HPLC法测定金不换各部位中大黄酸、大黄素含量

摘要: 采用高效液相色谱法测定河南栽培金不换中大黄酸、大黄素的含量，色谱柱为Hy-persil C18柱（250mm×4.6mm×5μm），流动相：甲醇∶0.25%磷酸（体积比80∶20）,流速：1.1mL/min,检测波长为436nm.结果:大黄酸在0.154~1.54μg/mL、大黄素在0.412~2.06μg/mL范围内其峰面积积分值与质量浓度之间呈良好的线性关系(r=0.9996和0.9999),平均回收率分别为100.2%、99.87% (n=6),RSD分别为1.47%、2.1%.该方法简便、准确,可用于金不换中大黄酸、大黄素含量的测定.

关键词: 金不换;大黄酸；大黄素; 高效液相

中图分类号:R 2841

文献标志码:A文章编号:1672-8513(2012)01-0006-04

Determination of Rhein and Emodin in Rumex obtusifolius L. by HPLC

DING Yanxia1，WU Hongxin2，LI Mian1，LI Yazhen1

（1. Institute of Natural Products, Henan University, Kaifeng 475001, China; 2. Hospital of Henan University, Henan University, Kaifeng 475001, China)

Abstract: The research establishes a HPLC method for the determination of Rhein and Emodin in Rumex obtusifolius L grown in Henan. Hypersil C18（250 mm×4.6mm，5μm）and mobile phase methanol-phosphoric acid(80∶20) were used. The flow rate was 1.1 mL/min and the UV detection was 436 nm. The result showed that the linear range of Rhein concentration was from 0154 μg/mL to 154 μg/mL (r=09996), while Emodin was between 0412-206μg/mL , and its linear relation was good (r=09996 and 09999). The average recovery rate was 1002%, and 9987% (n=6) with the RSD of 147% and 21%. The method is simple, accurate, reproducible and applicable to the determination of the content of Rhein and Emodin in Rumex obtusifolius L..

Key words: Rumex obtusifolius L.; Rhein; Emodin; HPLC

金不换为蓼科（Polygonaceae）植物，钝叶酸模（Rumex obtusifolius L.）的干燥根及根茎,最早出现于《中药志》，别名：土大黄（浙江）、绿当归（江西）、大晕药（四川）、血三七、化血莲（江苏）［1］.生于山脚或山坡的近水旁，主要分布于河南、江苏、浙江、江西、湖南、广东、四川［2］.文献报道及我们进行的研究都表明,金不换中含有大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等蒽醌类有效成分［3-6］.现代药理研究表明蒽醌类成分具有抗炎、抗衰老、抗肿瘤、降压、抑制心肌运动的缺血等多种药理作用［7］.但是对河南栽培的金不换中蒽醌成分的含量测定尚未见报道.本文对金不换各部位的蒽醌成分进行了含量测定，为进一步阐明金不换的药用部位及为更广泛的临床应用提供科学依据.

1 仪器与试药

材料：河南巩义采摘植物金不换，经河南大学药学院高级实验师李勉鉴定为蓼科植物钝叶酸模.

仪器：LC-10A型高效液相色谱仪；FA1004N电子天平（上海精密科学仪器有限责任公司）；循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限责任公司）；伊力特C18色谱柱.

试剂：蒽醌标准品大黄酸、大黄素（中国药品生物制品检定所提供），高效液相色谱分析所用甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：E1718897 Hypersil C18柱（250mm×4.6mm×5μm）；流动相：甲醇∶0.25%磷酸（体积比80∶20）；流速：1.1mL/min；检测波长：436nm；柱温：20 ℃；进样量：20μL.

2.2 对照品溶液制备

精密称取大黄素标准品1.03mg、大黄酸标准品0.77mg分别置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别得到大黄素标准品储备液、大黄酸标准品储备液.精密量取2种对照品储备液各2mL，置于同一个10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得混合标准品溶液.进样前用0.45μm微孔滤膜过滤.按2.1项下色谱条件进样，得对照品溶液色谱图，见图1.

2.3 供试品溶液制备［8］

精密称取金不换根茎及叶子粉末各1.0g，置100mL圆底烧瓶中加2.5mol/L H2SO4 15mL，氯仿30mL加热回流2h，用分液漏斗分取氯仿层，并用少量氯仿洗涤烧瓶，合并洗液，用无水 Na2SO脱水后，减压挥去氯仿，残渣用甲醇溶解、转移定容至10mL容量瓶中，即得供试品溶液.

2.4 线性关系考察

精密吸取混合标准品溶液2，4，8，12，16，20μL进样，以峰面积对质量浓度进行线性回归，得大黄酸的回归方程y=746962x-16002，r=0.9996，大黄酸在0.154~1.54μg/mL范围内与峰面积线性关系良好；大黄素的回归方程y=2×106x+2381.9，r=0.9999，大黄素在0.412~2.06μg/mL范围内与峰面积线性关系良好.

2.5 精密度实验

取同一浓度的混合对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积，计算RSD值，得到大黄酸的RSD=18%，大黄素的RSD=15%.

2.6 稳定性试验

取标准品溶液分别于配置后的0，2，6，18，24h进样，记录峰面积，5次测定的大黄素、大黄酸峰面积的RSD分别为22%、18%.结果表明，标准品溶液在24h内稳定.

2.7 加样回收率实验

精密量取根茎样品1.0g，按照2.3项下处理样品，然后分别准确加入对照品大黄酸0.02mg,大黄素0.05mg，混匀，共6份.测定大黄酸、大黄素的峰面积，计算其加样回收率，大黄素加样回收率平均值为1002%，RSD值为1.47%；大黄酸加样回收率平均值为99.87%，RSD值为2.1%.结果见表1和2.

2.8 样品测定

精密称取样品1.0g，按供试品溶液制备方法处理，进样前用0.45μm微孔滤膜过滤.按2.1项下色谱条件进样，结果见图2~3和表3.

3 结果与讨论

1） 采用HPLC法测定金不换不同部位中蒽醌的含量，发现每g根茎中大黄素含量为0.061~0.064mg,大黄酸含量为0.024~0.029mg，每g叶中大黄素含量为0.03~0038mg，大黄酸含量为0032~0.035mg.说明金不换的不同部位均含有大黄酸和大黄素，因此应该考虑全面应用该药材而不仅仅依照传统应用其根茎.

2） 从测定结果可以看出不同的采收时间也对大黄酸、大黄素含量有影响，3月份采收的金不换中大黄酸、大黄素含量明显高于5月份采收的金不换，因此在用药时要充分考虑采收时间.

3） 测定波长的选择及标准品峰位置的确定.对大黄素、大黄酸对照品溶液在200~700nm波长范围内分别扫描，分别在430、458nm波长处有最大吸收，所以选择在430~458nm波长内测定.同时本实验还考察了较常用的测定蒽醌的检测波长254nm，结果发现大黄素的含量明显降低.因此本实验选择436nm波长检测.

4） 本实验采取相同的实验方法及测定条件对2种成分同时测定,简化了实验步骤.本法结果准确,精密度、重现性均良好，大黄素的回收率为1002%,RSD为147%,大黄酸回收率为9987%,RSD为21%.因此该方法可作为金不换中大黄素和大黄酸含量测定的依据.

参考文献:

［1］田代华，谢宗万．实用中药辞典［M］.北京:人民卫生出版社，2002：783-785．

［2］丁宝章，王遂义，高增义．河南植物志［M］．郑州:河南科学技术出版社，1988：323-324．

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［4］郑水庆,陈万生,曾明,等.酸模属药用植物的资源利用研究概况［J］ ．药学实践杂志 ,2000, 18（5）:347-348.

［5］原源,陈万生,张汉明,等.HPLC法测定酸模属植物根中蒽醌类成分的含量［J］． 第二军医大学学报,2000, 21(10):952-954.

［6］龙云惠，田学军，黄兆龙.HPLC法测定中药萝芙种育亨宾的含量［J］．云南民族大学学报：自然科学版，2010，19（2）：137-139.

［7］张广庆，赵海鹏，王振月,等．酸模属植物的化学成分与药理活性研究进展［J］.世界科学技术-中医药现代化,2008，10（5）：89-91．

［8］王洪志, 范俊婷,刘勇，等. HPLC法测定清胰片中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的含量［J］.中国实验方剂学杂志,2008，14（9）：13-14.