藏药七十味珍珠丸的大鼠急性毒性实验研究

[摘要] 目的 研究七十味珍珠丸的急性毒性，为临床合理用药提供参考。 方法 大鼠在24 h内一次性灌胃给予最大剂量10 g/kg的七十味珍珠丸混悬液，观察其在14 d内所产生的毒性反应（死亡、中毒症状）及其严重程度、恢复情况、延迟反应等。 结果 未见动物死亡、中毒症状和肉眼可见的脏器异常，体重和饲料消耗量无明显变化，但部分血细胞指标（红细胞系、白细胞系）和血液生化学指标（尿素氮、葡萄糖、总蛋白和白蛋白）出现异常。 结论 大鼠经口给予七十味珍珠丸的最大给药量为10 g/kg，为成人日用剂量的600倍，安全性良好，但在临床应用时应监测血常规和血液生化学指标。

[关键词] 七十味珍珠丸；最大给药量；急性毒性；大鼠

[中图分类号] R285.5；R291.4 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）12（b）-0004-04

Study on the acute toxicity of Tibetan medicine Rannasangpei Pills in rats

XU Wenlong1 SUN Weijun1 WANG Zhang2 LIU Guangli1 XU Yuanmeng2 LIANG Yuan1

1.College of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Sichuan Province， Chengdu 611137， China； 2.College of Ethnomedicine， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Sichuan Province， Chengdu 611137， China

[Abstract] Objective To study the acute toxicity of Rannasangpei Pills， provide reference for clinical rational drug use. Methods The maximum dose of Rannasangpei Pills suspension liquid 10 g/kg was supplied to the rats by gavage for one-time within 24 h， the toxic effects （death， poisoning symptoms） and its severity within 14 days， the recovery， delayed reaction and other indexes were observed. Results There was no abnormal animal death， poisoning symptoms and abnormal organs visible to the naked eye viscera， and body weight and feed consumption had no obvious changes， but some blood indexes （red blood cells， white blood cells） and blood biochemical indexes （urea nitrogen， glucose， total protein and albumin） had abnormalities. Conclusion The maximum dose of Rannasangpei Pills supplied to the rats through mouth is 10 g/kg， which is 600 times of daily doses of adults， the security is good， but in clinical application， it is necessary to monitor the blood routine and blood biochemistry indexes.

[Key words] Rannasangpei Pills； Maximum dose； Acute toxicity； Rats

七十味珍珠丸，又Q然纳桑培，现收载于《中国药典》（2015年版），由珍珠、檀香、降香、九眼石、西红花、牛黄、麝香等组成[1]，始载于藏医古典巨著《四部医典》中，具有安神镇静、通筋活络、调和气血等作用，主要用于治疗“黑白脉病”“龙血”不调；中风、瘫痪、半身不遂、癫痫、脑溢血、脑震荡、心脏病、高血压病及神经等疾病。查阅临床和实验研究文献，七十味珍珠丸治疗缺血性脑卒中的剂量范围为2～1000 mg/（kg・d）[平均192 mg/（kg・d）]，药物剂量跨度大，用量多，增加了安全性风险。目前未见七十味珍珠丸急性毒性的公开报道，故遵照2005年原国家食品药品监督管理局公布的《药物研究技术指导原则》[2]开展相关研究，为后续开展量效关系、有效性、作用机制和血清药化、药代动力学等研究提供安全剂量范围参考。

1 材料与方法

1.1 试验药物

七十味珍珠丸，规格为1 g/丸，由甘露藏药股份有限公司生产，产品批号为14049A。蒸馏水。

1.2 动物

SD大鼠，SPF级，雌雄各半，48只，体重为180～220 g，6～8周龄，由成都达硕生物科技有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK（川）2013-24，实验动物质量合格证号：NO.0015982、0015985。实验前动物于室内适应环境饲养3 d，室内温度（25±1）℃，自由饮水，喂食辐射灭菌维持饲料，实验动物使用许可证号SYXK（川）2014-124。

1.3 试剂

血常规测试用试剂：溶血剂（批号1308014）、稀释剂（批号1307022）和清洗剂（批号1308018）均来自上海特康科技有限公司。血液生化指标测试用试剂盒均来自上海特康科技有限公司，见表1。

1.4 仪器

全自动三分群血液分析仪（型号TEK-Ⅱ MINI，上海特康科技有限公司生产）；全自动生化分析仪（型号TC6010L，上海特康科技有限公司生产）；电子称（BS-600L，上海有声衡器有限公司，量程为600 g，精确度为0.1 mg）。

1.5 实验方法

1.5.1 药液的配制 取七十味珍珠丸用研钵研碎成极细粉，再转移至小烧杯中，加入生理盐水配制成浓稠混悬液，并以灌胃针测试至吸取较难但不至于无法吸取的浓稠度为七十味珍珠丸的最大浓度药液（0.5 g/mL）。

1.5.2 预实验 取SD大鼠8只，雌雄各半，给药前禁食不禁水12 h，灌胃给药七十味珍珠丸溶液1次（给药体积为大鼠能够接受的最大容积20 mL/kg，浓度为0.5 g/mL），连续观察2 d。结果大鼠状况良好，无动物死亡，无法计算七十味珍珠丸的LD50，故正式实验以最大给药量法[3-5]进行七十味珍珠丸的急性毒性实验。

1.5.3 正式试验 取SD大鼠40只，雌雄各半，按体重分层后再随机分为空白对照组和七十味珍珠丸组，每组20只，雌雄各10只，给药前禁食不禁水12 h。空白对照组灌胃蒸馏水，七十味珍珠丸组灌胃七十味珍珠丸的最大浓度药液（0.5 g/mL），给药体积均为20 mL/kg[6]，仅给药1次。连续观察14 d，观察记录大鼠的外观、分泌物、行为活动、自主活动、中毒症状及死亡情况[7]等，同时在给药前1 d、给药当天、给药后第7天和第14天时，观察和记录各组动物的体重变化及进食情况。第14天处死大鼠前，观察未死亡动物的一般情况、天然孔道情况后，将动物腹腔注射水合氯醛麻醉，经腹主动脉取血2管，其中一管取2～3 mL抗凝处理，另一管取3～4 mL凝固后分离血清1.5～2.0 mL，立即送检，测试血常规和血生化指标[8]。

1.6 统计学方法

运用SPSS 19.0软件对实验数据进行处理，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般状况和尸检结果

30 min内两组大鼠普遍出现精神萎靡、行动迟缓，但均迅速恢复正常，饮食饮水正常，观察期内无动物死亡。此后连续14 d观察中均未见不良反应，其被毛、肤色、鼻、眼、口腔分泌物均未见异常；心血管系统、呼吸系统、运动功能、反射及痛觉未见异常，未见任何中毒症状，无动物死亡。第14天解剖所有大鼠，内部脏器肉眼未见异常。

2.2 体重及饲料消耗量变化情况

七十味珍珠丸经口一次性灌胃给予雌雄大鼠后14 d内，雌雄大鼠的体重无明显变化；空白对照组和七十味珍珠丸组大鼠的饲料消耗量均呈现先升高后降低的变化趋势，表明七十味珍珠丸对饲料消耗量的自然变化没有影响。见表2～3。

2.3 血常规

一次灌胃给予七十味珍珠丸后14 d，与空白对照组比较，雌性大鼠的红细胞数和血红蛋白含量明显减少（P < 0.05），雄性大鼠的平均血红蛋白含量和平均血红蛋白浓度、白细胞数、淋巴细胞绝对值、中间细胞绝对值、粒细胞绝对值明显降低（P < 0.01或P < 0.05），雄性大鼠的中间细胞百分比明显升高（P < 0.05）。雄性和雌性大鼠的红细胞比积、平均红细胞体积、红细胞宽度变异系数等没有明显变化。见表4。

2.4 血液生化指标

一次灌胃给予七十味珍珠丸后14 d，与空白对照组比较，雄性大鼠的尿素氮和葡萄糖含量明显降低（P < 0.01、P < 0.05），而雌性大鼠的总蛋白和白蛋白含量升高（P < 0.01、P < 0.05）。雄性和雌性大鼠的球蛋白、白球比、谷丙D氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、总红胆素、胆固醇、三酰甘油、肌酐没有明显变化。见表5。

3 讨论

七十味珍珠丸是藏医药中最具代表性的珍宝类藏成药之一，在藏族地区应用广泛，临床上一般用水或酒送服，对于藏医中“黑白脉病”及现代医学中脑卒中等疾病有着显著效果[9]。根据公开出版的文献，作者整理出七十味珍珠丸中植物类药材32种，如西红花[10]（藏红花[11]）、檀香、安息香、沉香、降香、短穗兔耳草（短穗兔草[12]）、甘草、天竺黄、木诃子、诃子、藏荆芥、荆芥等；动物类药材8种，如麝香（人工麝香）、野牛血、牛黄（人工牛黄）、羚羊角、熊胆等；矿物和宝石类药材20余种，如天然珍珠（珍珠）、九眼石、玛瑙、珊瑚、蓝宝石、猫眼石、松石[13]、青金石等；金属类药材10余种，如金、银、铜（铜灰）、天然铁[14]等；混合物1种，即佐台（坐台[15]）。

本研究结果中，七十味珍珠丸的最大给药量为10 g/kg，此剂量下未见动物死亡、中毒症状和肉眼可见的脏器异常，体重和饲料消耗量无明显变化。其成人日用剂量为1 g，即上述给药剂量为成人日用剂量的600倍。结果表明，七十味珍珠丸毒性低，服用安全。

七十味珍珠丸被公认为是治疗脑中风后遗症[16]、脑震荡[17]、阿尔茨海默病[18]及心绞痛[19]等心脑血管和神经系统疾病的有效方剂，其组方中含有大量矿物类元素，如Cd、Pb、Hg等[20-21]。索有瑞等[22]在模拟人工胃液在动物体内，发现七十味珍珠丸中重金属元素汞、砷、铅、镉等吸收较少，大部分排出体外，机体内无明显长期蓄积性毒性。李天才等[23]对七十味珍珠丸中矿物质元素在大鼠体内代谢途径的探讨中发现，绝大部分矿物质元素主要通过胃肠道代谢途径，以粪便的形式排出体外，其长期蓄积性毒性作用极低。这也与我们急性毒性实验评价的七十味珍珠丸的毒性低相符合。

此外，急性毒性实验血液测试结果表明，与空白对照组比较，七十味珍珠丸可明显降低雌性大鼠血清中红细胞数和血红蛋白含量及雄性大鼠血清中白细胞系（淋巴细胞绝对值、中间细胞绝对值、粒细胞绝对值）相关指标的水平，但均在正常范围内。该变化的机制和毒效物质基础尚不明确，可能与七十味珍珠丸所含重金属有关，但是也可能是单次试验的偶然现象，均有待进一步研究。

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（收稿日期：2016-09-08 本文编辑：张瑜杰）