梵净山野生鱼腥草叶总黄酮含量的测定研究

摘要 以芦丁为标样，选择测定波长为502 nm，用分光光度法测定鱼腥草叶总黄酮含量。结果表明：在8.12～48.72 μg/mL范围内，芦丁浓度和吸光度呈良好的线性关系（R2=0.999 8），测定的平均回收率为99.96%，精密度试验RSD=0.41%，重现性试验RSD=0.5%。该方法精密度高，结果稳定可靠。

关键词 鱼腥草叶；分光光度法；黄酮含量；梵净山

中图分类号 S567.23 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）19-0084-02

鱼腥草为三白草科多年生草本植物，又名蕺菜、折耳根，其味辛，性寒凉，能清热解毒，健胃消食，用于治疗痔疮便血、脾胃积热等，内服外用或民间多种食疗方法使用均疗效确切[1]。鱼腥草的主要功能成分是黄酮类化合物及挥发油[2]，且鱼腥草叶中黄酮含量最多，远远高于鱼腥草的根茎部分[3]。

但在贵州省许多山区人们在食用鱼腥草时只食用鱼腥草根茎而不食鱼腥草叶，浪费了许多鱼腥草的药用价值。通过分光光度计测定梵净山野生鱼腥草叶中的黄酮含量，加大人们对梵净山野生鱼腥草叶药用价值的了解，为人们研究梵净山野生鱼腥草叶提供理论依据，现将研究结果总结如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

鱼腥草叶：采于梵净山境内，弃根茎，去杂后于55 ℃烘干，粉碎备用。主要试剂：芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；无水乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠均为分析纯。主要试验仪器仪器：AL204电子天平（精确度0.000 1 g）：梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；101-3型电热鼓风干燥箱：北京科伟永兴仪器有限公司；FW80高速万能粉碎机：北京科伟永兴仪器有限公司；T6新世纪紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限公司；KQ-C玻璃仪器气流烘干器：巩义市予华有限责任公司。

1.2 试验方法

1.2.1 芦丁标准曲线的绘制。用电子天平称取放在烘箱里面烘干的芦丁20.10 mg，置于100 mL的容量瓶中。用配制的65%乙醇溶解，定容、摇匀，得到芦丁标准溶液的浓度为0.201 mg/mL。然后用10 mL的量筒分别吸取所配制的芦丁标液0、3.00、6.00、9.00、12.00、15.00 mL倒入100 mL容量瓶中，分别加入40%的乙醇溶液18 mL，加7.5%的亚硝酸钠溶液3.0 mL，将溶液轻轻摇匀，静止10 min，再加15%硝酸铝溶液3.0 mL，将溶液摇匀，再静止10 min，最后加6%氢氧化钠溶液30.0 mL，再将溶液摇匀，摇匀后将溶液静止20 min，设定紫外分光光度计的波长为502 nm，并且以502 nm的波长来测定芦丁标准溶液的吸光度，以吸光度值为纵坐标，以所量取的芦丁标准溶液浓度为横坐标，绘制芦丁标准曲线（图1）[5-6]。

1.2.2 样品溶液的制备及含量测定。在100 mL的圆底烧瓶中，加入1.005 g干燥的鱼腥草叶粉末，加入70%的乙醇溶液40 mL，在75 ℃提取2 h，溶液共提取3次，将3次提取后的滤液倒入标号的100 mL容量瓶中，定容，制得样品溶液。根据回归方程（y=11.163x+0.001 1，R2=0.999 8）计算出鱼腥草叶样品溶液的浓度，然后根据稀释倍数计算每克鱼腥草中总黄酮的含量。

2 结果与分析

2.1 最大吸收波长

由图2可知，鱼腥草叶提取液的最大吸收波长为502 nm，芦丁标准溶液的最大吸收波长为510 nm，由于芦丁标准溶液在502～510 nm波长处的吸光度相差不大，因此确定502 nm为测定波长。

2.2 样品稳定性

由试验结果可知，所测定的样品溶液在加入显色剂Al（NO3）3、NaOH、NaNO2显色后，在20～55 min内吸光度的波动不大，但是随着测定时间的增加，所测得的吸光度下降速度越来越大，因此样品的吸光度测定应在显色后的20～55 min时间内，以确保测定样液的稳定性。

2.3 加样回收率试验

由表1可知，9个样品的回收率在99.80%～100.02%之间。样液的平均回收率为99.96%，相对标准偏差为0.56%。根据所测得的平均回收率和相对标准偏差可知，试验方法测定鱼腥草叶中的总黄酮含量，回收率高，误差小，结果比较准确。

2.4 精密度

由表2可知，SD值为0.028，RSD值为0.41%，说明该试验方法的精密度高，可用于测定鱼腥草叶中的总黄酮含量。

2.5 稳定性

由表3可知， RSD值为0.5%，说明方法的重复性好，可用于鱼腥草叶中的总黄酮含量的测定。

3 结论

由试验数据和线性回归方程（y=11.163x+0.001 1，R2=0.999 8），计算出鱼腥草叶中黄酮含量为6.72 mg/g，且根据查阅资料，鱼腥草叶中还含有黄酮类化合物，其含量远远多于其根茎，并对人类一些疾病可以起到很好的预防和医治的功效。因此通过本研究，加大人们对梵净山野生鱼腥草叶药用价值的了解，为今后人们研究梵净山野生鱼腥草提供理论依据[5-6]。

4 参考文献

[1] 谭书明，叶春.鱼腥草叶总黄酮提取工艺研究[J].食品科学，2007，28（9）：192-195.

[2] 吉宏武，张连富.药食兼用资源与生物活性成分[M].北京：化学工业出版社，2005：157-159.

[3] 宗晓萍.鱼腥草有效成分的研究[D].成都：成都中医药大学，2005.

[4] 陈灿，黄璜，王林辉，等.鱼腥草的研究利用现状与趋势[J].作物研究，2002（增刊1）：51-54.

[5] 李晓蒙，徐位良，何新荣.鱼腥草药材中黄酮苷类成分的HPLC指纹图谱研究[J].广东药学院学报，2005（2）：140-142.

[6] 戴伟锋，杨国荣，，等.鱼腥草中黄酮提取工艺考察[J].云南化工，2006（1）：11-14.