ADAM12与IGF—Ⅱ联合检测与自然流产相关性研究

[摘要] 目的 探讨adam12、igf-Ⅱ联合检测与自然流产的关系。 方法 放免法、时间分辨荧光法分别检测正常妊娠、先兆流产、稽留流产组血清IGF-Ⅱ、ADAM12-S水平；原位杂交法检测绒毛组织ADAM12-S、IGF-ⅡmRNA水平。 结果 ①血清ADAM12-S、IGF-Ⅱ表达在正常妊娠、先兆流产、稽留流产依次下降，两两有显著差别（P

[关键词] 自然流产；ADAM12；IGF-II

[中图分类号] R714.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）18-0037-02

近年来，自然流产的发生率越来越高，只有很少部分可以找出明确的原因，大部分发生机制并不是十分清楚，预测方法更加缺乏，很难采取预防性治疗措施，避免不良结局的发生。近年来多项研究证实IGF-Ⅱ、ADAM12均与自然流产的发生关系密切。解整合素-金属蛋白酶12（A disintegrin and metalloproteinase 12； meltrin-，ADAM12）是一种与组织生长及器官发育相关的含锌蛋白酶， ADAM12的浓度在整个孕期随孕周增加升高，特别是早期敏感[1]。胰岛素样生长因子2（Insulin-like growth factor Ⅱ，IGF-Ⅱ）调节妊娠早期发育的多个环节，影响早期胚胎绒毛细胞滋养层的侵入、分化和胎盘形成。ADAM12-S作为一种胰岛素样生长因子结合蛋白的水解酶，对体内的IGF-Ⅱ的生物活性起着调节作用。本研究旨在探讨ADAM12与IGF-Ⅱ与早期自然流产发生的关系， 为临床探析自然流产的发病机制及早期预测方案提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2011 年4月～2012 年9 月在我院妇产科门诊行清宫术的患者，符合以下要求者纳入研究人群：1）年龄在20-35岁之间；2）停经6～10 周，B超证实为宫内单胎妊娠；3）孕前6 个月月经规则，近3个月未服用过甾体类激素药物；4）无内科疾患，外伤，精神刺激或生殖系统畸形等异常。分为三组：正常对照组35例，先兆流产组34例，稽留流产组39例。三组的年龄分别为20～34（27.22±2.89）岁、24～35（30.56±3.26）岁、21～34（29.56±2.87）岁，差异无统计学意义（P > 0.05）；孕周分别为6+6～9+2（7.86±1.02）周、7+2～9+6（8.35±1.89）、6+1～9+5（7.92±1.43）周，差异无统计学意义（P > 0.05）。

1.2 方法

1.2.1血标本采集 吸宫前10 min抽取肘静脉血5 mL，置入干燥不抗凝的试管内，以3 000 r/ min，离心15 min，获取血清置入-70℃冰箱保存，成批采用放射免疫法测定IGF-Ⅱ含量及时间分辨荧光检测法测定ADAM12-S含量。放免试剂盒由上海麦莎生物科技有限公司提供，试验步骤严格按说明书步骤进行。时间分辨荧光免疫分析采用芬兰PerKinElmer公司提供的试剂盒及其配套时间分辨荧光免疫分析Victor1420 型检测仪。

1.2.2 病理标本采集 各组于人工流产术或清宫术后留取绒毛组织以10%甲醛固定、石蜡包埋，制片厚4 μm，采用原位杂交方法测定ADAM12与IGF-ⅡmRNA的表达，并请病理专业人员双盲阅片，在光学显微镜下随机抽取5个高倍视野，Motic B5 显微摄像系统摄像，MIAS医学图像分析系统计算每个视野的平均吸光值（A），计算ADAM12与IGF-ⅡmRNA的表达水平。

1.3统计学处理

计量资料均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS16.0 统计软件包多组间F检验，以α=0.05（双尾）为检验水准，P

2 结果

2.1 血清中ADAM12-S及IGF- II的表达水平

①血清ADAM12-S表达水平在正常妊娠组（226.62±12.45）、先兆流产组（149.15±10.98）、稽留流产组（98.24±8.16）依次下降，两两相比均具有统计学意义（P < 0.05）；②血清IGF-Ⅱ表达水平在正常妊娠组（140.52±11.75）、先兆流产组（97.88±9.34）、稽留流产组（45.32±6.05）依次下降，两两相比差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2绒毛组织中ADAM12-SmRNA及IGF- IImRNA的表达水平

①绒毛组织ADAM12-SmRNA表达水平在正常妊娠组（0.87±0.12 ）、先兆流产组（0.65±0.18）、稽留流产组（0.36±0.15）依次下降，两两相比均具有统计学意义（P < 0.05）；②绒毛组织中 IGF-ⅡmRNA表达水平在正常妊娠组（0.96±0.21）、先兆流产组（0.68±0.19）、稽留流产组（0.45±0.17）依次下降，两两相比均具有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

2.3血清中ADAM12-S及IGF- II的表达水平的相关性分析

血清中ADAM12-S与IGF- II的表达水平呈正相关，相关指数为r = 0.309，P < 0.05，差异有统计学意义。

3 讨论

胰岛素样生长因子系统结构与胰岛素相似，通过自分泌或旁分泌方式发挥作用，有促进细胞繁殖、分化、生长、代谢等多种生物效应[2]，其中IGF-Ⅱ更是被认为参与了早期妊娠多个环节的调节，是胚胎发育的重要影响因子[3，4]。妊娠6周时，IGF-Ⅱ即随绒毛膜外合体滋养层渗透和浸入到母体基质，在固定绒毛的浸入性滋养层细胞柱中可见大量IGF-ⅡmRNA 表达，表达量呈梯度上升， 在前端侵入部表达水平最高， 提示IGF-Ⅱ参与着床的过程，在滋养层细胞的侵入中起一定作用[5]。McKinnon进行绒毛外滋养层细胞的体外培养实验提示绒毛外滋养层细胞位移和侵袭是由IGF-Ⅱ诱发，其诱发作用的信号传导是通过IGF-ⅡR及其他信号传导途径完成[6]，提示IGF-Ⅱ参与调节滋养细胞侵入，影响胚胎着床过程。Lopez 等[7]通过对妊娠裸鼠的研究发现，IGF-Ⅱ参与胎盘的生长机制，IGF-II在胎盘中可调控糖原合成及糖原细胞的数量，影响胎盘的生长，从而进一步影响胎儿发育。IGF-Ⅱ低水平表达时，能通过影响胎盘功能而妨碍胚胎及滋养叶的生长发育，同时炎性细胞因子分泌增多，使免疫微环境的破坏和发生异常的免疫排斥反应，如IGF-Ⅱ表达水平严重降低时甚至可能导致胚胎死亡[8]。本研究中孕妇血清及绒毛组织中的IGF-Ⅱ表达水平在正常妊娠组、先兆流产组、稽留流产组依次下降，表明孕妇血清IGF-Ⅱ低水平表达与胚胎发育不良及流产的发生密切相关， 稽留流产孕妇血清中IGF-Ⅱ表达更是显著降低。研究结果提示IGF-Ⅱ的表达水平可用来反映胚胎的发育状况，有望成为预测早期不良妊娠结局的一个敏感因子。

ADAM12是一个拥有多功能区域的蛋白，在细胞分化、黏附、融合和相互作用过程中发挥重要的作用，在胎盘组织中表达丰富，参与了滋养细胞细胞的生长、分化、融合及迁移等多个环节[9]。人ADAM12有膜结合/可溶性形式（ADAM12-L）和分泌性/可溶性形式（ADAM12-S）两种，ADAM12-SmRNA只在胎盘组织中表达，具有妊娠特异性[10]。顾茂胜等证明孕妇血清中ADAM12-S在孕早期随孕周而增加，中位数呈线性关系[11]。吴昊等证明早期先兆流产患者血清中的ADAM12-S水平明显低于同时期正常孕妇，并提出ADAM12-S有望成为自然流产早期预测指标之一[12]。本研究结果显示，孕妇血清及绒毛组织中的ADAM12-S表达水平在正常妊娠组、先兆流产组、稽留流产组依次下降，且两两相比差异均有统计学意义（P < 0.05），与其结果相符。ADAM12-S是胰岛素样生长因子结合蛋白-3（insulin-like growth factor-binding protein-stree，GFBP-3）和IGFBP-5的水解酶，IGFBP-3作为为IGF在体内的主要结合蛋白，与IGF结合使其缓慢释放从而提高IGF的生物活性[13]。ADAM12-S将IGFBP-3分解成小的蛋白水解片段，使IGFBP与IGF的结合力降低，从而影响IGF的生物活性，这可能是ADAM12参与胚胎发育调节的途径之一，两者相互作用失衡可能是导致自然流产发生的重要原因。本研究发现孕妇血清中ADAM12-S与IGF- II的表达水平呈正相关，也佐证这一观点。

早期妊娠中孕妇血清及绒毛组织中ADAM12-S与IGF- II的表达水平与胚胎发育状况密切相关，且两者之间关联紧密，两者联合检测能提高预测自然流产的敏感度，值得临床深入探讨。探究两者的相互作用机制可能为探索自然流产的发病机制提供新思路。

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（收稿日期：2013-04-01）