999,94(3):766-767.

2 白贤女,徐全宇,吕建南,主编.幽门螺杆菌的研究与进展［J］.临床误诊误治,2004,17(2):83.

3 田婷,冯楠,胡晓梅,等.Wistar大鼠缺铁性贫血模型的建立［J］.当代医学,2011,17(35):41-42.

4 陈艳,肖政.幽门螺杆菌与中青年缺铁性贫血关系的临床研究［J］.临床血液学杂志,2007,20(6):349-351.