卵巢癌组织与肿瘤相关巨噬细胞之间的关系及预后的影响

[摘要]目的探讨肿瘤相关巨噬细胞（TAM）与卵巢癌组织之间的关系以及对预后的影响。方法收集2010年11月～2016年7月我院手术切除、病例确诊并有完整临床资料的卵巢癌组织标本250例。采用免疫组化染色法检测TAM标志物CD68的表达量，根据检测结果分为低表达组和高表达组。分析TAM与卵巢癌发生、进展的关系。结果CD68表达量与卵巢癌FIGO分期和淋巴结转移具有相关性（P0.05）；spearman相关分析显示，淋巴结转移与CD68表达量呈正相关（r=0.742，P

[关键词]肿瘤相关巨噬细胞；卵巢癌；预后

[中图分类号]R737.31

[文献标识码]B

[文章编号]2095-0616（2016）23-220-03

卵巢癌是妇科最常见的三大恶性肿瘤之一，具有较高的发病率和死亡率。由于其发病隐匿，潜伏期无特异的临床症状且目前缺乏针对早期卵巢癌可靠的筛查手段等诸多因素，导致多数患者确诊时已是中晚期，严重危害妇女的健康和生命。分子生物学、免疫学、病毒学和基因工程等基础学科的飞速发展，为卵巢癌的生物治疗创造了条件。研究发现，肿瘤微环境中，有多种免疫细胞募集、参与肿瘤免疫，其中数量最为丰富的是肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macroDhages，TAM）[5-7]。鉴于此，本研究探讨了TAM与卵巢癌组织之间的关系以及对预后的影响，旨在为卵巢癌的早期诊断、预后评估及临床控制肿瘤提供新的方向，现报道如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

收集2010年11月～2016年7月我院手术切除、病例确诊并有完整临床资料的卵巢癌组织标本250例，年龄45～71岁，平均（60.8±5.6）岁；FIG0分期I～Ⅱ期89例，Ⅲ～Ⅳ期161例。所有患者均为初诊患者，术前为进行任何放、化疗及分子靶向治疗等，无其他免疫系统疾病。所有病例均有随访，随访时间从术后开始，随访期限到2016年.10月，最长随访时间5年，平均（2 41±1.38）年；随访方式为电话随访结合返院门诊复查。计算无进展生存时间（progression free survival，PFS）及总生存时间（overall survival，OS）。随访期间患者死亡指因肿瘤复发或转移引起的死亡，其他疾病、意外死亡不计入内。

1.2方法

1.2.1卵巢癌组织切片的制作

包埋好的组织蜡块用自动切片机按常规切成4um薄片，平放于40℃温水中，待其充分展开后，用多聚赖氨酸处理的载玻片捞取，并使其充分贴附平铺，然后置人60℃烤箱，烘烤2h，使组织薄片上的石蜡融化，水分蒸发。

1.2.2免疫组化染色采用免疫组织化学方法（SP法）检测TAM特异性单克隆抗体CD68在卵巢癌组织中的表达量，具体方法为：组织切片二甲苯脱蜡，梯度酒精水化；3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶；微波抗原修复；羊血清室温封闭2h后，加一抗4℃冰箱过夜；PBS洗涤后，加二抗37℃孵育20min；DAB显色，苏木精复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明后封片。以PBS代替一抗作为阴性对照。结果判读：CD68阳性细胞浆为黄褐色或棕褐色颗粒，表达于巨噬细胞质内；先在低倍（100倍）光学显微镜下观察整张切片，选取5个具有代表性的表达区域，在高倍镜（400倍）下进行阳性细胞计数，计数后取平均值。

1.3统计学处理

采用SPSS21.0软件对数据进行统计分析，其中计量资料以（x±s）的形式表示，计数资料以率（%）的形式表示，分别进行t检验和x2检验；CD68表达量与卵巢癌病理参数之间的相关性采用spearman相关分析。P

2.结果

2.1TAM密度与卵巢癌临床病理参数的关系

250例卵巢癌病理切片中，CD68计数3～117/HP，中位数51.46/HP。以中位数为界，将病例分为低表达区和高表达区，低表达组113例，CD68平均数为（32.24±4.18）/HP；高表达组137例，CD68平均数为（76.16±6.03）/HP。两组临床病理参数如表1所示。CD68表达量与卵巢癌FIGO分期和淋巴结转移具有相关性（P0.05），见表1。Spearman相关分析显示，淋巴结转移与CD68表达量呈正相关（r=0.742，P

2.2CD68表达量与卵巢癌患者预后的相关性

高表达组PFS.08均显著低于低表达组（P

3.讨论

卵巢癌是妇科常见生殖器肿瘤之一，也是人类恶性程度最高的肿瘤之一，其发病率仅次于宫颈癌和宫体癌位居第三位，但死亡率却高居首位。卵巢癌起病隐匿，进展快。临床研究显示，诊断为卵巢癌的患者中，75%是手术无法救治的晚期，患者5年生存率只有30%左右。卵巢癌细胞在腹腔内的广泛侵袭、转移是导致患者预后差的重要原因，其中淋巴转移是卵巢癌的重要转移方式之一。巨噬细胞是人体内重要的炎症和免疫细胞，主要来源于髓源抑制细胞，已有报道证实，TAM的浸润在不同肿瘤微环境中的分布、密度与恶性肿瘤侵袭、转移及患者的预后有关。研究发现TAM在局部微环境作用下可产生和释放生长因子、细胞因子和趋化因子参与肿瘤微血管、微淋巴管生成、基质建设，发挥免疫抑制、逃逸等作用，从而促进肿瘤发展、转移。本研究结果显示，TAM特异性分子标志物CD68表达量与卵巢癌FIGO分期和淋巴结转移具有相关性（P

综上所述，TAM水平在卵巢癌淋巴结转移及患者预后中发挥重要作用。因此，对卵巢癌患者术后病灶组织标本进行TAM计数分析，可更好地评估预后，指导临床治疗。