HPLC法测定首乌丸中大黄酸的含量

[摘要] 目的：测定首乌丸中大黄酸的含量，控制中药制剂的质量。考查制剂在储存过程中的稳定性。方法：采用Shim-pack VP-ODS（150 mm×4.6mm，5?m）色谱柱；流动相为甲醇―水（70：30，磷酸调至pH值=3）；柱温：24℃；流速：1.0ml/min；检测波长：437nm。结果：大黄酸线性范围为0.0132～0.132mg，r=0.9991。结论：采用本方法测定首乌丸中大黄酸的含量准确、灵敏度高，制剂在储存过程中大黄酸的含量稳定。

[关键词] 高效液相色谱法；大黄酸；首乌丸

首乌丸由制何首乌、地黄、牛膝（酒炙）、桑椹、女贞子（酒制）、墨旱莲、桑叶（制）、黑芝麻、丝子（酒蒸）、金樱子、补骨脂（盐炒）、莶草（制）、金银花（制）组成。本品具有补肝肾，强筋骨，乌须发功效。临床上可用于肝肾两虚，头晕目花，耳鸣，腰酸肢麻，须发早白。大黄酸为首乌丸中何首乌的活性成分。测定大黄酸的含量可反映首乌丸的内在质量。本文采用外标法测定首乌丸中大黄酸的含量，可作为控制产品质量的一种方法。

1 仪器与试剂

岛津LC-10A高效液相色谱仪；SPd-10A紫外分析仪；CTO-10AS柱温箱；DGU-12A脱气机；浙大N-2000双通道色谱工作站；KQ-250DE型数控超声波清洗器。大黄酸标准品（中国药品生物制品有限公司生产，批号为0757-201305）甲醇、四氢呋喃为色谱纯，水为二次蒸馏水，磷酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 供试样品的制备：取本品4丸，研细过80目筛，精密称取0.5g，置50mL容量瓶中，加甲醇至50mL，40。C超声提取30min，过滤，滤液定容于50mL。

2.2 色谱条件：Shim-pack VP-ODS（150 mm×4.6mm，5?m）色谱柱；流动相为甲醇―水（70：30，磷酸调至pH值=3）；柱温：24℃；流速：1.0ml/min；检测波长：437nm。进样量为20μL，流速为1mL/min。在此条件下大黄酸可与其他成分达到基线分离。

2.3 线性关系考察：精密吸取大黄酸对照品溶液0.5ml、1ml、2ml、4ml、6ml、8ml和10ml加甲醇定容于10ml量瓶中，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值对进样量进行线性回归，Y= 673755.99X-33059.11，r=0.9991，表明大黄酸在0.0132～0.132mg范围内呈现良好的线性关系。

2.4 稳定性试验：取供试品溶液按上述条件分别在0，1，2，4，8，12， 16，20h进样，供试品含量的RSD为0.83%，结果表明，供试品溶液在20h内稳定。

2.5 重复性试验：取同一批号样品6份，分别按含量测定方法进行测定，其含量均值为0.4864mg/g，RSD为1.68%（n=6）。

2.6 精密度考察： 取供试品溶液按上述条件连续进样5次，峰面积的RSD为0.78%（n=5），结果表明方法精密度良好。

2.7 回收率试验：精密称取样品（含量为0.4864mg/g）6份，每份为0.5g，分别精密加入不同量的大黄酸对照品，按含量测定方法测定，计算回收率，结果见表-1。结果表明本法回收率良好，方法可行。

2.8 样品测定：取3批样品，按2.1供试品的制备方法制成样品溶液三份备用，按色谱条件每份样品液连续进样5次进行测定，结果见表-2 。结果表明样品在储存过程中性质稳定，大黄酸的含量变化较小。

3 结论

3.1采用高效液相色谱法对本品中大黄酸含量进行测定，可有效的排除处方中其他成分的干扰，准确的测定本品中的大黄酸含量，方法简单，准确度高，因此可作为控制本品质量的依据。

3.2 从三批不同样品的含量测定结果可知本品在储存的过程中性质稳定。

参考文献：

[1]郭青，鲁静；高效液相色谱法测定何首乌及其炮制品中蒽醌类成分的含量；药物分析杂志[J]2000年05期.

[2] 国家药典委员会编，中华人民共和国的药典，2010版第一部，北京，化工出版社.