地茶咳喘露对免疫功能低下小鼠影响的实验研究

摘要：目的：研究地茶咳喘露对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响，并探讨其免疫作用的机制。方法：观察-生理盐水、固本咳喘片、地茶咳喘露灌胃后免疫功能低下小鼠的一般形态变化，检测腹腔巨噬细胞吞噬功能、胸腺和脾脏的重量、迟发型变态反应中左右足跖厚度差值及白细胞介素2(IL－2)的诱生水平4个指标含量或数值的变化。结果：地茶咳喘露可以增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、增加胸腺和脾脏的重量、加强迟发型变态反应及增加I-2的诱生水平。结论：地茶咳喘露能明显增强免疫功能低下小鼠的免疫能力。

关键词：免疫功能低下；实验研究；中医药疗法；巨噬细胞吞噬功能；迟发型变态反应；白细胞介素2；地茶咳喘露

中图分类号：11285.5

文献标识码：A　文章编号：1673-7717(2008)Ol-0112-03

经临床研究证实地茶咳喘露具有宣肺、化痰、止咳、平喘的功效，主治新久咳喘，用于呼吸道感染、肺炎、气管一支气管炎、支气管哮喘等呼吸系统疾病，其发病与免疫有密切的关系，多数是因免疫功能低下而发病。基于以上研究，本课题拟通过建立免疫功能低下的小鼠模型，研究地茶咳喘露对免疫功能的影响，并探讨其免疫作用的机制。

1　实验材料

1.1　实验动物NIH小鼠72只，雌雄各半，体重20g，由湖北中医学院动物实验中心提供。

1.2　实验试剂烷化剂环磷酰胺(Cyclophosphummide，cy)，批号0112025，由上海华联制药有限公司生产，武汉新特药有限公司提供。磷酸缓冲液(PBS)将磷酸氢二钠(Na2~IP04)及磷酸二氢钾(KIt2P04)按4：1的比例加入200mL蒸馏水而成，pH值为7.35。上述两种药品由武汉博士德公司提供，产品号：180043、381157。IL-2放免药盒(IL－2RIA KIT)，批号020923，由北京福瑞生物工程公司提供。肝素钠(Heparim Salt)将0.1g肝素钠粉末溶于10mL蒸馏水配制而成，pH值为5.0－7.5。肝素钠粉末由武汉亚法生物技术有限公司提供，产品号：CH0088。鸡红细胞悬液，人红细胞悬液自制。

1.3　实验用药固本咳喘片，批号：020343，江苏扬子江制药厂生产，由武汉新特药有限公司提供。固本咳喘片由《卫生部药品标准・中药成方制剂》第十一册收载，为国家基本药物。功效益气解表、健脾益肾、止咳祛痰，主治慢性支气管炎、支气管哮喘。药理研究证实固本咳喘片具有抑制支气管分泌，提高缺氧耐力及免疫增强作用。

地茶咳喘露(由矮地茶、淫羊藿等组成)，每瓶100mL，浓度为1.16g／mL，批号020417，由湖北民族学院医学院附属医院制剂室提供。

1.4　实验仪器离心机：LD5-2A型，北京医用离心机厂生产。GC一1200r放射免疫计数器，中国科学技术大学科技实验总公司中佳光电仪器分公司。天平：JN―A型精密扭力天平，上海第二天平仪器厂。

2　实验方法

2.1　动物分组　NIH小鼠72只，雌雄各半，体重(20±2)g，随机分为6组：正常对照组、模型组、固本咳喘片组及地茶咳喘露大、中、小3个剂量组，每组12只。

2.2　模型制作根据王立人等《黄芪、刺五加合剂对免疫功能调节的研究》一文建立小鼠免疫功能低下模型。除正常对照组外，其它5组小鼠均在正式实验前1、3、5天，腹腔注射cy 50m/kg，隔日1次，共3次。造模期间每天观察小鼠的行动、食欲、毛发、体形状态等(如出现萎靡、蜷缩、行动迟缓、皮毛蓬松脱落、外形明显消瘦)，并于造模结束后，从正常组和各造模组中分别取小鼠2只，处死剖取胸腺和脾脏，称重比较正常组和造模组。

2.3　治疗方法造模结束后，根据组别不同进行不同的治疗和处理。正常对照组：正常条件下喂养，不做任何处理。模型组：正常条件下饮食，不给予药物治疗。固本咳喘片组：每只小鼠灌胃给固本咳喘片悬液0.2mL(根据成人与小鼠体表面积比计算小鼠每天用量为0.0128，将固本咳喘片碾碎稀释成悬液，浓度为0.06g／mL即可)。地茶咳喘露组：每只小鼠灌胃给予地茶咳喘露0.25mL(按0.25mL／20g标准)，大剂量组每1mL含生药2.32g，中剂量组每lmL含生药1.16g，小剂量组每1mL含生药0.58g。以上各组给药时间均为7天，每日1次。

2.4　观测指标①造模及用药期间每日观察小鼠的精神状态，活动情况，毛发及饮食等情况。②腹腔巨噬细胞吞噬功能：油镜下观察小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬力(每片观察巨噬细胞200个，吞噬力=吞噬红细胞的巨噬细胞8／200个巨噬细胞)。③迟发型变态反应中左右足跖厚度差值：测量左右足跖厚度差值，每只足跖反复测3次，取平均值，并记录结果。④免疫器官胸腺和脾脏重量：处死小鼠剖取胸腺和脾脏用精密扭力天平称重，并记录结果。⑤IL一2诱生水平：用放免法检测IL-2的含量。

3　实验结果

3.1　实验结果统计方法统计数据均以x±s表示，统计分析组间比较用q检验。组间比较时，P

3.2　各组对IL-2的诱生水平腹腔巨噬细胞吞噬力左右足跖厚度差值影响的比较见表1。

由表1及结果可以看出，在IL-2的诱生水平、巨噬细胞吞噬力、左右足跖厚度差值方面，正常组与模型组比较有非常显著性差异(P

3.3　各组对胸腺和脾脏重量影响的比较见表2。

由表2及结果可以看出，在胸腺和脾脏重量方面，正常组与模型组比较有非常显著性差异(P0.05)；在脾脏重量方面，地茶中、高剂量组与模型组比较有非常显著性差异(P

O.05)，小剂量组与固本咳喘片组比较有非常显著性差异(p

4　讨论

“正气存内，邪不可干”，“邪之所凑，其气必虚”。咳喘有实证与虚证之分，正气与邪气在发病中均具有一定作用，但正气的作用是主要的，只要正气存在一时或持续性的亏损，机体就可能患病。咳喘之虚证均存在肺脾肾三脏的虚损，主要体现在三脏阳气的亏虚。现代研究发现，肺确非单纯的呼吸器官，它还具有调节血液循环(朝百脉)、协助水液代谢(通调水道)及一套复杂的免疫防御功能(卫外)，呼吸道黏膜上皮的黏液纤毛机械防御、细胞免疫、体液免疫功能是人体抵抗致病微生物侵袭的主要屏障之一。1982年及1986年全国中西医结合虚证与老年病研究专业委员会将肺气虚证的标准定为：久咳痰白、气短喘促、易患感冒。许多临床及动物实验报道都表明：肺气虚证患者或动物鼻分泌物、唾液、气管灌洗液中细胞及体液免疫功能显著下降，鼻腔及气管黏膜廓清功能受损，说明上下呼吸道免疫防御功能显著下降，这正是卫外不固、反复上感的根本原因。

中医之咳喘相当于现代医学所指的呼吸道感染、肺炎、气管一支气管炎、支气管哮喘等。研究证实以上疾病均与免疫有关系：如反复呼吸道感染(RRTI)多伴有免疫低下或缺陷，存在免疫球蛋白、Igc亚类水平降低，T细胞亚群紊乱，细胞免疫功能降低，红细胞免疫功能低下，补体含量下降，细胞因子活性降低，STL-2R降低等；肺炎患者红细胞C3b受体花环(RBC-C3bRR)明显下降，提示免疫功能低下；慢性支气管炎多伴有免疫功能低下，而免疫功能低下又加重了慢支的症状，使其更难以治愈；支气管哮喘是炎性反应所致的支气管痉挛，是高反应的致病过程，本身存在免疫功能低下。如果合并细菌、病毒感染，将加重哮喘的发作，应用激素、氨茶碱可导致免疫功能降低，使中性粒细胞的吞噬功能下降，所以在抗感染和抗喘等支持治疗的同时，给予免疫调节剂如胸腺肽(Thymosin)以提高和调整机体细胞免疫功能。

矮地茶清热利湿、止咳化痰，淫羊藿补肾阳止虚咳以治肾，二者共为君药；地龙人肝脾，重在通络平喘为臣药；苏叶、杏仁、桔梗宣肺、止咳、平喘；紫菀温润苦泄，助肺化痰止咳共为佐药；甘草调和诸药为使药。诸药合用宣开肺气，温肾通络，共奏止咳、化痰、平喘之功。

现代药理学研究表明，苦杏仁苷能明显促进有丝分裂原对小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖，苦杏仁苷在体内能增强小鼠脾脏NK细胞的活性；紫苏叶的乙醚提取物能增强脾细胞的免疫功能；桔梗可增强免疫，其水提取物可增强巨噬细胞吞噬功能，增强中性白细胞的杀菌力，提高溶菌酶的活性；淫羊藿能增强细胞免疫功能、延缓衰老和增强机体抗病能力；地龙能显著增加实验小鼠胸腺重量，增加小鼠脾有核细胞数，显著增加胸腺有核细胞数，可提高T3、T4,T5淋巴细胞及L／Tl比值，能使脾中NK细胞及AICC-活性显著增加，能使小鼠血中白细胞数增加，可提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数及外周血淋巴细胞比例；甘草中的甘草甜素能使某些免疫器官的重量增加。增强非特性免疫，甘草酸可促进Y－干扰素和IL－2的产生，增强自然杀伤细胞的活性。

从实验结果看，地茶咳喘露可以增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，增加胸腺和脾脏的重量，加强迟发型变态反应及增加IL－2的诱生水平，通过增强免疫对咳喘进行治疗。