荧光定量检测HBV-DNA与ELISA检测乙肝标志物模式的比较分析

[摘要]目的：探讨HBV-DNA复制水平与乙肝病毒标志物(HBV-M)模式的关系。方法：采用荧光定量探针PCR(FQ-PCR) 法检测HBV-DNA,采用ELISA检测HBV-M。结果：1 100例血清标本中,HBsAg、HBeAg、HBcAb(+)组的HBV-DNA阳性符合率达97.13%;HBsAg、HBeAb、HBcAb(+)组的HBV-DNA阳性符合率为45.95%;HBsAg、HBcAb(+)组的HBV-DNA阳性符合率为54.17%,HBsAb(+)组的HBV-DNA阳性符合率为18.42%;阴性组的HBV-DNA阳性率为11.11%。结论：FQ-PCR法检测HBV-DNA是反映乙肝病毒复制的良好标志,可以更为清楚地反映病程变化,对临床诊断治疗及判断预后具有重要的指导意义。

[关键词]FQ-PCR；HBV-DNA；ELISA；HBV-M

[中图分类号]R446[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）08（c）-110-01

荧光定量检测HBV-DNA及ELISA检测乙肝病毒血清标志物(HBV-M),对乙肝患者的诊断、治疗、预后考察与判定具有重要的意义。为探讨HBV-DNA复制水平与乙肝标志物模式的关系,我们收集了我院2001～2002年间肝病科确诊或怀疑乙肝的患者1 100例，对其HBV-DNA与HBV-M结果进行比较,现分析如下:

1 材料和方法

1.1检测对象

我院2001～2002年间肝病科确诊或怀疑乙肝的患者1 100例。

1.2检测方法

1.2.1 HBV-DNA检测采用FQ-PCR法检测,试剂由中山医科大学达安基因公司提供,检测仪器为美国PE公司5700 Sequence Detecton System,其检测灵敏度为1×103/ml，检测结果

1.2.2 HBV-M检测采用ELISA法检测,试剂由上海科华生物有限公司提供,检测仪器为anthos-2010酶标仪,操作步骤严格按试剂盒说明书进行。受检者均空腹抽血,所有实验均有效。

2 结果

检测结果见表1。

3 讨论

从结果可以看出488例HBsAg、HBeAg、HBcAb(+)组(俗称“大三阳”)的HBV-DNA检出率可达97.13%(474/488)，经统计学处理与其他各组有显著差异，说明“大三阳”患者HBV-DNA具有较高的复制水平，是具有传染性的重要标志。

518例HBsAg、HBeAb、HBcAb(+)(俗称“小三阳”) 的HBV-DNA检出率为45.95%;以往认为HBeAb阳性提示病毒复制停止或即将停止，结果却显示HBeAb（+）者仍可检出HBV-DNA，表明仍有HBV存在或复制，传染性仍强。这种阳性者除易转化为慢性乙肝外，还易发生HBV-DNA基因整合导致肝癌的发生。

48例HBsAg、HBcAb (+)组有26例HBV-DNA阳性,表明只有54.17%的HBsAg 、HBcAb (+)者有HBV存在。一般认为HBcAb (+)高滴度(1∶1000或1∶5000以上)者提示HBV复制,低滴度只表示机体既往曾感染过HBV，所以HBcAb也是反映HBV感染的重要指标[1]。

38例单项HBsAb(+)者中HBV-DNA阳性检出率为18.42%，其原因可能为以下几个方面：一是长期多次反复小剂量接触HBV未见或少见发病，而出现HBsAb(+)，但体内仍可存在低拷贝的HBV颗粒；二是可能存在其他HBV血清学亚型感染。

乙肝病毒血清标志物全阴性的18例中仍有2例检出HBV-DNA。此模式可能是由于编码HBsAg的HBV S区基因发生点突变所致，也可能因为HBV-DNA和血清标志物浓度较低，应用ELISA法无法检出[2]。可见血清标志物全阴性者中，HBV感染相当严峻。FQ-PCR具有高度灵敏性，能检出低浓度的HBV-DNA，对HBV-M检测有重要的补充作用。

FQ-PCR不仅具有普通PCR的高灵敏性，还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性，可以更为真实地反映HBV的感染和复制情况。

ELISA是临床诊断HBV感染的传统手段，它检测的是人体对HBV的免疫反应状态，而FQ-PCR则可以准确地反应出HBV-DNA的复制水平，故两种方法联用，对于临床诊断、治疗方案设计和药物疗效观察，将提供更多的参考依据。

[参考文献]

[1]姚桢.分子乙型肝炎病毒相关病学[M].北京:中国医药科技出版社,1998.52.

[2]范金水,庄辉.我国8城市HBsAg阳性和阴性乙肝患者的病毒血清型和基因型分析[J].中华微生物和免疫学杂志,1998,18(2):88-91.

(收稿日期：2007-06-03)

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